临床检验技师考试辅导(182)

1、第10页第二十八章真菌检验本章内容真菌的基本特性真菌的基本微生物检验方法 病原性真菌n假丝母（裕称念殊B）隐SB-曲SB 卡氏市抱菌-马尔尼菲青霉.7菌.毛g目e菌.组级胞浆菌 咙部感染as一、真菌的基本特性 真菌是真核细胞型微生物，属于真菌界。具有典型细胞核，有完整细胞器，不含叶绿素； 壁含几丁质和（或）纤维素；能进行有性生殖和（或） 分类绝大多数对人类有益，如食用真菌及能产生抗生素的真菌等。能引起人类和动物疾病的真菌仅 种。分为黏菌、真菌两个门。其中与医学有关的真菌主要属于接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门和半 知菌亚门，鞭毛菌门中仅腐霉属在医学上有重要性。绝大部分致病性真菌属于半知菌亚门

2、。生物学性状基本世态寄生或腐生方式生存，由单细胞或多细胞组成；细胞无性生殖。150余单细胞真菌r酵母菌（出芽繁殖1类酵国多细胞S；丝ttSCg菌）7L袍子（8丝生长一，r -敢护E啜i油.世犷今%.理鬥:傀亠盤-体内或体外含动物蛋白的培S基上arc培隸为 双相性真菌：-酵母型SB-体外普通g静基上2hcg弄掏S型S菌单细胞真S岀芽殖多细胞SS分生抱子2L_r&潯7结构基本结构为菌丝和抱子 。菌丝：真菌在适宜环境中，由孢子生出芽管逐渐延长或呈丝状，称为菌丝。菌丝继续生长并向两侧分支，交织成团，称为丝状体。营养菌丝：伸入到培养基内的菌丝。气中菌丝：露出培养基表面的（部分气中菌丝可产生有性或无性孢子

3、的称为生殖菌丝）。 孢子有性孢子：同一个菌体或不同菌体上的两个细胞融合形成。无性孢子：菌丝直接生成，并不发生细胞融合。致病性真菌多为无性孢子。真菌孢子与细菌芽孢区别区别要点真菌孢子细菌芽孢形态大小大小产生数目一条菌丝可产生多个一个细菌只形成一个形成部位细胞内、外均可形成只在细胞内形成热耐受性不强，6070 C短时死亡强，煮沸短时间内不会死亡生物功能重要的繁殖方式非繁殖方式真菌与细菌区别持征真菌细菌结构核真核细胞（有核仁和核膜）原核细胞（无核仁和核膜）细胞浆有线粒体和内质网无线粒体和内质网，有中介体细胞膜含固醇缺少固醇（除支原体）细胞壁几丁质或葡聚糖为主肽聚糖为主孢子或芽孢有性和无性孢子，是繁殖

4、方式牙孢，是一种生存方式双相性代谢有（某些真菌）无需碳有机物；无专性厌氧菌某些不需要碳有机物；某些为专性厌氧培养与繁殖气体环境：需要较高的湿度和氧气。6.0。温度酸碱：2228C,某些深部病原性真菌在37C生长良好，pH 5.0培养特点：最常用沙保弱培养基，生长缓慢。多数真菌是以出芽、形成菌丝、产生孢子以及菌丝分枝与断裂等方式进行繁殖。a落：有3种类型n酵母型菌落 新生隐球菌: 柔软 光骨 湿闰 无菌丝类酵母型菌落白色念珠菌: 与酵母型菌 落类像但 有假菌丝丝状菌落菌示霉松显色 曲疏可颜抵抗力对热的抵抗力不强般60 C 1h即被杀死。1%- 3%酚、2.5%碘酒、0.1%的升汞及10%对干燥、

