维生素c的定量测定

1、华南师范大学实验报告学生姓名叶洁丽学 号 20070004006专 业年级、班级2007级课程名称生物化学实验项目 维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）实验类型验证 设计 综合 实验时间 2008年11月_3_日实验指导老师陈文利徐杰实验评分、目的1 学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。2 掌握微量滴定法的基本操作技术。二、原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗 坏血酸（ascorbic acid ）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体 对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。维生素C是具有L系糖构型的不饱和多

2、羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植 物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。维生素C （抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料2, 6 一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。HOC0HO CH CHO cClOHCl/CHQH2, 6二氯酚靛酚（红色）还原型抗坏血酸0OH还原型2 , 6二氯 酚靛酚（无色）ClCH QH氧化型脱氢抗坏血酸ON+Hc c c c c o o H-ioClN（蓝色）氧化型2, 6 一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时

3、，在抗坏血酸未全部氧化前， 则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶淀中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化完全，从滴定时2，6 一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。三、材料、试剂与器具）材料花椰菜）试剂1、标准抗坏血酸溶液2、2%草酸溶液3、1%草酸溶液4、0.01% 2,6 二氯酚靛溶液）器具1、锥形瓶若干2、移液管右十3、容量瓶一个（100毫升）4、微量滴定管（3毫升）5、漏斗一个6、研钵四、实验内容（一）提取称取1.8克花椰菜，剪碎加 2%的草酸几毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，

4、用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。（二）滴定1、标定2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准维生素 C溶液1ml,加9ml 1%草酸加入50ml锥形瓶中，同时量取10ml草酸加入 另一个50ml锥形瓶中作空白对照，用已标定的 2, 6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现， 15秒 不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升2,6 二氯酚靛酚所能氧给维生素 C的毫克数（K）。锥形瓶号1 （标准）2 （空白对照）标准维生素C溶液（ml）11%草酸（ml）910操作用已标定的2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色记录（所用的毫升数 ml）3.150.37计算：K=0.1mg/( V

5、 标一V 空)=0.1mg/(3.15 0.37)ml=0.03597mg/ml2、样品的测定：取50ml锥形瓶2个，分别加入滤液10ml，用已标定的2，6 一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持 15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值V。锥形瓶号1 （滤液）2 （滤液）3 （空白）滤液（ml）10101%草酸（ml）10操作用已标定的2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色记录（所用的毫升数 ml）1.451.440.32平均值（ml）1.445(VJ0.32分析：两次滴定的结果分别为4.45ml和4.44ml

6、，比较接近，只相差了0.01，说明滴定结果还是比较准确的，这就要求每一步操作都要很正确且准确。此次空白滴定和前面在标定2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时的空白滴定分别为0.37ml和0.32ml，相差了 0.05ml，误差相对比较大。根据分析可能是1.滴定终点时溶液变红程度所选取的标准不够一致，有 少许不同；2.滴定过程中溶液溅到了锥形瓶壁而没有弄回溶液中；影响了实验结果。（三）结果计算根据实验数据计算出每 ioog样品的维生素C含量：维生素 C （mg/100g样品）=M 亠2丫求K 小 刈。式中：Vi为滴定样品液所用去染料体积（ml）;V2为滴定空白所用去染料体积（ml）;V3为样品测定时所

7、用滤液体积（10ml）;为样品提取液的总体积；K为1毫升染料能氧化维生素C的量（mg）;W为称取样品重量（g ）。（V _v ）x K 疋 V计算：维生素 C （ mg/100g 样品）二 X100= （4.445 0.32） X 0.03597WxV3X 100 X 100/1.8 X 10=82.43mg/100g根据查得值 85T00 mg/100g（数据来源 http:/specialty_info.asp?id=10 ） 此结果是比较接近的，但还是偏少了。通过分析，偏少的原因可能是1. 在标定2, 6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时，滴定标准维生素C溶液过程中，变红

8、程度较深时才停止滴定，所用 2, 6 一二氯酚靛酚溶液增多，导致最终算出的K值偏小；2. 在标定2, 6 一二氯酚靛酚溶液的浓度时，滴定标准维生素 C溶液过程中，有少许2,6 一二氯酚靛酚溶液滴到锥形瓶壁了，所用2, 6 一二氯酚靛酚溶液增多，导致最终算出的K值偏小；所以这两个原因共同导致了最终的实验结果比查得值偏小。不过同时也还有可能是数 据本身，因为我查的的数据是温州花椰菜的维生素含量，而实验室的花椰菜不一定是 产自温州，地域、季节都会影响到其中维生素的含量。五、注意事项1. 滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能特将2,6 二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较

9、维生素C弱。2滴定所用染料要在 14ml之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。3抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe2+能还原二氯酚靛酚，如用醋酸（8%即可）则Fe2+不会很快与染料起作用。4样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。5在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素 C的生理作用，但不能将 2, 6一二氯酚靛酚还原脱色。6本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。7样品中可能有其它

10、杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色， 于15s内不消退为终点。【1】六、实验讨论思考题：（一）、为了测得准确的维生素 C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？答：1.量取液体时一定要精确，注意读数时视线一定要与液体凹液面最低处相持平；2. 滴定时一定要控制好滴定速度，不要一下子滴下太多2，6一二氯酚靛酚溶液，导致滴定过量，若发生此种情况要重新做一次，不能取巧；3滴定过程要注意观察锥形瓶中溶液的颜色，准确判断滴定终点，即以微红色能保持15秒不退色为止，而且每次滴定终点的微红色都要采取同样的标准，

11、即变红程度要一样。（二）、试简述维生素C的生理意义。答：1、合成Collagen （胶原蛋白）-以形成软骨、骨质、牙釉质及血管上皮重要基质。2、促进脯胺酸转变为氢脯胺酸之反应，而氢脯胺酸为构成胶原重要成分之一，因此维 生素C可促进胶原之生成。3、维持结缔组织之正常-因为胶原是构成结缔组织之细胞间质。4、参加体内氧化还原反应-维生素C可参加酪胺酸及某些物质的氧化反应。5、制造肾上腺类固醇激素。6、增进伤口愈合及增加对受伤及感染等压力的感受力。7、 在受感染、发热时，此维生素之损失亦随之增加，故其对刺激之反应扮演重要角色。8、解毒作用；9、改善心肌功能，减低毛细血管脆性，增加机体抵抗力；10、 对抗游离基，有助于防癌，降低胆固醇，防止坏血病。【2】现在我们做生物化学实验的时候，主要都是两人一组搭配合作，当中就涉及到怎样分 工、怎样合作，所以两人要默契配合，这样有利于实验顺利进行，也可以提高效率。此次实 验我们就是采取分工合作的，就像在做滴定操作的时候，就要一人控制活塞，另一人振荡锥形瓶观察颜色的变化，所以好的分工合