MMFSCNJ出口肉及肉制品中奥芬达唑残留量检验方法

1、MM_FS_CNJ_OO出口肉 肉制品 奥芬达唑 残留量 气相色谱法MM_FS_CNJ_0086出口肉及肉制品中奥芬达唑残留量检验方法1. 适用范围 本方法适用于出口猪肉中奥芬达唑残留量的检验。2. 原理概要 试样经用碳酸钠碱化后， 用乙酸乙酯及丙酮抽提。 蒸发提取液至干， 溶解残 留物于正己烷中。正己烷溶液中的奥芬达唑经液 - 液分配而进入磷酸溶液中。酸 溶液经碱化后， 再用乙酸乙酯提取。 将乙酸乙酯层挥发至近干， 残渣溶解于二氯 甲烷并加到硅胶小柱中净化，用甲醇 - 二氯甲烷洗脱。洗脱液挥发后，将残渣溶 解于流动相中供HPLC测定。3. 主要试剂和仪器3.1. 主要试剂 乙酸乙酯：重蒸馏；

2、 丙酮：重蒸馏； 正己烷：重蒸馏； 甲醇：重蒸馏； 二氯甲烷：重蒸馏； 无水乙醇；无水硫酸钠：650E灼烧4h，贮于密闭容器中备用； 碳酸钠溶液：1mol/L。溶解106g无水碳酸钠于1L水中；磷酸溶液：1mol/L。将67.4mL磷酸85%密度（p ）约1.71g/mL用水稀 释至 1 L ；氢氧化钾溶液：10mol/L。溶解560g氢氧化钾于水中，用水稀释到1L; 磷酸铵缓冲液：0.01mol/L , pH 7.0。溶解1.15g磷酸二氢铵（NH4H2PQ）于约 950mL水中，用稀氨水调节pH至7.0，并用水稀释到1L（临用时现配）;HPLC 流动相：甲醇 -磷酸铵缓冲液 （5545）；

3、 奥芬达唑标准品：纯度99% 奥芬达唑标准溶液：准确称取10mg奥芬达唑标准品，溶于10mL二甲基亚砜， 制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。根据需要再用甲醇稀释储备液成适当浓度 的标准工作溶液。3.2. 仪器 液相色谱仪：配有紫外检测器； 旋转蒸发器； 均质器；离心瓶： 250mL； pH 计；全玻璃系统蒸馏装置； sep-Pak 硅胶小柱；过滤器：0.2卩m。4. 试样的抽取与制备4.1. 检验批以不超过 2500 件为一检验批同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。4.2. 抽样数量 批量，件12526 100101 250251500 5011000100

4、125004.3. 抽样方法最低抽样数，件1510151720按规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。从每件中取一袋作为原始样品， 原始样品总量不少于2kg，放入清洁容器内，加圭寸后，标明标记，及时送交实验 室。如每件中无小包装，或有小包装但每袋重量超过 2kg 者，可用经灭菌的锋利刀， 在抽出的包件中，每件割取不少于 100g,混合后置于洁净容器内，作为混合原 始样。混合原始样的重量不少于 2 kg。加圭寸后，标明标记，及时送交实验室。4.4. 试样制备从所取全部样品中取出有代表性样品约 1kg，经组织捣碎机充分捣碎均匀， 均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。加圭并标明标记。4.5. 试样

5、保存将试样于18C以下冷冻保存。 注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。5. 过程简述5.1. 提取称取10g试样(精确至0.1g)于250mL离心瓶中，加5mL碳酸钠溶液(1mol/L) 和150mL乙酸乙酯，高速匀浆5min。再加80g无水硫酸钠，继续匀浆1min(低速)。 于2500r/min离心1min，再将乙酸乙酯层通过滤纸滤入旋转蒸发瓶中。加150mL丙酮到离心瓶中，再低速匀浆提取 23mi n。将丙酮提取液再通过滤纸滤入旋转 蒸发瓶中。用10mL无水乙醇洗涤滤纸，将洗液并入滤液中。于 50 C水浴上旋转 浓缩至干。5.2. 净化用10mL正己烷

6、溶解残渣，将溶液移到125mL分液漏斗中。用10mL正己烷洗 涤蒸发瓶，洗液并入分液漏斗中。然后用2X 10mL磷酸溶液(1mol/L)洗涤蒸发瓶， 洗液全部并入分液漏斗中。剧烈振摇提取 2mi n，静置10mi n，使分层。将下层磷 酸溶液转入第二个125mL分液漏斗中。再用10mL磷酸溶液(1mol/L)提取正己烷 层两次，将磷酸提取液全部并入第二个分液漏斗中。加10mL正己烷到磷酸提取液中，振摇洗涤30s。将磷酸提取液放入100mL的烧杯中，用约9mL氢氧化钾溶 液(10mol/L)小心地调节pH到8.5( 1.0)。在碱化时，应将烧杯置于冰浴中， 并用pH计测pH值。将烧杯中的溶液转入

7、250mL分液漏斗中，用总量为50mL的 乙酸乙酯分数次洗涤烧杯，洗液全部转入分液漏斗中。剧烈振摇提取2mi n,静置分层。将水相放入100mL烧杯中，然后将乙酸乙酯层通过衬有玻璃棉和约 40g 无水硫酸钠的漏斗滤入 250mL旋转蒸发瓶中。将烧杯中的水溶液倒回分液漏斗 中，再用50mL乙酸乙酯如法提取一次。弃去下层水溶液，将乙酸乙酯层通过无水硫酸钠漏斗并入同一旋转蒸发瓶中。用 25mL乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠漏斗， 洗液并入蒸发瓶中。置旋转蒸发器上（50 C水浴）将提取液挥发至干。用3mL二氯甲烷溶解残渣。用2mL二氯甲烷预淋硅胶小柱，然后将上述二氯 甲烷样液倒入硅胶柱中，用3mL二氯甲烷洗涤

8、蒸发瓶两次，洗液也倒入硅胶柱中， 弃去流出液。以5mL二氯甲烷洗涤硅胶柱，弃去流出液。用 5mL甲醇-二氯甲烷 （1 + 3）洗脱柱上奥芬达唑，收集洗脱液于试管中。通氮气流将洗脱液挥发至干。 准确加入0.5mL流动相以溶解残渣，溶液通过 0.2卩m过滤器过滤后，供 HPLC 测定。5.3 HPLC 测定5.3.1. 液相色谱条件色谱柱：LichrosorbrP-18 ，25cmX 0.46cm（内径），5卩m粒径），或相当者; 保护柱：LichrosorbrP-18 ，3cmX 0.46cm（内径），5卩m粒径），或相当者;HPLC流动相：甲醇-磷酸铵缓冲液（55 + 45）;检测波长：298

9、nm流速：1.0mL/min ；进样量：50卩L。5.3.2. 测定根据样液中被测兽药含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作液 和待测样液中奥芬达唑的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液与样 液应等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，奥芬达唑的保留时间约为 9.0min ;标准品的色谱图见附录 A中图A1。5.4.空白试验除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。6. 结果计算用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中奥芬达唑的残留含量:X=h c Vhs m(1)式中：X 试样中奥芬达唑残留含量，mg/kg； h样液中奥芬达唑的色谱峰高，mm hs标准工作液中奥芬达唑的色谱峰高，mm c 标准工作液中奥芬达唑的浓度，卩g/mL； V样液最终定容体积，mL;m最终样液所代表的试样量，g。注：计算结果需将空白值扣除。7. 低限、回收