5、日光、紫外线及多数化学药品的耐受性较强；对 甲醛比较敏感；对常用抗生素均不敏感，灰黄霉素、制霉菌素、两性霉素等对某些真菌有抑制作用。 致病性聚件致病性；内躺如念昧舔真菌性变态反应：真菌过敏。真菌毒素中毒：真菌中毒、真菌毒素致癌。亘菌威期侵犯人体机制不同匣S性SS染：发生于 健康和正常机体，由外源 性致病性真菌感染引起机会性真菌感染：发生于免 疫力低下的机体，可通过内 源性或外源，性途径廊染机体白色念珠菌 新生隐球菌 曲電菌 毛霉菌组织胞浆菌 球胞子 副球范子S 芽生菌二、真菌的基本微生物检验方法 直接检测法1. 不染色标本的直接检查：用低倍镜和高倍镜检查，观察时有酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子

6、。革兰染色：适用酵母菌和类酵母菌，酵母型细胞和菌丝、孢子被染为G+紫色。墨汁负染色：适用隐球菌。可见新型隐球菌宽厚荚膜。乳酸酚棉兰染色：适用各种真菌的检查。酵母型细胞、菌丝和孢子被染为蓝色。 瑞氏染色：适用于骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌。ELISA检测血清和脑脊液标本中的隐球菌抗原。也可以用胶乳2. 染色标本检查：观察酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子。（1）（2）（3）（4）3. 直接检测抗原：可以用乳胶凝集试验、 聚集试验检测标本中白色念珠菌抗原。培养检查法1. 常用真菌培养基沙保弱培养基：深浅部真菌的常规培养； 皮肤真菌试验培养基：分离皮肤真菌； 左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基：分离新生

7、隐球菌； 马铃薯葡萄糖琼脂：观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌;脑心葡萄糖血琼脂：培养深部真菌，使二相性真菌呈酵母型； 尿素琼脂：鉴别酵母菌和类酵母菌，石膏样毛癣菌和红色毛癣菌； 玉米粉聚山梨酯-80琼脂：培养白色假丝酵母菌。2. 培养方法 试管培养：是真菌分离培养、传代和保存菌种最常用方法。玻片培养：主要用于在显微镜下观察真菌的自然形态和结构及生长发育的全过程。可用于真菌菌种鉴 定。平皿培养：观察菌落形态，只能培养生长繁殖较快的真菌。3. 鉴定：主要依靠菌落特点、菌丝和孢子的形态特点，菌丝体上有无特殊的结构。 生化反应 常用的有糖类发酵试验、同化碳源试验等。真菌毒素检测ELISA法等。生物学方法

8、、薄层层析法、液相色谱法、间接竞争 药敏试验定量试验：观察最小抑菌浓度。 定性试验：将受试菌对药物的敏感性进行分级。 根据培养基不同主要分为液基法和固基法。三、病原性真菌（一）假丝酵母菌（俗称念珠菌）生物学性状形态：圆形或卵圆形。染色：G+,着色不均匀。繁殖与培养：出芽繁殖，称芽生孢子。孢子伸长成芽管，不与母菌体脱离，形成较长的假菌丝。在普通琼脂、血琼脂与沙保弱培养基上均生长良好。需氧、室温或37 C孵育13天，菌落呈典型类酵母型菌落。微生物检验1. 直接镜检：镜下可见假菌丝和厚膜孢子。咱A:毀 f 总戈十:Qp.2. 分离培养及鉴定常用白色假丝酵母菌鉴定方法：芽管形成试验糖同化或发酵试验厚壁

9、孢子形成试验：玉米粉琼脂。 商品化产色培养基可用于快速鉴定。1)2)3)4)临床意义对人有致病性的主要有：白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌等。其 中以白假丝酵母菌的感染最为常见。它们大多是人体正常菌群，感染既可以是内源性，也可以是外源性的。浅部假丝酵母菌病： 鹅口疮、阴道炎、角膜炎、甲沟炎等。全身性感染：支气管、肺假丝酵母菌病、假丝酵母菌性肠炎，假丝酵母菌性膀胱炎或肾盂肾炎、假丝 酵母菌性心内膜炎等。(二) 隐球菌(新型隐球菌)生物学性状形态：圆形的酵母型菌，外周有荚膜。常见出芽现象。染色：一般染色法不着色，印度墨汁作负染色镜检。繁殖与培养：新型隐球菌在沙保弱和血琼

