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文档简介

1、2020年蛋白质透析（课件） 蛋白质透析在蛋白质的研究中，经常要进行蛋白质脱盐,即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多，各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法,可根据实验条件和要求选用。（一）蛋白质透析一. 目的学习透析的基本原理和操作。二. 原理蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开.三. 仪器、试剂、材料1. 仪器烧杯；玻棒；离心机；离心管;冰箱；电炉。2. 试剂1氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1ml/L DA；2%HO3。3. 材料透析管(宽约2。5cm，长1215c)或玻

2、璃纸；皮筋;鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀，然后用六层纱布过滤。四. 操作方法1. 透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1ml/L EDT溶液中，煮沸10分钟,再在2 NaHCO3溶液中煮沸1分钟,然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可.2. 取5ml蛋白质溶液于离心管中,加g硫酸铵粉末,搅拌使之溶解。然后在4下静置20分钟，出现絮状沉淀.3. 离心:将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。4. 装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中，扎紧上口.5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析,并不断搅拌.6. 每隔适当时间（50分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。五. 结果处理记录并解释实验现象.六. 注意事项1。 硫酸铵盐一定要充分溶解,才能使蛋白质沉淀下来.七. 思考题在透析袋处理过程中, EDTA和NaHC起何作用？DTA,二价金属离子螯合剂,除去钙镁等二价离子，防止他们跟目的样品螯合，影响活性HCO3,中和乙

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