基因工程原理练习题和答案

1、基因工程复习题题型：名词解释（10 个）30 分；填空（每空 1 分） 20 分；选择题 （每题 1 分）10 分； 简答题 （4 个）20 分；论述题 （2 个）20 分。第一章 绪论1.名词解释：基因工程：按照预先设计好的蓝图，利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗传物质 DNA 直接进行体外重组操作与改造，将一种生物（供体）的基因转移到另外一种生物（受体）中去，从而实现受体生物的定向改造与改良。遗传工程广义：指以改变生物有机体性状为目标，采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作，以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义：基因工

2、程。克隆：无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的 DNA 分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。2什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。A) 限制性切酶和 DNA 连接酶的发现（标志着 DNA 重组时代的开始）；B) 载体的使用；C) 1970 年，逆转录酶及抗性标记的发现。4.基因工程研究的主要容是什么？ 基础研究：基因工程克隆载体的研究 基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究：基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章 基因克隆的工具酶

3、1.名词解释：限制性核酸切酶：一类能识别双链 DNA 中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸酶。回文结构：双链 DNA 中的一段倒置重复序列，当该序列的双链被打开后，可形成发夹结构。同尾酶：来源不同、识别序列不同，但产生相同粘性末端的酶。同裂酶：不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端：DNA 末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的 DNA 末端通过互补配对粘合，这样的 DNA 末端，称为粘性末端。平末端：DNA 片段的末端是平齐的。限制性核酸切酶的酶活性单位（U）：在酶的最适反应条件下，在 50l 容积中，60 分钟完全切割 1mg l

4、DNA 所需的酶量为 1 个酶活性单位（unit 或 U）限制性核酸切酶的星活性：指限制性切酶在非标准条件下，对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应，导致出现非特异性的 DNA 片段的现象。连杆（linker）：化学合成的 812 个核苷酸组成的寡核苷酸片段。以中线为轴两边对称， 其上有一种或几种限制性核酸切酶的识别序列，酶切后可产生一定的粘性末端，便于与具 有相同粘性末端的另一 DNA 片段连接。衔接头（adaptor）：化学合成的寡核苷酸，含有一种以上的限制性核酸切酶识别序列。其一端或两端具有一种或两种切酶切割产生的黏性末端。底物位点优势效应：酶对同一个 DNA 底物上的不同酶切位点的切

5、割速率不同。激酶：对核酸末端羟基进行磷酸化的酶。2. 说明限制性切核酸酶的命名原则要点。用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的 3 个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株（型）的代号命名。该菌株（种）中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号 I, II, III 等。如：Escherichia coli 用 Eco 表示。第四个字母代表菌株或株型、变种名，若酶存在于质粒上，则需大写字母表示非染色体遗传因子。例：Hind III 从流感嗜血菌株（HaemophilusInfluenzue）d株中分离的第三个酶。EcoRI表示基因位于Escherichia coli 中的抗药性 R 质粒上。前

6、三个字母用斜体，其他用正体表示。如果酶存在于一种特殊菌株中，三个字母后加上菌株名称符号,名称最后部分往往包含罗马数字, 表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。3. 引起限制性核酸切酶星活性的可能因素有哪些？若使用 buffer 不当, 会有 star activity，而 star activity 是指限制酶对所作用的 DNA 及序列失去专一性,当酶辨认切割位置的能力降低，导致相似的序列或是错误的辨认序列长度也会作用，而产生错误的结果。所以当 DNA 同时以两种限制酶处理时，选择可使两种酶之活性反应均可达 75以上的 restriction buffer，若找不到适当的 buffer 则先

7、加低盐的 buffer 使其中一酶作用后，在加入高盐 buffer 使另一酶作用，若无法以盐的高低分别加入不同的 buffer，则先加入一种 buffer 作用后，加 3M NaOAc/95alcohol 沉淀 DNA，再加另一种 buffer 作用。4. DNA 片段之间的连接方式有哪些？具黏性末端的 DNA 片段之间的连接、具平末端 DNA 片段之间的连接、DNA 片段末端修饰后进行连接、DNA 片段加连杆（linker）后的连接。5. 什么是 Klenow 酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆

8、菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5-3 外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和 3-5 外切活性不受影响。也称为 Klenow 片段（Klenow fragment），或 E.coli DNA 聚合酶 大片段。53聚合酶35外切酶无小亚基活性6. DNA 聚合酶、RNA 聚合酶、反转录酶、末端转移酶、多核苷酸激酶和碱性磷酸酯酶有哪些主要特性？它们在基因工程中的主要用途分别是什么？第三章 基因工程的载体1.名词解释：载体:指能够运载外源 DNA 片段（目的基因）进入受体细胞，具有自我复制能力，使外源DNA 片段在受体细胞中得到扩增和表达，不被受体细胞的酶系统所破坏的一类 DNA 分子。克隆载体

9、：用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的 DNA 重组构建。表达载体：使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体。可将重组体 DNA 导入适合的受体细胞，使所载的目的基因能够复制、转录和翻译。穿梭载体:称双功能载体(bifunctional vector)。能在两种不同的生物体复制的载体。质粒:指独立存在于宿主细胞染色体外、能够自我复制的 DNA 分子。松弛型质粒:拷贝数多于 10 个的质粒。严谨型质粒;拷贝数为 1 至几个的质粒。接合质粒；指质粒所携带的基因的功能是使细胞彼此有效地接触，以便将质粒

10、 DNA 从供体细胞转移至受体细胞。如：质粒上的 tra 基因使宿主细胞（大肠杆菌）产生菌毛，合成细胞表面物质，促使宿主细胞与受体细胞接合。质粒的不亲和性；显性质粒;隐性质粒；质粒的迁移作用； 多拷贝质粒；整合质粒；穿梭质粒；表达质粒；探针质粒；pUCl8 质粒；pBR322 质粒；溶菌生长;溶源生长；原噬菌体；烈性噬菌体；溶原化；柯斯载体或粘粒(cosmid)；cos 位点；人工染色体2. 作为工程载体必备哪些基本条件？3. 试述质粒载体、噬菌体载体、柯斯载体、M13 单链丝状噬菌体载体和酵母人工染色体载体各自的组成特点及其在基因工程中的应用。4简述质粒的生物学特性有哪些？5构建人工质粒的目

11、的？6理想质粒载体应具备的条件及构建需遵循的原则是什么？7-DNA 作为载体的优点是什么？8. 为什么野生型的l噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体?该如何改造？第四章目的基因的制备1.名词解释：目的基因；基因文库 cDNA 文库；2.常规分离目的基因的方法有哪些？其原理分别是什么？3克隆目的基因的方法有哪些?4什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库的原理，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库、cDNA 文库有什么不同?第五章 目的基因的导入和重组子的筛选1.名词解释：受体细胞；感受态细胞；转化；转导；转染；体外装配；转换子；重组子； 转化率；负筛选；正筛选； a

12、互补筛选2. 试述几种常用的转化方法。3.试述根据载体的选择标记进行重组子筛选的方法和原理。4.试述根据插入序列的表型特征进行重组子筛选的方法和原理。5.DNA 片断之间的连接方式有哪些？各种连接方式的优缺点及 DNA 重组中需要注意什么问题？6受体细胞选择的原则？第六章 外源基因的表达1.名词解释：融合蛋白；分泌蛋白；包涵体；外源基因表达体系2. 大肠杆菌表达载体构成的重要元件有哪些？3.试比较大肠杆菌、酵母、植物和动物细胞基因表达载体各自组成的特点。4. 真核基因在大肠杆菌中表达存在的问题和高效表达的对策是什么？5.基因表达产物的检测方法有哪些？第七章 基因操作的基本技术1名词解释：分子杂

13、交；探针；PCR; 引物；随机引物；切口位移；热启动；缺口翻译；Northern 印迹；Southern 印迹2DNA 制备的基本步骤有哪些？3碱裂解法和 CTAB 法的原理。4凝胶电泳有哪几类？影响琼脂糖凝胶电泳的参数有哪些？5PCR 的基本原理是什么？PCR 反应体系的组成成份是什么？6试述 PCR 反应的程序及参数。7PCR 反应引物设计需遵循的原则有哪些？8试述核酸分子杂交的类型和基本步骤。9.探针标记的方法有哪些？10说明 Southern 杂交的原理和方法。11.Northern 印迹与 Southern 印迹有什么不同?第八章 植物基因工程及应用1植物遗传转化方法主要有？2基因枪