10、脂上25C和37C均可生长，典型酵母型菌落。抗原：新型隐球菌荚膜多糖抗原，分4个血清型。Ooo微生物检验1. 直接镜检：标本中菌体较大，呈较大的球形，菌体周围有肥厚的荚膜，印度墨汁染色镜检。2. 分离培养及鉴定z常用隐球菌鉴定方法（1） 尿素酶试验：新型隐球菌可产生尿素酶，而白色念珠菌为阴性；（2）糖同化及发酵试验：新型隐球菌、浅白隐球菌等可同化纤维二糖、肌醇等，但均不能发酵糖类；（3） 酚氧化酶试验：接种左旋多巴 -枸橼酸铁和咖啡酸培养基，经25d,新型隐球菌呈棕黑色菌落。ELISA。3. 直接检测抗原：乳胶凝集试验、4. PCR检测致病物质：新型隐球菌的致病物质是荚膜。临床意义其感染属外源

11、性感染。 可经呼吸道侵入人体，由血流播隐球菌属中新型隐球菌为主要的人类病原菌。散至脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。隐球菌病好发于免疫功能低下者，特别是隐球菌性脑膜炎。（三）曲霉菌上缶1生物学性状具横隔的分枝菌丝；分生孢子。繁殖与培养：在沙保弱培养基上形成丝状菌落。鉴定曲霉菌常用察氏琼脂，菌落气生部分和基内菌丝体以及培养基的颜色是鉴定菌种的依据之一。微生物检验血清学诊断：可用 ELISA、RIA等方法检测患者血清中的抗体。也可用ELISA等方法检测患者血清、尿液或其他体液中的抗原。皮肤试验：对过敏性支气管肺炎患者可用曲霉抗原提取液作皮试。临床意义曲霉菌是条件致病菌。呼吸系统曲霉病：引起支气管哮

12、喘或肺部感染，主要有三种即过敏型、曲霉球（又称继发性非侵袭性 肺曲霉病）和肺炎型。全身曲霉病：原发病灶主要是肺，可随血播散至脑、心肌和肾等。有些曲霉菌能产生毒素引起机体食 物中毒，黄曲霉毒、杂色霉素有致癌作用。（四）卡氏肺孢菌有包囊和滋养体两种形态。包囊为感染型，滋养体为繁殖型。痰液涂片吉姆萨染色检查包囊。利用单 抗查血清中的卡氏肺孢菌抗原。也可检测核酸。(PCP。可寄生于多种动物和人体。主要是空气传播，在健康人体内多为无症状的隐性感染。当宿主免疫力下 降时，潜伏的卡氏肺孢菌在病人肺内大量繁殖扩散，导致间质性浆细胞肺炎，又称卡氏肺孢菌肺炎 卡氏肺抱菌病是 AIDS最常见、最严重的机会感染性疾病

13、。（五）马尔尼菲青霉双相真菌，在自然界中以菌丝形式存在，在组织中则可形成小圆形至椭圆形细胞。涂片染色镜检，可 见到典型圆形或卵圆形有明显横隔的孢子，常在巨噬细胞内。可引起马尔尼菲青霉病（感染），最初通过吸入而致肺部感染，随后进入血流引起菌血症及其他部位 感染。（六）镰刀菌大分生孢子是镰刀菌的特征；有无小分生孢子及厚壁孢子是镰刀菌分类的主要特征。标本直接检验，可见分支、分隔的透明菌丝，偶见镰刀状大分生孢子。镰刀菌生态适应性强，广泛分布于自然界土壤、植物的地上及地下部分。（七）毛霉目真菌标本直接镜检可见折光性强的粗大菌丝，无隔或少数分隔。在培养基上生长较快，初起菌落表面呈棉 花样、白色，渐变为灰褐

