反相高效液相色谱法测定不同溶媒煎煮生化汤中阿魏酸的含量

1、文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，有帮助欢迎下载支持. 反相高效液相色谱法测定不同溶媒煎煮生化 汤中阿魏酸的含量 作者：王雁梅邢志霞史恒军王保秀 【摘要】目的比较不同溶媒煎煮的生化汤中阿魏酸含量的变化。 方法采用反相高效液相色谱法进行测定。结果不同溶媒煎煮对阿魏酸 的溶出率有影响(P0.01),其中以用黄酒、童便各半煎煮，阿魏 酸煎出量最高。结论生化汤的传统煎煮方法具有合理性。 【关键词】阿魏酸生化汤溶媒反相高效液相色谱法 Abstract： ObjectiveTo compare the contents of ferulic acid in Shenghuatang d

2、ecocted in different solvent MethodsThe contents of ferulic acid were determined by RP拟HPLC ResuItsDecocting in different solvent had influence on the contents of ferulic acid and the contents were the highest in Shenghuatang decocted in solvent containing half millet wine and half childish urine Co

3、nclusionThe traditional method of decocting herbs is reasonable Key words : Ferulic acid; Shenghuatang; Solvent; RP拟HPLC 生化汤是明末清初名医傅青主创立的妇科常用方剂，由当归 24 g,川巧9 g,桃仁6 g,炮姜2 g,炙甘草2 g组成，具有活血化 淤、温经止痛的功效,主治产后恶露不行，少腹冷痛等症。生化汤常用 水煎服，或酌加黄酒适量同煎；而在傅青主女科产后编医书中， 1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编借. 文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，

4、有帮助欢迎下载支持. 原方记载用黄酒、童便各半煎服1。为了探讨传统煎煮方法的科学 性与合理性，木实验以生化汤中主要药物当归、川茅的有效成分阿魏 酸（图1）为检测指标24,采用RP-HPLC法测定其含量，比较不 同溶媒煎煮生化汤中阿魏酸的煎出量变化。现报道如下。 图1阿魏酸化学结构（略） 1仪器与试剂 美国Waters公司高效液相色谱仪，600泵，996光电二极管 阵列检测器，77251手动进样器，M32色谱工作站，Waters在线脱气 系统，Digital586计算机，SZ拟93自动双重纯水蒸憎器（上海荣华生 化仪器厂）。 阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号 0773拟9910）；甲醇

5、（分析纯，天津市化学试剂二厂）；冰醋酸（分析 纯，开封化学试剂总厂）；水为自制新鲜双蒸水。 药材各饮片均购自唐都医药中药房，经浙江医药高等专科学 校中药系杨雄志副教授鉴定，当归为伞形科植物当归Angelica sinensis （ Oliv. ） Diels.的干燥根；川芳为伞形科植物川疗 Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎；桃仁为蔷薇科植物桃 Prunus persica （L. ） Batsch.的T燥成熟种子；炮姜为姜科植物姜 Zingiber officinaLe Rose.的干燥根茎的炮制加工品；炙甘草为豆科 植物甘草Glycyrrhiza uralen

6、sis Fisch.的干燥根及根茎的炮制加匸 品。样品凭证保存于我科。 黄酒为市售浙江绍兴县第三酒厂生产，童便为24 h内所收集 的1名1.5岁健康男童中段尿液。 2方法与结果 2.1色谱条件及系统适用性实验对阿魏酸对照品的甲醇溶液 进行紫外扫描显示，在234 nm和321 nm处紫外吸收较强。由于在321 nm处有最大吸收且干扰少，故选择321 nm为检测波长。固定相为日 木 GL Sciences 公司 Inertsil ODS 3 C18 反相柱（250 mmX4. 6 mm, 5 Um）, C18预柱（大连化学物理研究所）；流动相为甲醇一1%冰醋酸 水溶液（45 ： 55, v/v）；

7、流速1. 0 ml min-1；柱温为室温。进样量 20 Hlo 理论塔板数按阿魏酸计算，不低于3 000,阿魏酸与其相邻 色谱峰的分离度均大于1. 5o 2.2对照品溶液和供试品溶液的制备 2. 2. 1对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品0.36 mg, 甲醇溶解后，用流动相定容于10 ml棕色容量瓶中，得36. 0 mgL-1 对照品贮备溶液。从中精密量取适量，用流动相配成浓度为0.6, 1.2, 2.4, 4.5, 9.0, 18.0, 36. 0 mgL-1的系列标准工作液。 2. 2.2生化汤的制备1号煎液 按原方准确称取各味药共43 g,混匀后置于1 000 ml烧杯中，第1次加

8、水360 ml,室温下浸泡30 min,煮沸后文火煎30 min,用4层医用纱布滤过，残渣加水270 ml 重复以上过程，合并两次滤液，浓缩至100 ml,每毫升药液含0.43 g 生药。 24号煎液按原方准确称取各味药组成3齐叽分别置于3 个1 000 ml烧杯中，溶媒的添加见表1,余煎煮方法同1号煎液，即 采取相同的浸泡时间、煎煮火候、煎煮时间、第2次相同的加水量及 浓缩方法，得到100 ml药液，每毫升药液含0. 43 g生药。 另按1号煎液操作制备不含当归、川茅的水煎液作为阴性对 照液。 表1生化汤不同煎液中溶媒的选择(略) 2. 2.3样品的制备分别精密量取以上各煎液145 U1于1

