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2、全部内容。实时荧光定量pcr原理所谓实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.1内标在传统定量中的作用由于传统定量方法都是终点检测,即pcr到达平台期后进行检测,而pcr经过对数期扩增到达平台期时,检测重现性极差.同一个模板在96孔pcr仪上做96次重复实验,所得结果有很大差异,因此无法直接从终点产物量推算出起始模板量。加入内标后,可部分消除终产物定量所造成的不准确性.但即使如此,传统的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法.2实时荧光定量pcr无需内标实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量pcr无需内标是建立在两个基础之上的:1)ct值的重现性pcr循环在到达ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此ct值的重现性极好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的ct值是恒定的。2)ct值与起始模板的线性关系由于ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用

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