10004菌种管理规程完整

1、 文件名称 菌种管理规程 文件编号 QB-WI/10-004-00 版本号 00页码 制定人 制定日期 审核人 审核日期 批准人 批准日期 生效日期 管理部门 质量部 分发部门 总经理口技术部口质量部口生产部口管理者代表口 商务部口销售部口行政部口仓库口 序号 修订原因及目的 修订容 01 文件新建 / 文件名称 菌种管理规程 文件编号 QB-WI/10-004-00 版本号 00 页码 1. 目的 规微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生 物学检验结果的准确可靠。 2. 适用围 适用于微生物实验用菌种管理，包括菌种的申购、传代、使用及销毁等。 3

2、. 引用/参考文件 ChP2015 实用药品微生物检验检测技术指南 4. 职责 质量控制实验室负责菌种的申购、传代、使用、销毁等工作，QA负责监控和参与00S调查。 5. 程序 5.1术语和定义 5. 1. 1标准菌株 由中国药品生物制品检左所医学微生物菌种保藏管理中心或者其他经认可的机构提供的冷冻干燥 菌。 5. 1. 2传代菌株 用标准菌种制备的采用特左保存方法长期固立保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种，3代后的 传代菌株在需要时可以作为工作菌株使用。 5. 1.3工作菌株 用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜而培养后，作为日常工作使用的菌种。 5.1.4菌种的代 将菌种接种至一新鲜培

3、养基上或培养基，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥 菌种为第0代。 5. 2菌种来源 5. 2. 1标准菌株由中国药品生物制品检左所医学菌种保藏中心(CMCC)或者英他经认可的机构提供的冷 冻干燥菌种。 5.2.2质量控制实验室涉及到的菌种种类、代码、保存方法及保存条件如下。 菌种名称 菌种代码 保存方法 保存温度 保存期限 金黄色匍萄球菌 CMCC(B)26003 TSA斜而 281 1个月 冷冻干燥管 -2or 1年 铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104 TSA斜而 2 8C 1个月 冷冻干燥管 -20C 1年 枯草芽抱杆菌 CMCC(B) 63501 TSA斜而 2 8

4、C 1个月 冷冻干燥管 -2oc 1年 白色念珠菌 CMCC(F)98001 SDA斜而 2 8C 3个月 冷冻干燥管 -2or 1年 黑曲霍菌 CMCC(F)98003 SDA斜而 2 8C 3个月 冷冻干燥管 -2or 1年 生砲梭菌 CMCC(B)64941 TSA斜而 2 8C 1个月 冷冻干燥管 -20C 1年 5.3菌种的申购、验收、保存 5.3. 1菌种的申购 5. 3. 1.1微生物室QC依据菌种的库存及菌种的使用情况，提岀采购申请，申请需明确菌种的名称，标 准编号以及申购数量等信息。 5. 3. 1.2质量部经理对申购汁划进行审批，审批后由公司的商务部按要求进行采购，采购过程

5、执行采 购控制程序。 5. 3. 1. 3菌种的采购需向法定的业务部门或者认可的机构采购。 5. 3. 1.4购买菌种的同时应保留相关证明资料，说明菌种的名称、代数、数量等。 5.3.2菌种的验收 5. 3. 2.1微生物室QC负责对采购回的菌种以及相关的证明资料进行验收： 5. 3.2.2验收应包括菌种外包装的完好性、具体验收的依据为批准后的申购讣划。 5. 3. 2. 3验收符合后签字确认并领回菌种，及时填写菌种验收、入库记录，并将菌种的相关证明资 料贴在菌种接收登记表当页背面留存。如验收不符合则拒绝签字领用，商务部负责退货处理。 5.3.3菌种的保存 5. 3. 3.1验收合格的冷冻干燥

