常用缓冲液配置

1、1C，1C，实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCI (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值PH值浓HCl7.4约 70ml7.6约 60ml3.0约 42ml4. 将溶液定容至1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高溶液的pH值大约降低0.03个单位。2)10 开E Buffer (pH7.

2、4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。1M Tris HCl Buffer (PH7.4，7.6，8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2.向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，均匀混合3. 将溶液定容至1 L后，高温高压火菌。4. 室温保存。3) 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.

3、 用浓盐酸调节pH值至8.8。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高溶液的pH值大约降低0.03个单位。4) 3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1. 称量40.8g NaAc 3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月 40ml的去离子水搅拌溶解2. 加入冰醋酸调节 pH值至5.23加去离子水将溶液定容至100ml4咼温咼压火菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM

4、Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6) 10 M醋酸铵组份浓度：10 M醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约

5、30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7) 苯酚/氯仿/异戊醇(25: 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中岀现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中 4C保存。8) 10% (W/V) SDS组份浓度：10% (W/V)S

6、DS配制量：100ml配制方法：1. 称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约 80ml的去离子水，68C加入溶解2. 滴加浓盐酸调节 pH值至7.23. 将溶液定容至100ml后，室温保存。9) 2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取 80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10) 2.5 N HCI组

7、份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在78.4 ml的去离子水中加入 21.6 ml的浓盐酸(11.6 N)，均匀混合。2. 室温保存。11)5 M NaCI组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约 800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 咼温咼压火菌后，4C保存。11) 20% (W/V) Glucose组份浓度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 称取20 g Glucose置于100200 ml烧杯中，加入约

8、80 ml的去离子水后，搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 咼温咼压火菌后，4C保存。12) Solution 1(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl ( pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。1M Tris-HCl ( PH8.0)25ml0.5M EDTA ( PH8.0)20ml20% Glucose (1.11M )45mldH2O910ml2. 咼温咼压火菌后，4 C保存。3. 使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase

9、 A (20 mg/ml)13) Solution 11(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1 % (W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1. 量取下列溶液，置于 500ml烧杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2. 加灭菌水定容至 500ml，充分混匀3. 室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14) Solution 111(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于 500 ml烧杯中。147g?CH3COOH57.5ml2. 加入300

10、ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml4. 咼温咼压火菌后，4C保存。15) 0.5 M EDTA(pH80)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取 186.1 g Na2EDTA - 2H2O，置于 1 L 烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 (约 20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16) 1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 称

11、取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc ( pH5.2)，溶解后使用 0.22 mm滤器过滤除菌3. 适量分成小份后，-20 C保存。17) 10 mM ATP组份浓度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP 3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl ( pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20 C保存。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine ）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成

12、小份贮存于 -20 C。1mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）:将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA ）:加100mg的牛血清蛋白（组分 V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。1mol/L二硫苏糖醇（DT

13、T）:在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加 32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。或转移100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾（potassium acetate）:溶解 78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾（KCl ）:溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠（sodium acetate）:溶解40.8g的三水乙酸钠于约 90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和NaOH

14、溶液（0.5mol/L ），混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取186.1g 的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES :将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl :力廿8.6ml的浓盐酸至 91.4ml的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-0D-半乳糖苷）于 10ml水中，分成小份贮存于-20 C。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2 6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmo

15、l/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 C。20mg/ml蛋白酶 K （ proteinase K）:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。10mg/mlR nase （无 DNase）（ DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸 钠水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸 15min，使DNA酶失活。用1mol/L

16、的Tris HCl调pH至7.5， 于-20 C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH ）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约 0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全 溶解后用水定容至 1L。10% SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol ）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100 %三氯乙酸（TCA ）:在装有500gTCA的试剂瓶

17、中加入 100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 % X gal （ 5-溴-4-氯-3-吲哚3半乳糖苷）：溶解 25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF ），用铝 箔包裹装液管，贮存于 -20 C。lOOBenhardt 试剂（Denhardts regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2 %聚蔗糖（Ficoll，400 型）2g2 %聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40 ）2g2 % BSA （组分 V）2g水加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10 x标准DNA连接酶缓

18、冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量）.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选） 水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP s

19、olutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少 6个月10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20% PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量贡量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50

20、ml 5 mol/L 氯化钠 或14.6g固体氯化钠 补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 XSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至 1LDEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC 于100ml水中，使DEPC的体积分数为 0.1 %。在37C温浴至少12h，然后在15 psi条件下高 压灭菌20min，以使残余的 DEPC失活。

21、DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide ）用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中-80 C贮存（防止氧化）。直接购买或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中， 的离子。经 Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于磷酸缓冲液（phosphate buffe）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸

22、氢二钠（Na2HPO4 ）贮液：溶解142g于足量水中使终体积为 1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl (pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.

23、5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )98.8mlTris 缓冲液(Tris-HCI buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25 C下）加一定量的浓盐酸（11.6N ），用水调整终体积至1L o浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50XTris-乙酸（TAE ）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱242g1mol/L乙酸57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )100

24、mmol/L EDTA200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )水补足1L5XTris-硼酸（TBE ）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 ) 补足1L染料1%溴酚蓝（bromophenol blue）加ig水溶性钠型溴酚蓝于 100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF （xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到 100ml。10mg/

25、ml 的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions ）6 x碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量）.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）0.15 %溴甲酚绿0.25 %二甲苯青FF水300ul 10N氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )1.8g15mg25mg 补足到10ml6燥蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

26、0.15 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型） 水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )1.5g 补足到10ml6 x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25 %溴酚蓝0.25 %二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型） 水2.5ml 1 %溴酚蓝2.5ml 1 %二甲苯青 FF1.5g 补足到10ml6X甘油凝胶上样液（4 C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/

27、L EDTA50%甘油水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )3ml3.9ml6 x蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量).15 %溴酚蓝).15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )4g补足到10ml10 U二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量）.2 %溴酚蓝20mg0.2 %二甲苯青FF20mg200 mmol/L

28、EDTA4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)0.1 % SDS100ul 10 % SDS50%甘油5ml水补足到10ml三.常用培养基1） LB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到 1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌

29、的1mol/L氯化镁。2）SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后， 除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L 氯化镁外，再加 2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。3）TB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。 冷却到60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中， 使终体积为100ml。高压灭菌或用 0.22um的滤膜过滤除菌）。4) 2YT培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。5) YPD培养基将下列组分溶解在 0