三七总皂苷的减压内部沸腾提取及树脂吸附分离

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减 三七总皂昔的减压内部沸腾提取及树脂 【摘要】 （作者：单位：邮编：） 作者：李春玲，翁艳英，赵钟兴，韦藤幼，童张法 目的提高三七总皂昔的收率及纯度。方法三七粉末经 少量70临醇解吸后，以水为溶剂在45C及0084 MPa下进行减压 内部 沸腾提取，提取两次，4 min/次，提取液经浓缩后，直接采用大孔树脂 进行吸附分离。结果得到的浸膏中三七皂昔R1、人参皂昔Rb1及Rg1三 者含量之和达到70.0%,得率达到5.4%,大大高于传统方法。结论减压 内部沸腾提取与大孔树脂吸附分离相结合的工艺具有提取速度快 无需 水沉或醇沉工序、收率高及质量好等特点，具有良好的

2、应用前景 【关键词】三七；三七皂昔；提取；减压；内部沸腾 Abstract : ObjectiveTo in crease the yield and the purity of total sap onin of Panax no togi nsen g.MethodsThis study applied decompressive internal boiling method for the extraction .In this method, Panax notoginseng powders were desorbed by the 70 percent ethanol at fi

3、rst, and then were extracted twice in 45 C and -0.084Mpa by the water solve nt,each time 4min. After condensed the solution was directly purified with macroporous resin ResultsThe total contents of no tog inseno sideR1 and Ginsenoside Rb1, Rglfrom extract could get to 70.0 % ,the yield was 5.4%, and

4、 these two results were muchhigher than those from traditi onal method .Con clusi on The method of decompressive internal boili ng extracti on comb ined with macroporous res ins absorpti on separati on has many features such as fast extracti on, high yield and good quality, without water precipitati

5、o n or alcohol precipitati on etc. Key words : Panax notoginseng ; Notoginseng saponin ; Extraction ; Decompress!on ; Internal boiling 三七主要产于云南广西等地1,其总皂昔具散淤止血、活 血化淤、消肿止痛等功效。为了避免三七根中淀粉糊化，目前主要采用 醇提2和提取液水沉、大孔树脂纯化的工艺3,乙醇消耗量大，有 效成分损失多。文献4提出米用内部沸腾法提取植物有效成分。为了 降低提取温度，文献5提出了减压内部沸腾的方法。本文把减压内部 沸腾提取与大孔树脂吸附分离相结

6、合，对三七总皂昔 进行了提取与分离。结果表明，在45C提取得到透明干净的上柱液，经 柱纯化后得到总皂昔含量为70.0%，得率为5.4%的产品，与传统 法相 比，生产效率及产品质量都有明显的提高。 1器材 1.1材料三七（产地云南）。人参皂昔Rg1和Rb1及三七皂昔R1对 照品（中国药品生物制品检定所，110703-200322） ; 95沱酉孚 甲醇 （分析纯）；乙膳（色谱纯）；大孔吸附树脂HPD-400 （河北沧州宝恩 化工有限公司）。 12设备PC2501紫外分光光度计、RE-52AA型旋转蒸发器、FZ102 微型植物粉碎机、精密恒温浴槽、电热真空干燥箱、液相色谱 Waters2695 （

7、美国 Waters 公司）。 2方法 2.1提取减压内部沸腾法：取10.00 g三七粉碎物料于三角瓶中，加 入一定量浓度乙醇溶液作为解吸剂使之润湿均匀，25 C静置解吸 30 min时间（除了第2次提取用的是湿物料外，两次提取的解吸操作均 相同）；待解吸充分后，加入一定温度热水，同时迅速降低三角 瓶中气 压，使物料内部有少量气泡溢出，实现内部沸腾强化提取，提取两次， 合并滤液，分析。 底烧瓶 传统醇提：取10.00g三七粉碎物料，放于250 ml 中，加入100 ml 70%的乙醇溶液提取剂沸腾回流提取两次，提取15h/ 次，合并滤液，分析。 2.2减压内部沸腾法提取液的大孔树脂纯化吸附泄漏曲

8、线：称取预 处理好的H PD-400树脂15g，湿法装填于直径10mm,高300 m m的吸 附柱。分别取300 ml浓缩至U 8 mg/ml, 4 mg/ml和2 mg/ml的三 七提 取液以每1 ml/min的速度上柱，每10 ml收集1次流出液，分 析流出 液，绘制泄漏曲线。 洗脱剂浓度选择：将吸附三七提取液的树脂先用蒸f留水洗去除 杂质，再分别用100 ml 50%, 60% 70% 80% 90%勺乙醇洗脱，将流出 液进行分析，确定最佳洗脱剂浓度。 2.3传统提取液的大孔树脂纯化提取液的预处理：把提取液浓缩到 4 mg/ml,过滤去掉沉淀物，得到上柱液。 吸附纯化：在直径10 mm高