6、菌种，应保存在温度设左为-20冰箱中保存，有效期可至1年。 5. 3. 3. 2验收后的菌种需在验收合格接收后14天完成转种。 5.4菌种的传代 5. 4. 1菌种的传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第0代（GO）,冷冻干燥 的原始菌种开启后转种，为第1代（G1）； 5.4.2标准菌种的复、确认及传代 5. 4. 2.1标准菌种的复 5. 4. 2.1.1将一次性吸管数支、培养皿、银子、冻干菌种管、装有TSB试管或SDB试管等移入生物安全 柜中，开启生物安全柜的紫外灯火菌30min后关闭紫外灯，备用。 5. 4. 2.1.2将冻干菌种管外壁用75%的乙醇棉球擦拭一遍，放

7、入培养皿中，待干。点燃酒精灯，将标准 菌种管封口的一端过火后开启，用一次性吸管吸取少量相应液体培养基或者稀释液，加入冻干管将菌种 溶解。黑曲殆的菌种因为是抱子悬液管不需要加入液体培养基，直接拧开即可。 5. 4. 2.1. 3将菌种加入到相应的液体培养基中，根据菌种类型的不同将其置于不同温度下培养不同时 间。原冻干菌种管、使用过的一次性吸管待121C, 30min髙温湿热火活后处理。不同菌种稀释液与培 养条件见下表。 菌种名称 菌种代码 稀释液 培养温度 培养时间 金黄色匍萄球菌 CMCC(B) 26003 TSB 30-35C 72h 铜绿假单胞菌 CMCC(B) 10104 TSB 30-

8、35C 72h 枯草芽抱杆菌 CMCC(B)63501 TSB 30-35C 72h 生砲梭菌 CMCC(B) 64941 硫乙醇酸盐流体 培养基 30-35C 18-24h 白色念珠菌 CMCC(F)98001 SDB 20-25C 120h 黑曲霉菌 CMCC(F)98003 SDB 20-25C 120h 5. 4. 2. 1.4取出培养物，观察液体培养基是否浑浊，浑浊说明菌种复，若不生长，应继续延长培养时间 （细菌：至少7天，真菌和酵母菌至少15天），仍不浑浊，12C, 30min髙温湿热火菌后废弃，需要 时，启动偏差调査。 5. 4. 2. 2菌种的确认 用已经过消毒的接种环挑取上述

9、培养物接种到TSA （细菌）或SDA （真菌和酵母菌）平板上，然后 在相应温度下培养相应的时间（细菌:3035C, 48-72h：酵母菌:2025C, 72120h；黑曲霍：20 25C, 57d）,观察菌落形态，与标准形态进行比对确认，确认结果应及时记录在菌种确认记录。 5. 4. 2. 3标准菌种的传代 5. 4. 2. 3.1按照菌种说明书要求复溶菌粉，转种至适宜的液体增菌培养基复后的培养物称为第1代 （G1）,菌种传代应填写菌种传代记录。 5. 4. 2. 3. 2菌种确认后，如确认符合，则从液体培养物中挑取培养物第1代（G1）转接至相应琼脂培 养基斜而上各数支（每种菌种至少3支），经

10、过相应温度培养时间（细菌：3035C, 72h；酵母菌：20 25C, 120h；黑曲霉：2025C, 57d）培养：同时G1在121C, 30min高温湿热火菌后废弃。 5. 4. 2. 3. 3取出其中2支作为传代菌种，此为第2代（G2）,保存在温度设泄为28C冷藏柜中保存： 另外1只G2进行传代，此为第3代（G3）, G3根据检测需要确泄传代数量，斜而菌株均保存在28C 冷藏柜中，工作菌种和传代用菌种分别包扎后保存。 5. 4. 2. 3. 4按照上述操作，G5为最后一代，不得继续进行传代，需要重新申购冷冻干燥菌种管，重复 上述操作，保存和使用菌种。 5. 4. 2. 3. 5细菌每1个

11、月传代1次；靈菌、酵母菌及芽抱每3个月传代一次。 5. 4. 2. 4菌种传代时注意无菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丢失。同时微生物室QC也应采取有效 的预防措施进行自我保护，如工作时须穿工作服，佩戴手套，口罩等。实验完成后对实验区域、设施设 备、用具等进行适当方式消毒。如发生意外，如菌种泄漏或人员受伤，微生物室QC应及时向QA报告以 便及时处理。 5. 4. 2. 5工作菌种和传代菌种无实质区别，必要时，可作为另一种的备用菌种使用。 5.4.3菌种的编号 5. 4. 3.1菌种编号原则：英文缩写字母-代次-顺序号-传代日期： 5. 4. 3.1. 1菌种的英文缩写字母：金黄色葡萄球菌（S.

