修订植物呼吸酶地测定

1、实用标准文案 植物呼吸酶的测定 植物体内的呼吸酶，是催化植物在呼吸过程中，进行氧化还原的一些酶类。植物体内的末端氧化酶是将从基质传递来的电子，直接交给氧并产生H2O或H2O2。植物体内的末端氧化酶有抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等。这个复杂的氧化酶系统，有助于植物对不良外界环境条件的适应。 通过本实验，掌握一个简便快速测定抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的方法-滴定法测定抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性。 实验原理 1.抗坏血酸氧化酶活性的测定 抗坏血酸在抗坏血酸氧化酶的作用下，可以氧化为脱氢抗坏血酸。 抗坏血酸每脱氢抗坏血酸?/抗坏血酸?12O2以抗坏血酸为底物，加入酶的提取液，酶与底物充分反应，此

2、时抗坏血酸氧化酶将抗坏血酸消耗掉一部分，根据消耗的多少来计算酶的活性。抗坏血酸消耗的多，说明酶的活性强。 抗坏血酸的消耗量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来测定。 I的产生：KIO+5KI+6HPO3I+6KPO+3HO 222333用碘液滴定剩余的抗坏血酸： 抗坏血酸氧化酶脱氢抗坏血酸?I抗坏血酸?22.多酚氧化酶活性的测定 多酚氧化酶在有氧存在的条件下，可以将酚氧化成醌，其反应如 精彩文档实用标准文案 下： 多酚氧化酶邻醌?邻苯二酚?1/2O2邻醌再与抗坏血酸作用，将它氧化成脱氢抗坏血酸。 邻苯二酚脱氢抗坏血酸?邻醌?抗坏血酸上述反应，由于醌类物质的氧化还原电位比抗坏血酸的高（邻醌E=0.69

3、6，抗坏血酸E=0.166）。所以邻醌能夺取抗坏血酸上的氢，生成邻苯二酚。因此，多酚氧化活性的测定，参加反应的底物有两种：即邻苯二酚和抗坏血酸。多酚氧化酶的活性，也用抗坏血酸的消耗量求得。 实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料：马铃薯芽 （二）试剂 1pH6.0的磷酸盐缓冲液：A液为1/15mol/L磷酸氢二钠溶液，B液为1/15mol/L磷酸二氢钾溶液，取A液10mL与B液90mL混均即可。 20.1抗坏血酸，试验当天配制。 30.02mol/L焦儿茶酚（邻苯二酚）：称取0.22g焦儿茶酚溶于100mL水中,试验当天配制。 410偏磷酸（HPO）。 351淀粉溶液。 60.005mol/

4、L碘液：碘化钾2.5g溶于200mL蒸馏水中，加冰醋酸1mL，再加0.1mol/L碘酸钾（0.3567g碘酸钾溶于水，定容 精彩文档实用标准文案 至100mL）12.5mL，最后加蒸馏水成250mL。 （三）仪器设备 （1）研钵1个；（2）容量瓶50mL1个；（3）三角瓶50mL6个；（4）微量滴定管及滴定架；（5）移液管5mL1支、2mL2支、1mL1支；（6）恒温水浴；（7）刀片、剪子。 实验步骤 1.酶液的提取：取马铃薯2g，放入研钵中，加少量石英砂，加pH6.0的磷酸盐缓冲液约5mL，迅速研成匀浆，研碎后迅速放入50mL容量瓶中，把全部材料都用蒸馏水洗入50mL容量瓶中，最后用缓冲液定

5、容至刻度。 在室温下，每隔3min摇动一次，共摇5次，共计15min，再静止20min，其上清液即为酶的提取液。 2.酶活性的测定：取6个50mL干净干燥的三角烧瓶，标上号码，除酶液外，按下表准确加入各试剂： 表酶活性测定加入的各试剂量 瓶号 缓冲液 抗坏血酸 焦儿茶偏磷酸 酚 酶液 偏磷 酸备注 1 4 2 - - 2 1 测抗坏血酸氧化酶 2 4 2 - - 2 1 测抗坏血酸氧化酶 3 4 2 - 1 2 - 空白测定 精彩文档实用标准文案 测抗坏血酸氧化酶及多1 2 2 1 - 4 4 酚氧化酶 测抗坏血酸氧化酶及多1 2 1 - 4 5 2 酚氧化酶 空白测定6 2 4 2 1 1 先在各瓶中加缓冲液、抗坏血酸及焦儿茶酚，并向（3）及（6）号瓶加入1mL偏磷酸，准确记录加入酶液的时间。反应3min后立即按原次序向（1）、（2）、（3）、（4）号烧瓶中加入偏磷酸1mL，停止酶的活动。然后加入3滴淀粉溶液做指示剂，用0.005mol/L碘液滴定。滴定到出现浅兰色为止。记录消耗碘液的数值。 四、结果计算 酶活性以每克鲜组织，每分钟氧化抗坏血酸的毫克数表示。计算方法如下： （1）抗坏血酸氧化酶活性： 式中：0.44每毫升0.005mol/L碘液氧化抗坏血酸毫克数。 （2）多酚氧化酶活性： 精彩文档实用标准文案 由于多酚