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文档简介
1、生物实验： THP-1细胞培养THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。 其表面抗原 HLA 型为：A2 ，A9 ，B5，DRw1 ，DRw2 。工具/原料? 培养基： RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)? 胎牛血清： Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)? 二甲亚砜： DMSO (SIGMA D2650)?双抗 P/S (Penicillin/Streptomycin)（GIBCO #15140-122）方法/步骤1.1细胞培养： THP-1 细胞
2、培养于含有10%FBS+1%P/S的 RPMI-1640培养基中，培养环境为37 ， 5%CO2 。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。2.2细胞传代：当细胞密度达到约8x105cells/ml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x105 cells/ml。3.3细胞冻存：取差不多 1x107个细胞，用 1ml 含有 10%DMSO的 FBS 重悬，转入冻存管，于 -80 冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。END注意事项? 细胞养不好，可能的原因有， THP-1 细胞特别依赖细胞浓度， ATCC 上 10 5 到 106 每
3、 ML ，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。?细胞株 的来 源很 重要 ，如 直 接来 源于 ATCC （ AmericanTypeCultureCollection美国模式菌种保藏中心）生命力要强于国内细胞库的。? 注意细胞的密度一定要高，介于 5 105 106/ML 之间，增值的快。细胞数量太少，不适合 THP-1 生长，一般状态不好的 THP-1 在培养了 3 天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基 严重泛黄，细胞数会增加。这一点不同于同是单核细胞系的 U937 细胞。? THP-1 细胞适合在细胞 Ph 环境偏酸性环境生长， 对培养基变化非常敏感， 所以尽量使用相同 Ph 的 1640 。? 传代后切忌常移出培养箱观察， 否则会影响细胞生长， 状态变差， 一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般 THP-1 生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后 3 4 天再观察，一般 4 天时间培养基已明显泛黄， 细胞数量巨增 ;1)THP-1细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好 ;2）不要频繁换液，一般 2-3 次换液离心一次（只是补充培养基） 3 ） 使用 1640 （ATCC 推荐），注意加碳酸氢钠2.5
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