Qubit40使用与维护SOP(20210511115003)

1、Qubit? 4.0荧光计的使用与维护标准操作规程1. 目的检测核酸建库效果，作为核酸建库的质量控制措施。2. 适用范围适用于检测核酸和蛋白的含量。3. 职能用于建库及DNB制备相关的实验员检测核酸或蛋白质。4. 内容4. 1仪器型号ThermoFish Qubit? 4 0 Fluorometer4. 2检测原理：Qubit? 4荧光仪定量检测核酸，其原理是基于特定荧光染料与所检测的核 酸靶分子结合。这些荧光染料只有与这些靶分子结合时才会发射荧光信号, 即使在浓度很低时oQubit? 4. 0荧光定量仪比传统的紫外吸光法更加准确。 紫外吸光法不具有选择性，测量260nm所有分子的吸光值，包含

2、DNA、RNA、 蛋白质、游离核昔酸或多余的盐离子。此外，紫外分光光度计的灵敏度不 足，无法完成低浓度DNA和RNA的精确定量。使用Qubit? 4荧光定量仪， 将大大提升准确性。因为Qubit? 4分析试剂盒里的荧光染料只与样品中 的特异分子结合一一DNA、RNA或蛋白，避免不准确测量带来的重复工作。4. 3检测操作:4.3. 1使用要求：(1 )请勿在阳光直射下操作仪器。(2) 处理样品时戴无粉手套。(3 )仅在室温(22-28 C)下使用仪器。(4 )在室温下保存所有的试剂盒，仅在Qubit? 4荧光计测定荧光时才插 入分析管。(5) 在测量之前请勿用手握住分析管。(6) 测量前仪器已经

3、用适当的校准品校准过。(7 )将样品或标准品与工作液混合之后，让Qubit?DNA和RNA分析管孵 育 2min。(8將样品或标准品与工作液混合之后，让Qubit?蛋白分析管孵育15mino(9)如果要多次读取同一支管，请从仪器中取出分析管，让其平衡至室 温30s,再进行下一次读取。(10 )不建议多次读取RNA样本。4.3.2配置工作液：(1) 在主界面上选择试剂计算器计算出配置Qubit?工作液所需的染料和 缓冲液的量。(2) 输入将在Qubit? 4荧光仪上运行的样本数和标准品数量。可选: 如果您想在计算的总容量中包含一个额外的管，请按下“超额”复选框。(3) 按Enter计算配置Qub

4、it?工作液所需的Qubit?染料和缓冲液的量。 注意：在此屏幕上可以更改计划检测的管数或超额选择。（4）按Done返回主界面运行Qubit?检测。4.3.3标准品校准：（1）从试剂盒里取出标准品standardly,在主界面选择要读取新标准的 检测类型。要进入可用于检测的第二页，请将屏幕向右滑动。要返回第一 页，将屏幕向左滑动。（2）选择所需的检测方法（3）点选试验，如果第一次选择会直接提示进行校准，如以前进行过校 准，则会提示使用以前的或新进行校准。若要将先前的校正应用于样本读 数，请按下“运行样本”。这里选择进行校准。（4）出现下面界面，将试剂盒中用于校准的标准品1#放入样品室，点击“R

5、ead standard,大约3秒，读取完成进入到下一步，放入标准品2#,点击Read standardn （蛋白质校准还需放入标准品3#）。Reagent Calculator- （5）在读取标准品2#后（或读取标准品3#后），校准就完成了。如果校准成功，软件显示读取标准的屏幕，显示荧光与浓度图。（6）荧光与浓度图：标准数据点被一条线连接。（圆圈表示正确的标准） 如果校准失败，会显示“校准错误”，需重新进行校准。J xi（7）如果用于RNA IQ检测：检测成功，软件将显示准备好样本信息。如 果校准失败,会显示“校准错误”。（8）如果收到“校准错误”消息，需要重新运行校准。在弹出错误的屏幕中，