14、转化的优点？3天然的 Ti 质粒能作为表达载体使用吗？为什么？4理想杀虫剂应具备什么特性？第九章 动物基因工程及应用1.名词解释：转基因生物；共抑制效应；多效性胚胎干细胞2转基因共机制效应的特征？3导致转基因失活的原因可能有哪些？4试述动物基因工程的载体有？5如何筛选转基因多效性干细胞？第十章 医学基因工程及应用1.名词解释: 胰岛素;基因诊断;基因治疗;2.基因鉴定的作用？3.如何进行基因治疗？基因工程原理练习题及其答案一、填空题1基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2基因工程的两个基本特点是：(1)，(2)。3基因克隆中三个基本要点是：；和。4通过比较用不同组合的限制性切核酸酶处

15、理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性切核酸酶切点相互位置的。5限制性切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自 ，第二、三两个字母取自，第四个字母则用表示。6部分酶切可采取的措施有：(1)(2)(3)等。7第一个分离的限制性切核酸酶是；而第一个用于构建重组体的限制性切核酸酶是。8限制性切核酸酶 BsuRI 和 Hae的来源不同，但识别的序列都是，它们属于 。9DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为76kDa 的大片段，具有两种酶活性：(1)； (2)的活性。10为了防止 DNA 的自身环化，可用

16、去双链 DNA。11EGTA 是离子螯合剂。12测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它只有酶的活性，而没有酶的活性。13切口移位(nicktranslation)法标记 DNA 的基本原理在于利用的和 的作用。14欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 分子转变成平末端的双链形式，通常可采用 或。15反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有的作用，可以将 DNA- RNA 杂种双链中的水解掉。16基因工程中依据应用对象分有 3 种主要类型的载体： 、。17就克隆一个基因(DNA 片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分： 、。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。18一个带有质

17、粒的细菌在有 EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫。19pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基 因 来 自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。20YAC 的最大容载能力是，BAC 载体的最大容载能力是。21pSCl01 是一种复制的质粒。22pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC 系列的载体是通过 和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp抗性基因则是来自。23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是。24 野生型的 M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是 和。25黏粒(cosmid)是质粒噬菌

18、体杂合载体，它的复制子来自、COS 位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。26野生型的l噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2)(3)。27噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA 共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 ，而来自噬菌体的主要结构是。28l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源 DNA 片段后，总的长度应在噬菌体基因组的的围。29在分离 DNA 时要使用金属离子螯合剂，如 EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 。30用乙醇沉淀 DNA 时，通常要在 DNA 溶液中加人单价的阳离子，如 NaCl 和NaAc，其目的是。31 引物在基因工程中至少有 4 个方面的用途：(1)(2

19、) (3)(4)。32Clark 发现用 Taq DNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链 DNA 分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的。33在 cDNA 的合成中要用到 S1 核酸酶，其作用是切除在 。34乙醇沉淀 DNA 的原理是。35假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：(1)(2) (3)。36受体细胞的感受态是。37DNA 重组连接的方法大致分为四种：(1)(2) (3)(4)。38将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个。39将含有一个 mRNA 的 DNA 拷贝

20、的克隆称作一个，源于同一批 RNA 制备物的克隆群则构建了一个。40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用可以将这段 DNA进行百万倍的扩增。41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为时吸附 DNA,时摄人DNA。42目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。大致可以分为：(1)(2)(3) (4)等。43PCR 扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于。44核酸杂交探针可分为两大类：DNA 探针和 RNA 探针。其中 DNA 探针又分为 探针和探针。45如果用限制性切核酸酶切割双链 DNA 产生 5突出的黏性末端，则可以用 进行 3末端标记。如果用限制

21、性切核酸酶切割 DNA 产生的是 3突出的黏性末端， 可以用进行 3末端标记。46单链 DNA 探针的标记可以采用下列方法：(1) (2)(3)。47根据 Northern 杂交的结果可以说明：。48差示杂交(differential hybridization)技术需要。49RNA 分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射 DNA 探针杂交的技术称。50在技术中，DNA 限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的 DNA 探针杂交。51可用 T4DNA 聚合酶进行平末端的 DNA 标记，因为这种酶具有和 的活性。52

22、根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1) (2)(3)。53Northern 印迹和 Southern 印迹有两点根本的区别：(1) (2)。54放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1) (2)(3)。答案1702(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达3克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4限制性酶切图谱5属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名6(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积7EcoK；EcoRl8GGCC；异源同工酶9 枯草杆菌蛋白酶；(1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶10碱性磷酸酶；5端的磷酸基团11Ca2+125-3合