9、0 ml离心管中,加入流动相4 855 ml,电动混匀3 min, 4 000 r min-1 离心5 min,取上清分别过0.25 Um微孔滤膜后，取续滤液备用。此 得到14号样品及阴性对照液，作为供试品溶液。 2. 3 HPLC 测定 2. 3.1标准工作曲线的绘制分别精密吸取阿魏酸系列标准液 20 U1,注入高效液相色谱仪，测定。以对照品峰面积(Y)为纵坐标, 以对照品溶液浓度(mgL-l, X)为横坐标，绘制标准工作曲线。所 得回归方程为：Y = 84 840. 72X-6 658. 3 (r = 0. 999 9, n=6)。结果 表明，阿魏酸在0.636. 0 mgL-1范围内呈良

10、好线性关系。最低检 测限为 0.58 ng (S/n=3)o 2. 3.2精密度、稳定性与回收率实验精密吸取对照品低、中、 高3个浓度，在24 h内测定其H内精密度，在6d内测定日间精密度, 结果平均日内精密度RSD = 2.08% (n = 5),平均日间精密度RSD = 1. 56% (n=5)o 精密吸取同一份样品(1号样品)20 U1,分别间隔一定时 间进样，测定5次，结果48 h内RSD = 1.45%。 精密吸取已测定含量的1号样品（3. 64 mg-L-1）,分别加入 一定量的对照品溶液，电动混匀后，4 000 r minT离心5min,取上 清分别过0.25 Um微孔滤膜后，2

11、0 U1进样，测定，平均回收率为 102. 3%, RSD=1.2%。 2. 3.3样品测定精密吸取14号样品及阴性对照液各20 u 1,分别进样3次，按外标法计算FA含量，并推算出每升煎液中FA 含量，所得结果见表2,其色谱图见图2。实验结束，采用完全随机设 计的单因素方差分析（one-way AN0VA）进行统计学处理（P0. 01）, 组间差异采用t检验。 a标准样品b生化汤煎液c阴性对照液1.阿魏酸 图2色谱图（略） 3讨论 观察生化汤中不同溶媒煎煮对阿魏酸含量的影响己有文献 5报道，溶媒选用水和黄酒，得出最好的煎煮方法为:第1次加水 200 ml,黄酒100 ml,第2次加水100

12、ml。我们在此基础上，进一步 观察了传统傅氏煎煮方法（即采用黄酒、童便各半煎煮）与常用水煎 煮或酌加黄酒适量煎煮进行了比较。结果表明，不同溶媒煎煮的生化 汤中，阿魏酸的溶出量存在显著差异（P0.01）；阿魏酸溶出高低 顺序为：（童便+黄酒）（黄酒+童便+水）（黄酒+水） 水；（黄酒+童便）、（黄酒+童便+水）与水煎组比，均可显著提高汤 剂中阿魏酸溶出量（P3, P40.01）；（黄酒+水）与水煎组无明显 差别(P20. 05)o中医中药理论认为，黄酒味苦甘辛温，有通血脉、 缓急止痛行药势之功；童便性味咸凉，归肺、肝、肾经，无毒，功效 滋阴降火，止血消淤。本草纲目载：“酒有开佛郁而消沉积，通膈

13、噫而散寒饮，治泄疟而至冷痛。”重庆堂随笔指出：“童子小便，最 是滋阴降火妙品，故为血证要药。”可见用黄酒、童便代水煎药是能够 增加或协同其发挥疗效的。木实验从化学成分分析的角度，为古方传 统煎煮的溶媒选择提供了科学依据，说明了古方溶媒选择的合理性。 同时也提示我们，如果方便仍应用传统的煎煮方法。 表2生化汤不同煎液中阿魏酸含量的测定(略) 与1号生化汤水煎液比较,l)P0.01； n=3 采用不同溶媒煎煮，生化汤中阿魏酸含量变化的原因，可能 为不同溶媒存在不同助溶现象。阿魏酸化学名称为4-疑基-3-甲基肉 桂酸，弱酸，不溶于水。黄酒是用糯米或粳米酿成的，含乙酸15% 20%,尚含糖类、脂类、矿

14、物质等成分。尿液pH值为6. 07. 0呈中性, 含有尿素、尿酸等有机质。采用童便、黄酒煎煮，在弱酸性环境中， 阿魏酸更容易析出，即发挥药剂阶段配伍效应。 木实验在文献36基础上，调整流动相比例，甲醇一 1% 冰醋酸水溶液比为45 : 55时，在选定的色谱条件下，阿魏酸得到较好 的分离，无杂峰干扰测定，其保留时间为10. 0 min左右，14 min可 完成一次测定。对样品的处理，采用流动相稀释后，离心，过滤，上 清直接进样，避免了有机溶剂萃取的影响，具有简单、快速、无毒等 特点。 【参考文献】 1段富津，李飞，尚炽昌.方剂学M.北京：人民卫 生出版社，1997： 202. 2 Ozaki Y, Ma JP. Inhibitory effects of tetramethylpyrazine and ferulic acid on spontaneous movement of rat uterus in situ j . Chem Pharm Bull, 1990, 38 (6): 1620. 3 王鹰,殷放宙，王元山.RP-HPL法测定生化汤丸中阿 魏酸含量J.南京中医药大学学报,1999, 15