兽医临床进展Word编辑

1、传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！兽医临床医学研究进展王 米1，2 胡元亮2 （1中国农业科学院上海兽医研究所 上海 200241 2 南京农业大学中兽医学研究室 江苏南京 210095）摘要：兽医临床工作的基本任务，在于防治动物疾病，保障畜牧业和养殖业的健康发展。正确的诊断是制订合理、有效防治措施的根据。随着近代理论科学与技术科学的新成就在诊断学上的运用，显著促进了兽医临床学科的发展，提高了诊断水平和工作效率。本文综述了分子生物学技术及B型超声诊断技术在兽医临床上的应用研究进展。关键词：分子生物学技术；B型超声诊断技术；兽医临床医学The Development of V

2、eterinarian Clinical MedicineWang mi1,2 Meng xinyu1 Yang ruile1 Hu yuanliang2 Xue feiqun11.Shanghai Veterinary Research Institute of Chinese academy of agricultural sciences,Shanghai 200241;2.Institute of Traditional Chinese Veterinary Medicine, Nanjing Agriculture University ,Nanjing 210095Abstract

3、: Prevention and cure animal diseases ,ensuring husbandry farming healthy development is basic task of Veterinarian clinic. Correct diagnosis is very important for taking reasonable and effective measures. With the development of modern theory and technology science, much new technology was applied

4、in veterinarian clinical diagnosis, which remarkably promoted the development. This paper was summaried the development of Veterinarian clinical medicine.Key words: Biological technology B-mold ultrasoundscanner Veterinarian clinical medicine兽医临床工作的基本任务，在于防治动物疾病，保障畜牧业和养殖业的健康发展。防治动物疾病，必须首先认识疾病。正确的诊断是

5、制订合理、有效防治措施的根据。所以，诊断是防治疾病的前提，是临床工作的基础。近代理论科学与技术科学的新成就在诊断学上的运用，如分子生物学技术与大量精密的诊断仪器，如心电图机、内窥镜、电子显微镜、B超、X光、CT、核磁共振和放射性同位素等，促进了本学科的发展，提高了诊断水平和工作效率。今天，生物技术不断向深度和广度迅猛发展。它的发展与动物疫病的诊断、预防和治疗技术之间已并无明显的界限，并且起了不可替代的作用1。生物大分子结构和功能与临床疾病的发生有着密切的关系，研究生物大分子结构和功能的关系，为利用分子生物学理论和技术探索某些疾病的机制提供了有益的参考2。而大量精密仪器在兽医临床上的应用也促进了

6、本学科的发展。1 分子生物学技术在临床兽医学上的应用1.1核酸的分子杂交基因探针技术基因探针技术是临床应用最早的分子生物学技术，至今仍长盛不衰。它不仅用于微生物等基因鉴定方面，而且在印迹技术（如Southern blot）方面以及新近成为热门的基因芯片技术方面都有广泛应用，不少探针已商品化3。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！1.2 PCR技术聚合酶链反应(polymerase chain reaction， PCR)技术是特定DNA片段体外扩增的新技术4，5，可以在短时间内大量复制出原来很少的DNA。其作为一种新的疾病检测手段，具有灵敏、特异、简便、快速等优点，可以从一根

7、毛发、一滴血、一个细胞中扩增出足量的DNA供分析诊断。PCR技术目前已广泛应用于对突变基因和癌基因的检测，包括从基因组DNA、RNA和cDNA直接克隆目的基因，体外诱变和DNA工程，传染病原分析，基因序列变异分析等方面。在临床上适用于细菌，病毒，支原体、螺旋体等病原体感染引起的疫病的诊断。应用PCR技术可检测鸭的疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)6，鉴定类志贺氏菌素型变异体(SLT-e)大肠杆菌、沙门氏菌和绿脓杆菌外毒素A(ETA)7-9。多联PCR可对引发猪繁殖障碍有关病毒：日本乙型脑炎病毒(JEV)，猪细小病毒(PPV)，猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PR

8、RSV)及伪狂犬病病毒(PRV)进行鉴定，达到诊断的目的10。PCR还可检测猪伪狂犬病及禽腺病毒11。最新报道表明，该技术还可用于检测诊断传染性法氏囊病病毒(IBDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、禽白血病病毒(ALV)等病毒性疾病12-14。1.3 DNA(基因)酶切图谱分析DNA(基因)酶切图谱分析是指用特定的限制性酶消化DNA长链后，可以得到核酸的片段。由于不同的DNA碱基序列不同，用识别某一特定碱基序列的限制酶进行酶切时，所得到的DNA链片段的长短也不一样。片段的长短可用凝胶电泳进行分离后，与一系列已知分子量的标准参照物进行比较，大体计算出各片段的分子量或碱基数。该法已广泛应用于临