23、成；3-5外切13DNA 聚合酶 I：5一 3外切核酸酶；5一 3合成酶14S1 核酸酶切割；DNA 聚合酶补平15核酸水解酶 H；RNA16质粒 DNA；病毒 DNA；质粒和病毒 DNA 杂合体17复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA 的插入18质粒消除(或治愈)19，pMBl；pSCl01；pSF2124(R 质粒)201000kb；300kb21. 严 紧22pBR322 和 M13；pMBl；转座子23它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源 DNA 的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌) 的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较

24、详尽24没有合适的限制性切核酸酶识别位点；选择标记25质粒；l噬菌体；4526(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记27复制区；IG 区287510529螯合 Mg2+离子，抑制核酸酶的活性30中和 DNA 分子的负电荷，增加 DNA 分子间的凝聚力31(1)合成探针；(2)合成 cDNA；(3)用于 PCR 反应；(4)进行序列分析32T载体33第二链合成时形成的发夹环34乙醇使 DNA 分子脱水35(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号36接受外源 DNA 的生理状态37(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4

25、)接头连接法38 基因组 DNA 克隆；基因组 DNA 文库39cDNA 克 隆 ；cDNA 文 库40聚合酶链式反应(PCR)410C；42C42(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3)核酸杂交法；(4)表达产物分析法43插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选44基因组 DNA；cDNA45Klenow 酶填补的方法；T4DNA 聚合酶46(1)用 M13 噬菌体载体合成单链 DNA 探针；(2)从 mRNA 反转录合成单链 cDNA 探针；(3)用不对称 PCR 合成单链 DNA 探针47外源基因是否进行了转录48两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达

26、一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因49Northern 印迹50Southern 印迹5153合成酶；3 5外切核酸酶52(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含含子53(1)印迹的对象不同：Northern 是 RNA，Southern 是 DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件54(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记二、选择题(单选或多选)1因研究重组 DNA 技术而获得诺贝尔奖的科学家是() (a)AKornberg(b)WGilbert(c)PBerg(d)BMcClinto

27、ck2第一个作为重组 DNA 载体的质粒是() (a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当。(a)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4型限制性切核酸酶：()(a)有切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化

28、酶活性由另外一种酶提供5下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?() (a)限制酶是外切酶而不是切酶(b)限制酶在特异序列(识别位点)对 DNA 进行切割(c)同一种限制酶切割 DNA 时留下的末端序列总是相同的(d)一些限制酶在识别位点稍有不同的点切割双链 DNA，产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点相同的位置切割双链 DNA，产生平末端6第一个被分离的类酶是：()(a)EcoK(b)Hind(c)Hind(d)EcoB 7在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制那一项最好?()(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度8在下列试剂中，那一种可以螯合 Ca2+离子?()(a)EDT

29、A(b)柠檬酸钠(c)SDS(d)EGTA9在下列工具酶中，那一种可以被 EGTA 抑制活性?()(a)S1 单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31 核酸酶10限制性切核酸酶可以特异性地识别：()(a)双链 DNA 的特定碱基对(b)双链 DNA 的特定碱基序列(c)特定的三联密码(d) 以 上 都 正 确 11下列关于限制性切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。(a)Sau3A I(b)EcoRI(c)hind III(d)Sau 3A112限制性切核酸酶的星号活性是指：()(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高(c)切割速度大大加快(

30、d)识别序列与原来的完全不同13下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?() (a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂(c)含有非 Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低 14关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当(a)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA 进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统 15在长模板链的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用()(a)T4DNA 聚合酶(b)Klenow 酶(c)大肠杆菌 DNA 聚合酶 I(d)T

31、7DNA 聚合酶16末端转移酶是合成酶类，( ) (a)作用时不需要模板(b)在 Ca2+的存在下，可以在突出的 3，末端延长 DNA 链(c)在 Ca2+的存在下，可以在隐蔽的 3，末端延长 DNA 链(d)上述说法有两种是正确的17在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )(a)防止 DNA 的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行 DNA 的 5，末端标记(c)制备突出的 3，末端 (d)上述说法都正确18下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性(a) 核酸外切酶(b)外切酶(c)单核苷酸激酶(d)碱性磷酸酶19下列哪一种酶作用时需要引物?()(a)限制酶(b)末端转移酶(c)反转录酶(d)DNA