14、色或其他颜色，顶端有黑色小点。常引起毛霉病的以根霉属最为常见。毛霉病是一种发病急，进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。免疫功能低下者易感。临床上常见眼眶及中枢神经系统的毛霉病。该病起初多发于鼻黏膜或鼻 窦，继而扩散。（八）组织胞浆菌双相性真菌，标本涂片吉姆萨染色可见在巨噬细胞内卵圆形较小的一端有出芽，为可疑标本。主要侵犯网状内皮系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。引起三种不同临床表现：原发急性 型组织胞浆菌病、慢性空洞型、严重播散型。（九）浅部感染真菌毛癣菌属：感染的皮屑等经 10%KOI溶液消化后镜检，可见有菌丝，其病发内、外可见菌丝或孢子。易 侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发

15、的角蛋白组织并生长繁殖。表皮癣菌属：对人致病的只有絮状表皮癣菌。小孢子菌属：感染皮肤和毛发，很少感染指（趾）甲。其他浅部真菌：糠秕马拉色菌引起皮肤表面真菌感染；着色真菌和孢子丝菌可引起皮下组织真菌感染。【例题】检测真菌常用的简便方法是A. 直接镜检B. 抗原检测C. 抗体检测D. 核酸检测E. 液相色谱鉴定正确答案A答案解析检测真菌常用的简便方法是直接镜检。二相性真菌在培养基上形成酵母型菌落的培养温度是A. 25 CB. 28 CC. 35 CD. 37 CE. 41 C37 C培养为酵母型真菌。正确答案D答案解析双相性真菌在体内或体外含动物蛋白的培养基上关于真菌孢子的描述，错误的是A. 是真

16、菌的休眠状态B. 抵抗力不如细菌芽胞强C. 一条菌丝上可长出多个孢子D. 大部分真菌既能形成有性孢子，又能形成无性孢子E. 大分生孢子是鉴定半知菌类的重要依据正确答案 A答案解析真菌孢子是真菌的主要繁殖器官。关于真菌的抵抗力，错误的一项是A. 对干燥、阳光和紫外线有较强的抵抗力B. 对一般消毒剂有较强的抵抗力C. 耐热，60 C 1小时不能被杀死D. 对抗细菌的抗生素均不敏感E. 灰黄霉素、制霉菌素 B可抑制真菌生长正确答案C答案解析真菌对热的抵抗力不强，一般60 C 1h即被杀死。最常用的真菌培养基是A. 沙保弱琼脂培养基B. 玉米-吐温80培养基C. 血琼脂D. SS琼脂E. 基础琼脂正确

17、答案 A答案解析最常用的真菌培养基是沙保弱琼脂培养基。观察真菌菌落色素，合适的培养基是A. 沙氏培养基B. 玉米粉培养基C. 尿素琼脂D. 马铃薯葡萄糖琼脂E. 心脑浸出液葡萄糖琼脂正确答案D答案解析马铃薯葡萄糖琼脂用于观察真菌菌落色素。下列除哪项外均属于呼吸道常见真菌A. 白假丝酵母菌B. 隐球菌C. 组织胞浆菌D. 曲霉菌E. 毛霉菌正确答案C答案解析组织胞浆菌主要侵犯单核-吞噬细胞系统，有时也可由血行播散而侵犯全身各脏器。不是易引起念珠菌感染的主要原因A. 与念珠菌病人接触B. 菌群失调C. 长期使用激素或免疫抑制剂D. 内分泌功能失调E. 机体屏障功能遭破坏正确答案A答案解析念珠菌大多是人的正常菌群，属于条件致病菌。白色念珠菌常引起A. 癣病B. 皮下组织感染C. 皮肤粘膜、内脏感染D. 毒血症E. 真菌中毒症正确答案C答案解析白色念珠菌可引起浅部和全身性感染。脑脊液墨汁染色直接镜检，新型隐球菌特征性的形态是A. 细菌呈圆形或卵圆形B. 有芽生的子细胞C. 细胞壁厚D. 有菌丝和假菌丝E. 菌体周围有一宽厚的荚膜正确答案E答案解析脑脊液墨汁染色直接镜检，新型隐球菌特