12、 a）、铜绿假单胞菌、（P. a）、枯草芽抱杆菌（B. ）、 白色念珠菌（C.a）、黑曲霉（A.n）。 5.4. 3.1.2代数的表示用带有下标数字的字母表示，例如：G3表示菌种的第3代。 5.4. 3.1.3每种菌种每次传代顺序号从01开始，例如一种菌种一次性转种到4支试管上，那么顺序号 一次为 01, 02, 03, 04o 5. 4. 3.1. 4传代日期用八位数字表示：年份四位数，月、日分別用两位数表示。 5. 4. 3. 1. 5例如P. a-G2-03-20170306标识2017年03月06日传代的第2代铜绿假单胞菌的第3只。 5.5菌种的保藏 5.5.1菌种设专人加锁保管，除铜

13、绿假单胞菌于室温保藏外，苴他斜而菌种均在2-8C条件下保藏 5. 5.2菌种的建期检查与鉴定 5.5. 2.1日常检査 菌种在保藏期间，工作日应每天上午和下午两次检查保藏菌种冷藏柜的温度是否正常、必要检査菌 种管的塞子是否松动、是否染菌，检査结束应及时填写菌种日常检查记录。 5.6菌种的使用 根据工作需要，领取工作用菌种或者传代用菌种，同时填写菌种使用记录。菌液一般在制备完 后当天使用，制备方法参照ChP2015执行。 5.7废弃菌种的销毁 5.7.1下列情况的菌种、培养物或者被污染的器具等，必须经过121C, 30min髙压湿热火菌处理： 5. 7. 1.1新一代菌种制备成功后的上一代菌种：

14、 5.7. 1.2使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物： 5.7. 1.3超过有效期的菌种： 5.7. 1.4凡是被污染、变异、可疑等异常情况菌种： 5. 7. 1. 5其他应废弃的菌种。 5.7.2被污染的器具在污染后，湿热火菌前应放苣在密闭容器中防止对外界再污染。 5.7.3废弃菌种的销毁须有两个人以上同时在场进行，并及时填写废弃菌种、物品销毁记录。 5.8安全要求 5.8.1菌种、菌液的保藏需要保藏于加锁的冷藏柜或者冰箱中； 5.8.2操作人员在操作前应该按照规泄着装，佩戴防护设施： 5.8.3操作结朿后，应及时对工作区域、工作服及苴他仪器等进行适当消毒： 5. 8. 4非微生物室

15、操作人员未经质量部经理批准不得进入微生物室： 6. 记录 菌种验收、入库记录(QB-QR/10-008-00) 菌种传代记录(QB-QR./10-009-00) 菌种确认记录(QB-QR/10-010-00) 菌种日常检査记录(QB-QR/10-011-00) 菌种使用记录(QB-QR/10-012-00) 废弃菌种、物品销毁记录(QB-QR/10-013-00) 医疗技术 日期 入库数量 入库代次 入库状态 菌种来源 验收情况 接收人 菌种名称: 储存条件: 记录编号:QB-QR/10-008-00 菌种代码: 医疗技术 菌种传代记录 记录编号：QB-QR/10-009-00 菌种名称 菌种代码 传代前菌种代次 传代前菌种状态 传代日期 传代数量 预期用途 数量（支） 代次 菌种编号 传代用培养基 工作用菌种 传代用菌种 操作过程描述： 操作人： 备注： 医疗技术 菌种确认记录 记录编号：QB-QRZ10-010-00 菌种代码： 确认日期确认用培养基 确认原因 操作过程描述: 确认结论: 操作人/日期: 医疗技术 菌种日常检查记录 记录编号：QB-QR/10-011-00 日期 时间 温度CC) 塞子是否 松动 是否