9、床基因诊断。临床和科研中沿用多年的DNA限制性片段长度多态性分析(RFLP)，就是本法的具体应用。1.4 单链构象多态性(SSCP)分析单链构象多态性（single strand conformation polymorphism,SSCP）分析是一种简单、有效、快捷、廉价的检测非常少量的基因组DNA或cDNA突变的技术。其原理及技术要点是:由于单一碱基的替代，引起DNA链构象改变。后者可导致DNA在非变性凝胶电泳中出现迁移率的改变。因此，首先用PCR技术扩增所检验的模板，然后进行变性、电泳、显示。根据显示的条带与标准参照物对比，即可判断所测DNA链是否有变异。由于该方法具有快速、简便、灵敏度

10、高及适用于大群体筛选等优点,因而该技术广泛用于各类群体点突变的检测,包括人类遗传病基因突变的探测、癌基因或抑癌基因的突变探测等。在动物中,该技术也已应用于小鼠、牛、猪等的多种基因的检测。随着该方法的普遍运用,也使其本身得到进一步的完善和发展15。1.5 DNA微阵列(DNA microarray)技术基因芯片(gene-chip ) , 又称DNA 微阵列(DNA microarray) , 是指固着在载体上的高密度DNA 微点阵。基因芯片的工作原理与经典的核酸分子杂交方法是一致的, 都是应用已知核酸序列作为探针与互补的靶核苷酸序列杂交传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！,

11、通过随后的信号检测进行定性与定量分析, 其最大的优点在于能在一微小的基片(硅片、玻片、塑料片等) 表面集成大量的分子识别探针, 在同一时间内平行分析大量基因, 进行大信息量的筛选与检测分析16。目前国内外已制出多种生物芯片商品，其实际应用亦已逐步展开。该技术应用范围极广如致病微生物的检出、癌基因及抑癌基因、组织配型、基因表达的研究、基因功能分析、基因制图、基因突变和多态性的检测等，是一项非常有发展前景，适合临床检验应用的先进技术。1.6 荧光原位杂交染色体分析(FISH)荧光原位杂交染色体分析是一种在染色体上进行基因定位的技术，其基本原理和步骤是:在已知某靶基因核苷酸序列的前提下，先合成与靶基

12、因互补的经荧光标记的DNA探针，与常规方法制备的中期染色体进行原位杂交。在荧光显微镜下可以观察到该靶基因所在的染色体(臂、区、带、亚带)。该技术不仅可用于基因在染色体上定位的研究，而且可直接用于实验室诊断。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。1.7 单抗阻断ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清型特异性抗体苗得园等17在副鸡嗜血杆菌A、C型特异性单克隆抗体的基础上成功建立了能区分A、C血清型抗体的阻断ELISA诊断方法。同时应用本方法对9种常见病原体阳性血清及多份免疫鸡、人工感染鸡、临床可疑病鸡血清和阴性血清进行了检测，结果表明该方法具有较好的特异性和敏感性，并且操作简便、快速，是一种

13、适用于鸡传染性鼻炎的诊断、流行病学调查、检疫和监测的良好方法。2B型超声诊断技术在兽医临床上的应用随着集约化、规模化养殖的发展，以及诊疗水平和预防措施的提高，畜禽传染病的发生相对减少，但一些代谢病、肿瘤、器官功能障碍等疑难杂症有增加的趋势，发病原因也越来越复杂，因此，传统的诊断手段已远远不能满足兽医临床诊断的需要。B型超声诊断仪作为一种现代化的辅助诊断技术，在兽医临床诊断中发挥着越来越重要的作用18，19。2.1在兽医内科方面的应用一些常见的消化道疾病，如胃肠道异物、肠梗阻、肠套叠、肠缠结等，B超探查均能及时、有效地对其作出诊断；胃肠道异物或肠梗阻、肠套叠或肠缠结、肝胆疾病。对肾脏病变的诊断一

14、般来说，B超诊断肾脏疾病比X光摄影技术准确率高，并能特异性地诊断出具体病灶区，对肾脏疾病和输尿管疾病是最有效的诊断方法。对结石的诊断，可诊断肾结石、膀胱结石、尿道结石。2.2 在兽医外科方面的应用20，21在手术过程中的应用，B超对手术定位有较大帮助。超声引导穿刺技术具有直观、快速、准确、损伤小的优点，已在医学界得到广泛应用，在疾病的诊治上发挥着重要作用。B超已应用于牛体人工培植牛黄的监测及活熊取胆手术的指导。在活熊取胆的整个过程中，特别是当胆囊由于感染或异物刺激而引起变化时，B超探查便显得特别重要。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！创伤疾病腰椎间盘脱出及切除术后椎管内观察