32、连接酶20S1 核酸酶的功能是()(a)切割双链的 DNA(b)切割单链的 RNA(c)切割发夹环(d)以上有两项是正确的21Klenow 酶与 DNA 聚合酶相比，前者丧失了()的活性。(a)5，-3，合成酶，(b)3，-5，外切酶(c)5，-3，外切酶(d)转移酶22下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，()是不正确的(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数(b)可以在氯霉素作用下进行扩增(c)通常带有抗药性标记(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子23基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，

33、真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有()被视为用作基因工程载体的天然质粒载体(a)pBR322(b)pSCl01(c)pUBll0(d)pUCl824下列哪种克隆载体对外源 DNA 的容载量最大?()(a)质粒(b)黏粒(c)酵母人工染色体(YAC)(d) l噬菌体(e) cDNA 表达载体25. 松弛型质粒：()(a)在寄主细胞中拷贝数较多(b)可用氯霉素扩增(c)一般没有选择标记(d) 上 述 (a) 、 (b) 两 项 正 确 26Col El 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：()(a)是松弛复制型（b)具有，四环素抗性(c)能被氯霉素扩增(d)能产生肠杆菌素27同一种质

34、粒 DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：() (a)OCDNASCDNALDNA(b)SCDNALDNAOCDNA (c)LDNAOCDNASCDNA(d)SCDNAOCDNALDNA28pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自： ()(a)ColEl(b)Ri 质粒(c)pSCl01(d)pUCl8 29关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?()(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率30能够用来克隆 32kb 以下

35、大小的外源片段的质粒载体是() (a)charomid(b)plasmid(C)cosmid(d)phagemid31第一个作为重组 DNA 载体的质粒是()(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl832. Ti 质粒：()(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链 DNA 被转移(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素(e)需要细菌的 vir 基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒33黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，()(a)它具有 COS 位点，因而可进行体外包装(b)它具有质粒 DNA 的复制特性(c)进

36、入受体细胞后，可引起裂解反应(d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应34有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理优点是：() (a)碱基与特殊染料间不同的相互作用(b)一个合成引物的延伸和 DNA 修复合成的可靠终止(c)限制性位点与 DNA 末端标记的相关性(d)可同时对 DNA 双螺旋的两条链进行测序(e)反应是 DNA 特异的，RNA 不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。35关于 cDNA 的最正确的说法是：()(a)同 mRNA 互补的单链 DNA(b)同 mRNA 互补的双链 DNA

37、(c)以 mRNA 为模板合成的双链 DNA(d)以上都正确36用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为：() (a)染色体 DNA 断成了碎片(b)染色体 DNA 分子量大，而不能释放(c)染色体变性后来不及复性(d)染色体未同蛋白质分开而沉淀37. 关于碱解法分离质粒 DNA，下面哪一种说法不正确?()(a)溶液 I 的作用是悬浮菌体(b)溶液的作用是使 DNA 变性(c)溶液的作用是使 DNA 复性(d)质粒 DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性38. Clark 做了一个有趣的实验，发现 TaqDNA 聚合酶可以不需要模板，在双链 DNA 的末

38、端加一个碱基，主要是加() (a)dGTP(b)dATP(c)dCTP(d)dTTP39根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA 文库等。在下列文库中，()属 cDNA 文库(a)YAC 文库(b)MAC 文库(c)扣减文库(d)BAC 文库40下面关于多克隆位点(multipleclonesite,MCS)的描述，不正确的句是() (a)仅位于质粒载体中(b)具有多种酶的识别序列(c)不同酶的识别序列可以有重叠(d)一般是人工合成后添加到载体中41在 cDNA 技术中，所形成的发夹环可用()(a)限制性切核酸酶切除(b)用 3外切核酸酶切除(c)用 S1 核酸酶切除(d)用 5外

39、切核酸酶切除42在 DNA 的酶切反应系统中，通常：()(a)用 SSC 缓冲液(b)加入 Mg2+作辅助因子(c)加入 BSA 等保护剂(d)上述说法中，有两项是正确的43黏性末端连接法，不仅操作方便，而且()(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(c)载体不易环化(d)影响外源基因的表达44在下列表型中，()是基因工程上理想的受体菌表型(a)r+m+rec*(b)r-m-rec-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-45关于 DNA 接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?()(a)给外源 DNA 添加适当的切点(b)人工构建载体(c)调整外源基因的可读框(d)增加调控元件4

