HPLC测定常通舒颗粒中二苯乙烯苷含量-2019年文档

1、HPLC测定常通舒颗粒中二苯乙烯苷含量 常通舒颗粒为原卫生部部颁药品标准中药成方制剂第 10 册 (WS3-B-2031-95)收载。本方由何首乌、当归、赤芍、火麻仁、 桑椹等五味药材组成。具有滋阴养血，润肠通便之功效。用于习 惯性便秘，老年性便秘及产后便秘等症 1 。原制剂质量标准中 只有检查和鉴别项， 缺乏对制剂中药材定量控制， 无法对制剂原 料药材进行品质管控， 制剂工艺科学性和稳定性无法提供科学依 据，无法控制成品内在质量。为更好控制本制剂质量，笔者以方 中何首乌为控制药材，以主要药效成分 2，3，5，4- 四羟基二 苯乙烯 -2-O- -D- 葡萄糖苷为定量分析指标， 建立了常通舒颗

2、粒 定量分析方法， 为该制剂质量标准提升提供重要依据。 现代药理 研究发现，何首乌补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨功效相关药 理作用是促进造血功能，提高机体免疫功能，降血脂，抗动脉粥 样硬化，保肝，延缓衰老，影响内分泌功能， 润肠通便等作用 2 。 何首乌功效作用物质基础主要为磷脂、 蒽醌类、 葡萄糖苷类等成 分3-4 。其中 2，3，5，4-四羟基二苯乙烯 -2-O- -D- 葡萄 糖苷是何首乌主要药理活性物质及其质量控制指标成分。 中国药 典也将其作为何首乌及含何首乌制剂主要质量评价标定物 5 。 本文采用 HPLC法对不同批次常通舒颗粒中 2，3，5，4 - 四羟基二苯乙烯 -2-O- -

3、D- 葡萄糖苷含量进行分析，结果表明： 本法灵敏度高、重复性好， 结果准确。 1 仪器与试药 Dionex-U3000 液相色谱仪 （Dionex 公司，Dionex Chemeleon 色谱工作站）； Mettler Toledo MS104S型电子天平（ d=0.01mg， 瑞士 Mettler Toledo ）公司； 2，3，5，4- 四羟基二苯乙烯 -2-O- -D- 葡萄糖苷对照品 （供含量测定用， 中国食品药品检定 研究院，批号 0819-200203 ）；常通舒颗粒及缺何首乌阴性对照 样品（湖北清大制药 XX公司，规格： 5g/ 袋）；甲醇（天津市科 密欧化学试剂 XX公司 ，分

4、析纯） ；乙腈（天津大茂， 色谱纯） ； 磷酸（武汉市江北化学试剂有限责任公司 ，分析纯）；水为双 蒸水；其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液制备 取经五氧化二磷减压干燥器中干燥至恒重， 二苯乙烯苷对照 品适量，精密称定，加甲醇制成每 1mL含 93.6 g 溶液，即得。 2.2 供试品制备 取本品 5.0g ，用研钵研成粗粉，精密称定，置圆底烧瓶中， 精密加入甲醇 50mL，称定重量，加热回流 30min，放冷，再称定 重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按 上述方法制得不含何首乌阴性对照溶液。 2.3 系统适应性试验与色谱条件 采用以乙腈： 0.1%磷

5、酸溶液为流动相， 采用梯度洗脱 5-9 ， 乙腈%（A）， 0.1%磷酸%（B）梯度洗脱程序为在 012min内 A： B为（ 76：24）；时间从 12 60min 过程中， A比例从 76%89%； 而 B 从 24%11%。色谱柱为： FORTIS-C18柱（ 4.6mm250mm， 5m），流速 1.0mL/min ，柱温 30，检测波长 320nm，进样量 为： 10L，在此色谱条件下，二苯乙烯苷色谱峰理论板数不小 于 4000 ，分离度大于 1.5 。色谱图见图 1。 2.4 标准曲线与线性范围 准确吸取对照品溶液 0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、 10

6、.0mL 分别置 10mL量瓶中，加流动相稀释，并定容至刻度，摇 匀，得到浓度分别为 4.68 g/mL、9.36 g/mL、18.72 g/mL、 46.80 g/mL、74.88 g/mL、93.60 g/mL 二苯乙烯苷对照品溶 液。分别准确吸取 10L 注入液相色谱仪， 按上述色谱条件测定 色谱峰面积，以浓度（ X）对峰面积（ Y）进行线性回归，得到回 归方程为： Y=0.8976X+1.4421 ，r=0.9999 ；结果表明二苯乙烯苷 在 4.68 93.60 g/mL 浓度范围内线性关系良好。 2.5 精密度试验 取二苯乙烯苷对照品溶液，按照上述色谱条件，进样分析， 重复进样 6

7、次，结果色谱峰保留时间稳定， 计算 6次色谱峰面积 RSD分别为 0.96%。 2.6 稳定性试验 取常通舒颗粒中供试品溶液，室温下分别在0h、3h、 6h、 12h、24h进样测定，记录色谱峰面积，计算其 RSD为 1.52%，表 明处理后常通舒颗粒供试品溶液室温下 24h 内稳定。 2.7 重复性试验 取同一批常通舒颗粒样品 （批号 20130708）6 份，精密称定， 按上述方法制备供试品溶液，依法测定，结果：二苯乙烯苷平均 含量 0.47mg/g ，RSD为 1.83%。 2.8 加样回收率试验 称取重复性实验已测定含量常通舒颗粒样品（批号 20130708）9 份，每份 2.5g ，

8、精密称定，分别加入二苯乙烯苷对 照品溶液（浓度 93.6 g/ml ）11.0mL、12.0mL、13.0mL（ 3种不 同水平，各 3 份），按上述方法同法制备供试品溶液， 进样 10L。 按外标两点法计算二苯乙烯苷含量， 结果见表 1。2.9 样 品测定 按上述色谱条件对 5 批样品进行含量测定， 得到三次测定平 均值。结果 5 批样品含量分别为 0.47 mg/g、0.46 mg/g、0.41 mg/g、 0.48 mg/g 、0.44mg/g 。 3 讨论 常通舒颗粒中， 何首乌为方中君药。 中国药典对何首乌质量 控制为测定二苯乙烯苷， 结合型蒽醌总量。 对于本复方制剂而言， 分析二苯乙烯苷含量能严格控制原料与工艺稳定性， 并且能特征 性表征何首乌 （由于蒽醌类化合物在蓼科很多植物中均含有， 不 能特征性反映何首乌） 。因而笔者选择本方中君药何首乌所含二 苯乙烯苷作为本方定量控制指标。 笔者还对生产厂家提供何首乌药材进行了测定，结果显示， 何首乌中