15、，超声诊断犬椎间盘脱出、脊椎脱位和脊髓受到压迫等效果良好。B超诊断犬的髋关节是否发育异常，其准确率达87%以上。B超可以检查腰椎间盘突出症术后椎管内的改变，探头可通过切除椎板后的间隙，清楚的显示硬脊膜的波动，椎管径线及相应腰椎管前壁和神经根周围的解剖及病理变化；可显示由于手术的干扰和损伤，所致的硬膜外脂肪纤维化、硬膜外间隙消失及切除椎间盘后病灶处的团块样回声。对于腹部外伤，B超能较准确地判断内脏有无损伤及所损伤的脏器部位、程度及内出血量，为兽医临床诊断提供依据，以便选择治疗方案。B超检查结果阳性病畜中肝、脾、肾实质性脏器挫伤、破裂，表现为所损伤的脏器有不同程度的肿大与形态改变，实质密度不均，回

16、声紊乱，腹腔可见形态不规则液性暗区。而空腔脏器损伤或穿孔及腹腔内小血管破裂，B超只能见到腹腔液性暗区，一般不易直接看到损伤图像，容易漏诊。目前，B超已用于引导腹腔穿刺、肝脏穿刺检查，有助于及时、正确的诊断疾病。2.3 在产科学方面的应用22，23B超可监测卵巢发育，以便适时配。B超可监测卵巢发育情况，确定排卵期，为交配或人工授精提供最佳时期。监测卵巢发育时可从多个切面计算发育成熟的卵泡数，当成熟卵泡太少(5个以下)或同步增长的卵泡数量少、速度慢时，可适量使用促性腺激素，促进卵巢发育和排卵，提高受胎率，增加产仔数。B超可进行早期妊娠诊断，能直观地在屏幕上显示胚囊、胚胎等怀孕特征，准确率高。动物早

17、孕的B超判断主要根据在子宫区超声切面声像图上观察到圆形液性暗区的孕囊及子宫角断面增大、子宫壁增厚等为指标。探查方法多为腹底壁或两侧腹壁剪毛后用5或7.5 MHz的线阵或扇扫探头作横向、纵向和斜向3个方位的平扫切面观察，当见到有1个或多个孕囊暗区时即可判为已孕。犬配种后20-24 d，B超妊娠诊断的阳性率为80%；25-30 d可达90%以上。同时，可用B超对胚胎发育、怀孕胎数、妊娠日龄、死胎进行监测；对移植胚胎的动态监测；诊断产科疾病，如卵巢囊肿、子宫积液、难产、乳腺疾病及前列腺疾病等。3小结一般来说，常规诊断技经历了漫长的历史发展过程，得以巩固和完善，具有应用简便、快速、易于掌握、费用低等优

18、点，具有比较强的生命力。而生物高科技诊断技术却不具备这样的优势，不论是单克隆抗体还是核酸探针PCR等，其试剂的制备方法都比较复杂，需要昂贵的仪器设备和诊断试剂，对操作者的技术要求也较高，甚至对检测结果的综合评价也不容易掌握。但是，现代生物技术作为一种高新技术，有着常规诊断方法难以比拟的优越性，具有极高的敏感性与特异性。虽然在短时间内这些诊断新技术难以真正普遍推广应用，但对于重大疫情的及时预报和准确定性都是不可或缺的。在兽医临床中，不论是动物医学领域还是动物繁殖学领域，B超都发挥着非常重要的作用。传播优秀Word版文档 ，希望对您有帮助，可双击去除！利用B超可以清晰地显示各脏器及周围器官的各种断

19、层图像，图像富于实体感，接近于解剖的真实结构，有助于早期确诊。目前在我国兽医临床上，动物疾病的B超诊断主要还是局限于犬、猫等小动物，而在大动物方面应用较少。随着我国畜牧业的快速发展，B超诊断应逐渐应用于大动物疾病的诊治，尤其是在产科学方面发挥更重要的作用。参考文献1 宋文学，谢光洪，王哲分子生物学技术在临床兽医学上的应用中国畜牧兽医，2007，34（6）：93-952 蔡皓，王雪东分子生物学技术与临床兽医学畜牧兽医科技信息，2009，（4）：8-93 Hutvagner G，Zamore P D AmioroRNA in a multiple-turover RNAi enzyme compl

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