9、300 mm的吸附柱中，装入预 处理好的H PD-400树月旨15g,然后以每1 ml/min的速度上柱140 ml, 然后分别用蒸f留水洗涤和100 ml 80%乙醇洗脱，洗脱液经浓缩后， 干燥得到产品。 2.4高效液相色谱分析6 2.4.1色谱条件色谱柱为C18(4.6 mmx 250为室温； 流动相为乙膳与水梯度洗脱；流速1 ml/min ;检测波长205nm；检 测灵 敏度1AUFS 2.4.2对照品溶液的制备精密称取R1, Rg1, Rb1各10.00 mg分别 于3个10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。使其制成各1.00 mg/ml的标准溶液。各取适量配成R1, Rg1,

10、Rb1混合标准液。 2.4.3线性关系分别精密吸取人参皂昔Rg1, Rb1, R1混合标准液 5, 10, 20, 30, 40卩I注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标 （Y），对照品进样量为横坐标（X）进行线性回归：人参皂昔Rg1和Rb1 及三七皂昔R1回归方程分别为Y=186X-18947 （r = 0.999 8 ） , Y =178X -24 404（ r = 0.999 9 ）及 Y=180X+413 （ r= 0.999 8 ）, 测量的精密度RSD分别为1.2%, 0.65%及0.62%o 25得率的定义得率（Yield ）二提取得到Rg1, Rb1, R1质量之和/原 料质量X 1

11、00% 3结果 3.1减压内部沸腾解吸过程影响因素解吸过程的目的是让解吸剂充分 渗透植物细胞组织，使有效成分离开原来的位置溶解于解吸剂中。图1 2分别是在减压提取条件（100 ml蒸f留水、温度及相应的压力为50（2及 0.075 MPa两次提取都为4 min）相同下，不同乙醇 浓度（乙醇用量固定 为8 ml）和乙醇用量（乙醇浓度固定为70%对提 取得率的影响。从图1 2知，这些因素对得率的影响都存在最佳值，乙醇浓度太高或太低，其 渗透植物细胞的效果都不理想；乙醇用量太 少渗透不均匀，太多消耗过 多提取溶剂的热量，影响内部解吸剂沸腾 效果。最佳解吸条件为8 ml 70%乙醇溶液。 图1乙醇浓度

12、对提取得率的影响（略） 图2乙醇用量对提取得率的影响（略） 3.2减压内部沸腾过程因素的影响图35分别是在最佳解吸条 件 下，不同提取温度（提取时间4 min/次、水用量100 ml）、不同水用量 （提取温度45C相应压力为-0.084 MPa,提取时间4 min）、不同提取 时间（提取温度45C相应压力为0084 MPa水用量100 ml） 的提取结果。在图3中三七皂昔得率随温度升高而升高，主要原因是温 度高内部沸腾充分，但温度超过45 C后得率增加不多，考虑温度高会导 致淀粉糊化，影响后续分离，选用45 C为最佳提取温度。图4中三七皂 昔得率随水用量增加而增加，当溶剂用量达100 ml时三

13、七 皂昔得率已接近最大值；图5表明，尽管提取温度较低，但每次提取只4 min,三七皂昔得率便达到最大值，充分显示内部沸腾提取速度的优势。 图3水的温度对提取得率的影响（略） 图4水的用量对提取得率的影响（略） 图5提取时间对提取得率的影响（略） 3.3大孔树脂纯化图6是3个浓度上柱浓缩液的吸附泄漏曲线。虽然 最浓上柱液吸附效果欠佳，但实验发现吸附、脱附及再生过程柱没有堵 塞，这说明减压内部沸腾与大孔树脂分离的直接配合是可行的。而4 mg/ml的上柱液浓度是合适的，每次为140 mL图7是乙醇洗脱液浓度 对提取得率的影响，乙醇浓度为80 %时提取得率最高。 图6不同浓度上柱液的泄漏曲线（略） 图

14、7洗脱剂浓度对树脂解吸效果的影响（略） 3.4减压提取法与传统回流法的比较表1为本方法与传统方法 的主要结果比较。从表1中可以看出：加热提取快了 22倍（不考虑室 温处理时间）；乙醇用量减少了 2.4倍，主要是传统法用乙醇 提取， 而本方法用水提；总皂昔得率及含量分别提高了14 %和 7.7%,传统法收率低主要是上柱前经过过滤造成的损失及Rb1的收 率下降过多，含量低主要是上柱液杂质多引起的；虽然R1及Rg1含量 比传统法稍低，但由于得率高，总的提出量还是比传统法高，但Rb1含 量比传统法高了 9.2%,原因是Rb1热稳定性较差，长时间加热提取损 失较大。 表1减压法与传统醇提法的比较(略) 4讨论 减压内部沸腾提取与大孔树脂吸附分离的结合，可以省去水沉 或醇沉工序，生产效率及产品质量明显好于传统方法。 减压内部沸腾法提取最佳操作参数为解吸剂乙醇浓度为 70%用量为样品量的1.6倍，在-0.084 MPa及45C下提取，提取两 次， 4 min/次，水用量为物料量的20倍。 由于存在热敏性成分Rb1,减压低温提取对三七是比较适宜的。 【参考文献】 ：1刘种，韩金玉，常贺英，等三七茎叶提取物中人 参皂昔Rb3的分离及指纹图谱J 天津大学学报,2006,39(10):1151. ：2 唐红芳，毛丽珍,徐世芳正交试验法研究三七提取工艺 J