40、6cDNA 文库包括该种生物的()(a)某些蛋白质的结构基因(b)所有蛋白质的结构基因(c)所有结构基因(d)含子和调控区47下列关于建立 cDNA 文库的叙述中，哪一项是错误的?() (a)从特定组织或细胞中提取 DNA 或 RNA(b)用反转录酶合成 mRNA 的对应单链 DNA (c)以新合成的单链 DNA 为模板合成双链 DNA (d)新合成的双链 DNA 甲基化48下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的?() (a)操作方便(b)易于回收片段(c)易于定向重组(d)载体易于自身环化，降低重组率49关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?()(功具有可诱导性(b)具有可

41、转移性(c)细菌生长的任何时期都可以出现(d)不同细菌出现感受态的比例是不同的50下面关于用 T4 多核苷酸激酶标记 5 端制备探针的描述中()是不正确的。(a)既能标记 DNA，又能标记 RNA(b)既能标记双链 DNA 又能标记单链DNA(c)只能标记突出的 5 端不能标记其他类型末端(d)DNA 或 RNA 必须有 5-OH 的存在51Southem 印迹的 DNA 探针()杂交。(a)只与完全相同的片段(b)可与任何含有相同序列的 DNA 片段(c)可与任何含有互补序列的 DNA 片段(d)可与用某些限制性切核酸酶切成的 DNA 片段(e)以上都是52 用下列方法进行重组体的筛选，只有

42、()说明外源基因进行了表达。(a)Southem 印迹杂交(b)Northem 印迹杂交(c)Western 印迹(d)原位菌落杂交53下列哪一个不是 Southern 印迹法的步骤?()(a)用限制酶消化 DNA(a)DNA 与载体的连接(c)用凝胶电泳分离 DNA 片段(d)DNA 片段转移至硝酸纤维素膜上(e)用一个标记的探针与膜杂交54 报告基因()(a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列(b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区(c)能用于检测启动子的活性(d)能用于确定启动子何时何处有活性55 在利用 lacZ 失活的显色反应筛选法中，IPTG 的作用是( )

43、 (a)诱导宿主的 肽的合成 (b)诱导宿主的 肽的合成(c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂56. 切口移位是指在()作用下，使()带上放射性标记。(a)DNA 聚合酶 I，RNA(b)DNA 聚 合 酶 I，DNA (c)DNA 聚合酶，RNA(d)DNA 聚合酶，DNA57用于核酸分子杂交的探针可以是放射性标记的() (a)DNA(b)RNA(c)抗体(d)抗原58Southern 印迹是用 DNA 探针检测 DNA 片段，而 Northern 印迹则是：() (a)用 RNA 探针检测 DNA 片段(b)用 RNA 探针检测 RNA 片段(c)用 DNA 探针检测 RNA

44、片段(d)用 DNA 探针检测蛋白质片段59用免疫化学法筛选重组体的原理是()(a)根据外源基因的表达(b)根据载体基因的表达(c)根据 mRNA 同 DNA 的杂交(d)根据 DNA 同 DNA 的杂交60随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?()(a)双链 DNA、单链 DNA、RNA 都是可以标记的(b)不需要用 Dnase I 预处理(c)反应时可用 Klenow 酶(d)反应时可用 DNA 聚合酶 1 61在切口移位标记 DNA 探针时只能使用()(a)Klenow 酶(b)DNA 聚合酶 I(c)DNA 聚合酶(d)DNA 聚合酶62要对一双链的 DNA 分子进行 3末端标

45、记，可用()(a)Klenow 酶(b)DNA 聚合酶 I(c)T4DNA 聚合酶(d)T7DNA 聚合酶答案1c；2c； 3b； 4b5b，C，d，e； 6c；7b；8d；9d；10B；11d；12a；13d；14b15d；16c；17a，b；18a；19c；20d；21c；22C；23b；24C；25d；26a，C，d；27b；28c；29b；30a；31c；32a,c,d,e，33a，b，c；34b；35c；36c；37d；38b；39c；40a；41c；42a，b，c；43b；44b；45d；46a；47a；48c；49c；50b；51c；52c；53b；54a,c,d；55a； 56

