如何用淀粉酶水解法测淀粉含量

1、 如何用淀粉酶水解法测淀粉含量 测定淀粉的方法很多， 酸水解法适用于淀粉含量多， 而不 含半纤维素、多缩戊糖的试样。国家标准规定，以酶水解法为标 准方法。 一、原理 样品被除去脂肪和可溶性糖类经过糊化后， 用淀粉酶水解生 成相当量的麦芽糖， 再用稀酸使麦芽糖水解成为葡萄糖， 测定葡 萄糖量即可换算出淀粉含量。反应时的化学反应式如下： (C6H10O5)n + nH2O 淀粉酶 C12H22O11 淀粉水 麦芽糖 C12H22O11 +H2OH+ 2C6H12O6 麦芽糖水 葡萄糖 二、仪器和用具 25毫升古氏坩锅； 500 毫升抽滤瓶；真空泵或水泵； 25毫 升滴定管； 100 毫升、 250

2、 毫升、 500毫升的容量瓶；回流冷凝 管；电炉； 150毫升锥形瓶； 20毫升移液管； 100毫升、 250毫 升、 500毫升的容量瓶；回流冷凝管；电炉； 150毫升烧瓶； 6 厘米漏斗；研钵、温度计、显微镜等。 三、试剂 1.0.5 淀粉酶溶液或麦芽汁 称取 0.1 克淀粉酶，加水 20 毫升溶解摇匀。或取大麦粒加 水湿润浸泡 12小时，在搪瓷盘内平铺约 1 厘米厚，使其发芽数 日。待幼芽长到 1 厘米左右时，取发芽粒 50克磨碎，加水 400 毫升，在常温下浸渍 3 小时，过滤备用。 2. 碘溶液 取碘化钾 3.6 克，溶于 20 毫升水中，加碘 1.3 克溶解后再 加水至 100 毫

3、升。 3.0.1N 高锰酸钾标准液 4.1N 氢氧化钠溶液 取氢氧化钠 4 克加水溶解至 100 毫升。 5. 硫酸铁溶液 取硫酸铁 50 克，加水 200毫升溶解后，慢慢加入硫酸 100 毫升，冷却后加水至 1000 毫升。 6. 3N 盐酸 取浓盐酸 25 毫升，加水至 100毫升。 7. 6N 盐酸 取浓盐酸 100毫升，加水至 200 毫升。 8. 20 氢氧化钠溶液 9.甲基红指示液， 0.1 甲基红乙醇溶液 10. 费林氏溶液 甲液：取硫酸铜结晶 34.639 克，加水适量水溶解，加硫酸 0.5 毫升，再加水至 500 毫升，用精制石棉过滤；乙液：取酒石 酸钾钠 173克与氢氧化钠

4、 50 克，加适量水溶解，稀释至 500毫 升，用精制石棉过滤，储存于具有橡皮塞的玻璃瓶中。 11. 精制石棉 先用3N盐酸将石棉浸泡23日后，用水洗净。再加10% 氢氧化钠溶液浸泡23日后，除去溶液，用热碱性费林氏液浸 泡数小时，用水洗净。再以 3N盐酸浸泡数小时，水洗至不呈酸 性，成为微细的软纤维，水浸泡储存于玻璃瓶内，作填充古氏坩 埚用。 四、操作方法 1. 分离脂肪与可溶性糖 精桷称取磨碎试样 25 克，置于放有折叠滤纸的漏斗内， 先 用乙醚 50毫升分 5次洗除脂肪，再用 85%乙醇洗去可溶性糖。 2. 糊化 将残留物移入 250 毫升烧杯中，用水约 50 毫升分几次将滤 纸上残渣洗

5、入烧杯中， 放到沸水浴中加热 15 分钟， 使淀粉糊化。 3. 糖化 在糊化淀粉冷至60C时，加淀粉酶溶液（或麦芽汁）20毫 升，维持55C60C水解1小时，经常搅拌。然后取 1滴水解液 加碘液 1 滴，如显蓝色，再加热糊化，并加淀粉酶溶液（或麦芽 汁） 20 毫升，水解至碘液不呈蓝色为止。加热至沸腾，冷却后 移入 250 毫升容量瓶中，并加水至刻度、混匀、过滤，弃去最初 几滴滤液，此为酶水解液（麦芽糖）。 4. 加酸水解 取酶水解液50毫升，注入100毫升容量瓶中，加6N盐酸5 毫升，在6870C水浴中加热15分钟；冷却后加入2滴基红指 示剂，用 2 0氢氧化钠溶液中和，加水至刻度混匀，此为酸水 解液（葡萄糖），用以测定还原糖。 5. 测糖 取酸水解液 50 毫升，照前过费林氏溶液法测定其中的还原 糖，同时取水 50 毫升和同量的淀粉酶溶液（或麦芽汁）作试剂 空白试验。 6. 结果计算 淀粉干基含量按下列公式计算： 淀粉（干基%）= 式中A转化后测得的还原糖（以葡萄糖计）重量，毫 克； B 试剂空白相当于还原糖（以葡萄糖计）重量，毫克； V转化后稀释为100毫升，测定还原糖体积，毫升； W试样重量，克； M试样百分率，; 0.9 还原糖（以