果蝇唾腺染色体的制片与观察

1、果蝇唾腺染色体的制片与观察、实验目的1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法;2、观察果蝇的唾腺染色体。、实验原理1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型染色体。唾腺染色体的显著特征是：(1) 形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100200 倍；(2) 核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；(3) 带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度 有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。 唾腺染色体的DNA含量达4, 000 8，000c。横

2、纹被认为是染色小粒横向 排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易 位等现象的标记；(4) 由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇(2n= 8)中，V形的 第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝 粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为 Bal- biani环。一般把多线性 的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞 中，以及在植物界的Rhi nan thus (胡麻科)的胚盘细胞、虞美人草的反足 细胞等都能看到具有这样特征的

3、染色体(巨大染色体或多线染色体)。果蝇唾液腺:2、 果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期， 构成一个永久间期系统。唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方 至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧 地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。由于细胞分裂停止 在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得 多，宽约5um长约2000um是其体细胞中期染色体长度的100200倍。 伸展形式的DNA长度约为40000um只需简单的染色和压片，就可以很容

4、易地在光学显微镜下观察到。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。 并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开， 每条染色体大约有10004000 根染色体丝的拷贝，经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横 纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体 有缺失、重复、倒位易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和 巴尔比尼环，其富含转录出来的 RNA，因此不着色，是基因活动的区域。 在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上出现的部位不同， 因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。果蝇共有4对

5、染色体。其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端 着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为 中央着丝粒染色体，呈“ V形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色 体，呈点状，附在染色盘边缘。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央， 可以从异染中心呈“ V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y染 色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不 管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R）和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。雄果蝇唾腺细胞中的X

6、染色体臂 比雌果蝇的稍细。在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。四2BFAT 白OD*HISTDM kC-ITESTiNE事一|耐 唾液腺m t5-2 水爻（&也体的竹罠*段，幫实验仪器：解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸等实验材料：果蝇三龄幼虫、醋酸洋红、生理盐水、1M盐酸等1、幼虫培养：置于16-18 C下饲养，当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前，即为三龄幼 虫，此时虫体肥大，便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想时期；材料与器材方法与步骤幼虫解剖：将载玻片置于解剖镜下，滴一滴生理盐水。将幼虫置于生理盐水 内，一手持解剖针按住幼虫前端的1/3处，固定幼虫。另一手持针揿住幼虫 头部正中，

7、用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而出：曲15 1C 舉瞩“丿一 .Zsr供曲mdl*腮星也倬显&頤片15 - A Jl嵌崟瞠腺卑也怵推式昭*xn AA 9AIM3 十13 If(I I IAii ft a I i M i 1 i i 123-5*； y |-3p-唾腺为半透明小囊状，其上附有脂肪带，食道两侧各一个。找到唾腺后 尽可能把腺体上的脂肪剔除；3、染色前处理：清除脂肪体等残体，使载片上只留下唾腺；4、酸解：把腺体放入1N HCI中浸泡2-3分钟，水洗3次；5、染色：滴上几滴醋酸洋红于唾腺上，染色 30分钟；6压片：在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，然后以拇指适当用力压片,

8、要求将唾腺细胞核压破，染色体伸展开来而不破碎为好；7、显微镜观察：压好的玻片标本，用显微镜观察四对染色体。五、 实验结果染色中心 可观察到 5 条长臂（压片时局部用力过大导致臂部分断裂） ：染色体十分巨 大，每条臂的横纹有深浅、数目、疏密的不同，各个染色体中异染色质多的 着丝粒部分相互靠拢形成颜色较深的染色中心。六、 实验讨论制片时操作要点：1 、本次制片一份染色较浅，但尚可观察到横纹，臂伸展开但由于局部用力过 大导致臂部分断裂，而另一份伸展不够，所以，好的装片染色适中，压片 时用力均匀适中，使五条臂充分展开而不断裂；2 、一定要加生理盐水，否则唾液腺容易干，影响其正常形态，进而影响观察。 但

9、生理盐水不可加太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。如水多了，小心吸水， 在剥离唾腺前吸走些，唾腺剥离后勿吸水，以防将唾腺一起吸走。 ；3、避免将幼虫肠道扯出，否则不易找到唾液腺；4、将脂肪组织清除干净，若脂肪真的很难去除，则可用解剖针截取一部分 没有脂肪的唾液腺细胞，不必一定要完整的唾液腺；5、水洗盐酸时，要洗净，否则不易染色；6、染色液勿过多，否则压片时唾腺易随染色液漂走。如染色时间到后，染 色液已干，应再少加些染色液，再盖上盖波片，避免气泡产生；7、染色时间不要太长，否则背景会着色，影响观察效果；8、用吸水纸吸取液体时，注意不要将唾液腺吸到吸水纸上。实验中，可倾 斜载玻片，让载玻片上的液体慢慢流下，而唾液腺粘在载玻片上游，用吸 水纸在下游轻轻吸取溶液。向唾液腺组织滴加染液或蒸馏水时，若滴管口 距离载玻片太近，滴下液体时，由于水的表面张力作用，唾液腺会被水带 到滴管口上，可将滴管