46、b；57a，b； 58c；59a；60d；61b； 62c；三、简答题1说明 Sanger DNA 测序法的原理。2某学生在用 EcoRI 切割外源 DNA 片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?3在序列 5-CGAACATATGGAGT-3中含有一个 6bp 的类限制性切核酸酶的识别序列， 该位点的序列可能是什么?4下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是类酶的识别序列： GAATCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA?为什么?5当两种限制性切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?6为什么反转录酶在聚合反应中会出错?7什么是测序酶(sequenase

47、TM)?8什么是 S1 核酸酶作图(S1 nuclease mapping)?9YAC 载体具有什么样的功能性 DNA 序列?为什么在克隆大片段时，YAC 具有优越性?10 列举质粒载体必须具备的 4 个基本特性。11 什么叫穿梭载体？12如何将野生型的l噬菌体改造成为一个理想的载体?13PCR 的基本原理是什么?用 PCR 扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?14cDNA 克隆与基因组克隆有何不同?15怎样将一个平末端 DNA 片段插入到 EcoR I 限制位点中去?16简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。17酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?18何谓 YAC?

48、 主要特性是什么?19Muller 的 PCR 反应同大肠杆菌体的 DNA 复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?20欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如 Ecoli)中进行表达，克隆时应注意哪些问题?21假定你分离到一个 Ecoli 的 Thy- 突变体，并推测有可能是 ThyA 基因突变。请设计一个方案用 PCR 从染色体 DNA 扩增突变的 ThyA 基因，测定突变的序列。(注：Ecoli野生型的 ThyA 基因的序列是已知的)22你在做 Southern 印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤是用 NaOH 溶液浸泡凝胶，使 DNA 变性为单链。为了节

49、省时间，你略过了这一步， 直接将 DNA 从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自显影片是空白。错在哪里?23切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?24用 EcoRI 和 Hind 分别切割同一来源的染色体 DNA，并进行克隆，在前者的克隆中筛选到 A 基因，但在后者的克隆中未筛选到 A 基因，请说明原因。25什么是 Western 印迹?它与 Southern 印迹有什么不同?26用一限制性切核酸酶切割 Lac+ Tet+的质粒载体，已知该酶识别的是 4 个碱基序列， 并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在 lac 基因有切割位点，并在第二

50、个氨基酸密码子，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用DNA 聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化 Lac- Tets 受体菌，筛选 Tetr 转化子，问：Lac 的基因型是什么?并说明原因。27在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用 cDNA而不用基因组 DNA?为什么要在 cDNA 前加上细菌的启动子?答案1答：Sanger DNA 测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由 5端向 3端聚合(DNA 聚合酶参与了细菌修复 DNA 合成过程)；(2)可延伸的引物必须能提供游离的 3羟基末

51、端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的 3羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用 4 种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得 4 组长度不同的 DNA 片段。通过比较所有 DNA 片段的长度可以得知核苷酸的序列。2答：盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。3答：回文序列是：5-CATATG-3，4答：GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。5答：注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。6 答 ：由于反转录酶缺少在 Ecoli DNA 聚合酶中起校正作用的 3-5外切核酸酶活性，所以聚合反应往往会

52、出错，在高浓度的 dNTP 和 Mg2+下，每 500 个碱基中可能有一个 错配。7 答 ：所谓测序酶即是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去 28 个氨基酸，这样使 T7 DNA 聚合酶完全失去了 3-5的外切核酸酶活性，只有 5-3聚合酶的活性，而且聚合能力提高了 39 倍，测序时常用此酶。8 答 ：S1 核酸酶作图是一种对 RNA 转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法。9. 答 ：YAC 带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个 DNA 复制起点，两个端粒。YAC 能够容纳长达几百 kb 的外源 DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。10答：(1)独立复制；(2)有选择标记；(3)有独特的酶切位点；(4)能转化但不扩散。11答：含有细菌质粒和克隆的真核生物 DNA 片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。12.答：(1)削减分子量(除去非必需区和整合区)；(2)削减酶切位点；(3)添加选择标记； (4)引入终止突变13答：(1)DNA 半保留复制的原理，在体外进行 DNA 的变性、复性和引物延伸。(2)至少要预先知道足够合成一对引物