6、按“0K”。查看Read标准屏幕。如果希望重新运行标准或运行新的 标准，按Read标准，然后重复校准过程。（9）检测RNAIQ,可以根据校准错误重新运行特定的校准。错误消息提 供了如何纠正校准错误的指导。4. 3. 4样品检测（1）将品与反应液混合（混合方案具体见试剂盒）孵化一段时间（DNA 和RNA为2min,蛋白质需要15min）o（2）在 Read standard （用于 Qubit?定量分析）或 Ready for samples 界面，按 Run sampleso（3）在样本量屏幕中，选择用于Qubit?定量分析或Qubit? RNA IQ检 测的样本体积和单位。在方向盘上按+或-

7、按钮选择检测管中样本体积（l-20ul）,从下拉菜单中选择输出样本浓度的单位。在RNA IQ检测中,没有相关的单位，只选样本检测体积。（4）将样品管插入到样品室，关上盖子，然后点击读取管。定量分析大 约需要3秒，质量分析需要5秒。Crr（5）在屏幕上就会显示所检测的浓度。（6）多个样品检测：a. 相同体积和浓度单位：只需更换样本室中样本管，点击读取。b. 不同体积和浓度单位，更改体积和浓度单位重复上述步骤。4.3.5数据读取：（1）如果结果在检测范围内，则显示浓度值。顶部的数值（大体字）是原始浓度。底部的数值为稀释后浓度（插入Qubit? 4荧光计的样品管中样品浓度）。检测浓度存在一定范围，如

8、超出检测范围会显示“超出范围”。c tx m Urw坯U3心（2）可以点击屏幕上左右箭头进入体积和浓度设置界面和荧光与浓 度图a. 空心圆表示进行校准的标准品b. 大的灰色圆圈代表最新样品c. 蓝色圆圈代表在检测范围内d. 黄色圆圈代表在拓展范围内e. 红色圆圈代表在仪器检测范围外单个样本多个样本超出检测高限超出检测低限（3）数据管理对保存的数据，可以进行以下操作：a.针对每个样本查看详细的数据:从浓度检测界面、荧光与浓度图界面、主屏幕点击“Data,出现数据屏幕，点击想查看的数据集。b.重命名数据文件:如需更改数据显示名称，在详细数据界面点击数据名, 在弹出的界面输入想要更改的即可。C.可以

9、保存数据，导出到USB存储器或电脑中：将USB存储器插入Qubit?4 USB接口上，如果想导出的是数据集，则勾选该数据集；如需导出的是 单个的数据，则点击数据集进入再勾选需要导出的数据；点击导出数据， 数据就会以CSV格式保存到USB存储器。若将数据直接导入到计算机，则 使用USB电缆将Qubit?仪器连接到计算机，计算机作为外部设备访问 Qubit?荧光剂，使用操作系统的普通文件浏览菜单访问保存在Qubit?仪器 上的文件，把需要的文件复制到计算机上。d.删除数据文件：在浓度、图形、RNA IQ结果或主屏幕上，点击数据。 在导出数据屏幕上，选中要删除数据左侧的选择框。按下删除出现一个警 告窗口，按Delete可永久删除选中的数据或数据集。按“取消”可返回 到先前的页面，而不删除任何数据。4. 4仪器维护4. 4.1 Qubit? 4荧光计不需要定期维护，不要进行任何维修或服务以免损 坏仪器。为解决仪器故障，请联系技术支持。4. 4.2不要将Qubit? 4荧光计暴露在阳光直射下。4.4.3定期清洗：干净的Qubit? 4荧光计用湿布擦拭表面。清洁触摸屏， 断开电源线，用沾有LCD （液晶显示）清洁剂的软布轻轻擦拭来清洁触摸 屏。注：用力过大会损坏触摸屏；立即把屏幕擦干；不要使用研磨性清洁 剂或材料避免划伤触摸屏。4.4.4消毒仪器：断开荧光计的电源电缆，包括触摸屏，用软布轻