肌钙蛋白I的生化特点及其影响测定的因素

1、肌钙蛋白I的生化特点及其影响测定的因素 上海医科大学中山医院潘柏申 关键词肌钙蛋白（cTn）心肌损伤测定标准化 随着研究和应用的发展，心肌肌钙蛋白（cTn）包括心肌肌钙蛋白I （cTnl）和心肌肌 钙蛋白T（cTnT）已成为临床诊断心肌损伤的确定标志物阳。由于仅 傢生产厂商拥有cTnT 生产专利，因此人们对cTnl的生产应用兴趣人增。目前FDA至少已批准8家生产厂商的共 16种cTnl检测试剂。在临床应用中发现，这些cTnl检测试剂的测定值之间存在着差异， 不同的cTnl分析方法对同份标本的检测值最人可相差30余倍，这使得各种方法的参考 范围、分析干扰、分析变异、诊断窗口期以及诊断和预后的临界

2、值等出现不同程度的差别， 给临床应用和评价带来定困扰。了解cTn特别是cTnl的系列化特别和各种分析测定试剂 的特性，将有助于临床上正确使用这些方法检测和评价心肌缺血损伤。 1心肌肌钙蛋白细胞内结构和分布 心肌肌钙蛋白结构结构cTn由三种亚基组成，参与调节肌肉收缩活动。其中的肌钙蛋 tl C （TnC）是2+结合亚基，分iskDa,等电点；cTnl为抑制亚基，分（量23kDa,等 电点：cTnT为原肌球蛋白结合亚基，分子量34kDa,等电点。 在Ca2+存在的情况下，TnC与Ca2+结合后构型发生变化，与cTnl的结合增强（Ka约为 xlOM1）：TnT与TnC-cTnl结合，但较TnC-cT

3、nl之间的结合弱。反之，Ca?+浓度低或 TnC未与Ca2+结合时，TnC和cTnl之间的结合比较松散。cTnl-cTnT的结合相对较弱（Ka约为 xlO5 M1）。 心肌肌钙蛋白的组织含量在心肌内cTnl的含量人约为5mg/g湿重组织，cTnT的含量 大致为g湿重组织（相比之下，CK-MB仅g湿重组织；cTn主要结合于心肌肌纤维中，少 M （cTnl的%： cTnT的6%8%）在细胞浆中以游离形式存在。这与心肌细胞缺 血损伤后的释放方式密切有关。 释放形式心肌细胞损伤后，游离cTnT较早释放形成第个峰，畅后结合于肌纤维中 的cTnT逐渐释放而出现第二个峰；由于细胞液中的含量较少，cTnl释放

4、通常只有-个峰。 cTn 般在心肌损伤后58h外周血中出现增高，最高值在1224h,增高可持续7 10 天（cTnl或 10 14 天（cTnT）3】。 外周血中存在形式外周血中的cTn究竟是以复合物还是游离形式存在，曾有过许多结 果不同的研究报道。现在多认为，cTn释放主要是以TnCcTnlcTnT复合物形式，随后降 解。外周血中的cTnl既有游离形式,又有不同复合物的形式（cTnlTnC、cTnl - cTnT以 及cTnTcTnlTnC） *）。在AMI病人中以cTnlTnC复合物形式居多数（90%以上）【询， cTnlcTnT复合物仅在不到50%病人的血中被发现，而且其中的cTnl仅占

5、部cTnl的5%以下 冋，因此检测重要性远不如cTnlTnC复合物：其他形式的cTnl较少【询：cTnT游离形式较 多见。 抗体识别位点（抗原决定簇）不同亚基复合物的形式使得-种抗cTnl的抗体不能识别 另结构形式cTnl的抗原决定簇。有的单克隆cTnl的抗体识别游离形式cTnl的能力较强； 有些则主要以识别TnCcTnl复合物形式为主。这使得采用不同抗体的各种试剂检测同- 标本时出现检测结果不同的现象。 2心肌肌钙蛋白I的结构稳定性 体外实验研究发展，AMI的心肌坏死组织培养3h后，cTnl的蛋白质级结构、二级结 构和三级结构都出现了程度不等的变化2）。 蛋白水解酶作用研究发现，AMI后若血

6、运未重新建立，心肌细胞在30、60min内坏 死，坏死细胞的溶酶体可释放多种蛋白水解酶。cTnl较不稳定，易受蛋口水解酶作用，在 体外实验中发现迅速降解，但其不同部分受影响的程度有差别。cTnl的中心区域（第28位 和第口0位氨基酸）稳定生明显较高（可能是受TnC的保护作用）；氨基病和拔基端则对 蛋白水解酶作用敬感心】。氨基端水解后降解形成-14kDa的片段：竣基端则降解形成-18kDa 的片段小】。因此，欲提高检测敬感性和可重复性，抗体的识别位点最好位于cTnl的中心区 域。 蛋白激酶A磷酸化cTnl的第22位和第23位的丝氨酸易受蛋白激酶A作用发生磷酸化 反应X）,使cTnl形成四种形式：

7、种未磷酸化、两种单磷酸化和种戏磷酸化结构。研究 发现，病人体内磷酸化形式的cTnl占相当数量。磷酸化可改变cTnl的分f结构形式和抗原 性，从而影响某些抗体的识别问。 氧化还原形式cTnl的第79位和第96位是半胱氨酸，容易发生氧化或还原反应。这种 氧化或还原反应了可影响cTnl的分了结构形式和抗原性，从而影响某些抗体的识别能力。 3测定校准品 各生产厂商的cTnl校准品内含的cTnl结构形式或含量各不相同，使得测定结果人相径 庭。甚至使用同份标定cTnl值的人血清进行校准也未能完全消除不同测定系统之间测定 值的差异皿）。因此，有人提议最好采用从人心组织捉取的cTnlcTnTCTnC复合物作为校 准品（坷。 4抗凝剂 为缩短检测周转时间（TAT），许多检测方法要求采用血浆或全血，以避免分离血清所 需的时间。这需要合理选择适当的抗凝物。 EDTA EDTA是2+螯合剂,可促使cTnl - TnC复合物的解离,使游离型cTnl增加，从 而影响测定值的真实性。因此，有些专家认为最好避免使用。 肝素cTnl带有较多正电荷（pl ）叫易于和带有负电荷的基团形成复合物。肝素带有 负电荷，与cTnl结合形成的复合物可影响抗原抗体反应，进而引起cTnl检测值降低。但 在不同的cTnl检测试剂中，肝素的干扰程度不等】。 为使cTnl的测定更加准确，以便为临床提供