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文档简介
1、化疗药物诱导细胞凋亡(一)肿瘤细胞总DNA提取,病理生理教研室,细胞凋亡,细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程,化疗药物诱导的细胞凋亡,细胞凋亡的过程不同于坏死性死亡,其染色质断裂,细胞核碎裂程核裂片,细胞质浓缩,细胞体积减小,细胞膜内折,整个细胞通过起泡和发芽方式形成大小不等凋亡小体。 凋亡的细胞的核DNA的断裂发生在核小体之间,因此产生的断裂DNA在电泳时会呈180-200bp整数倍大小的阶梯状条带,这是识别凋亡细胞的可靠生化特征。能诱导细胞凋亡的枉法有很多,这里主要采取化疗药物诱导细胞凋亡,化疗药物诱导细胞凋亡并产生“阶梯”效应,实验材料,He
2、pG2 肝癌细胞株,DNA提取试剂盒,移液器,EP管,PBS,低温离心机,实验步骤,在细胞悬液中加入20 l Proteinase K溶液,混匀。 加入200 l缓冲液GB,充分颠倒混匀,70放置10 min,溶液应变清亮,简短离心以去除水珠。 加人200 l 无水乙醇,充分振荡混匀15 sec,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (13,400g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。 向吸附柱CB3中加入500 l缓冲液GD (使用前请先检查是否已加入无水乙
3、醇),12,000 rpm (13,400g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中,实验步骤,6. 向吸附柱CB3中加入600 l 漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (13,400g)离心30 sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。 7. 重复操作步骤6。 8. 将吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(13,400g)离心2 min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 9. 吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 l洗脱缓冲液TE,室温放置2-5 min,12,000 rpm (13,400g)离心 2 min,将溶液收集到
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