保健功效及检测方法

1、一、多糖的检测方法（1）粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法（2）葡聚糖的分光光度测定法（3）硫酸软骨素的分光光度测定法二、皂苷类化合物的检测方法（1）总皂苷的分光光度测定法（2）绞股蓝皂苷的分光度测定法三、黄酮及苷类化合物的检测方法（1）总黄酮的风光光度测定法（2）原花青素的分光光度测定法（3）原花青素的铁盐催化比色测定法四、酶、激素及源性物质的检测方法（1）超氧化物歧化酶的氮蓝四唑测定法（2）超氧化物歧化酶的连苯三酚自氧化测定法（3）氯化高铁血红素的分光光度测定法五、其他类化合物的检测方法（1）总蒽醌的分光光度测定法（2）几丁胺糖的脱乙酰度滴定法（3）总三萜的分光光度测定法六、第一章 概论(第

2、 3 页)表 1-1 常见的保健食品的功效成分（标志性成分）、保健功能及主要来源功效成分（标志性成分）保健功能主要来源黄酮类银杏黄酮、山楂黄酮辅助降血脂、提高缺氧耐受银杏叶、山楂、蜂胶、根、沙力、抗氧化、增强免疫力、保 棘、红花、荷叶、甘草、桑叶、护心血管系统、保护脑神经系 皮、花粉、桑葚、黄芪、淫羊藿、统鱼腥草多糖类灵芝多糖、香菇多糖缓解体力疲劳、增强免疫灵芝、香菇、枸杞、银耳、灰力、辅助降血糖、辅助降血脂 树花、人参、西洋参、昆布、木耳、山药、黄芪、茯苓、猪苓、黄精、苦瓜皂苷类红景天苷、人参皂苷缓解体力疲劳、增强免疫 人参、西洋参、红景天、绞股力、抗氧化、抗辐射、提高缺 蓝、三七、山药、黄

3、芪、酸枣仁、氧耐受力、辅助降血糖、保护 桔梗、远志、知母、甘草、大豆、心血管系统蒺藜、太子参蒽醌类通便、美容、减肥、增强免芦荟、大黄、决明子、何首乌疫力花青素抗氧化、增强免疫力、抗辐射、 葡萄子、葡萄皮、越橘、黑加保护心血管系统仑、玫瑰茄、甘蓝、桑葚、紫甘薯、茶叶三萜类灵芝三萜、角鲨烯抗氧化、增强免疫力、抗辐射、缓解体力疲劳、辅助降血灵芝、赤芝、紫芝（孢子粉）、甘草、黄芪、人参、泽泻、积雪脂、辅助保护化学性肝损伤、 草、山楂、女贞子、苦丁茶、五改善睡眠、改善记忆味子、深海鱼油（金枪鱼、沙丁鱼、鲨鱼、鲑鱼）壳聚糖（几丁聚糖）增强免疫力、辅助降血脂、虾、蟹壳的提取物辅助降血糖、辅助保护骨粘膜硫酸软

4、骨素辅助降血脂、增强免疫力、动物的软骨保护骨关节、参与制造骨骼（第 73 页）第三章保健食品中功效成分的检测方法第一节多糖的检测方法一、粗多糖的苯酚硫酸分光光度测定法1、方法提要多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶液中的糖的浓度成正比，在485nm 波长下比色定量。4、测定步骤（1） 样品提取：称取混合均匀的固体样品1.02.0g，置于 100mL 容量瓶中，加水 80mL 左右，与沸水浴中加热 1 小时（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热 15min），冷却至室温后补加水至刻度线（V1）,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉

5、淀粗多糖。在这里必须强调的是不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处理，否则结果偏高。添加淀粉的样品需加 -淀粉酶及糖化酶（如葡萄糖苷酶）处理。添加糊精的样品需加糖化酶（如葡萄糖苷酶）处理。处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分离的目的。1） 添加淀粉或淀粉+糊精的样品：可取50mL 样品提取液置于 100mL 具塞锥形瓶中， 冷却至 60以下，加 1mL10%淀粉酶液（Singma 公司的液状淀粉酶可直接加0.10.2mL）和 0.5mL0.2M 磷酸盐缓冲液，加塞，至 5560酶解 1 小时，再加适量的糖化酶（如葡萄糖苷酶）（

6、约为样液体积的 1%）于 60以下再水解 60min 后取出（用电业检验是否水解完全，如不完全可延长水解时间至酶解液加碘液不变蓝色为止），于电炉上小心加热至沸（灭酶），冷却，定容，过滤，取滤液沉淀粗多糖。2） 添加糊精的样品：如上法处理（免加淀粉酶）（2） 沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）5.0mL（V2），置于 50mL 离心管中（或 2.0mL 于 15mL 具塞离心管中），加入无水乙醇 20mL（或 8mL）,混匀，于4冰箱静置 4 小时以上，以 4000r/min 离心 5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3 次。残渣用水溶

7、解并定容至1025mL（V3）(根据浓度而定)。（3） 标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mLL、0.60 mL、0.80mL、1.00mL（相当于葡萄糖 0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、 0.08mg、0.10mg）置于 25mL 比色管中，补加水至 2.0mL,加入 5%苯酚溶液 1.0mL, 在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸 10mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中 2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm 波长处以试剂空白为参比，1cm 比色皿测定吸光度值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐

8、标，绘制标准曲线。（4） 样品测定：准确吸取上液适量（V4）（含糖 0.020.08mg）置于 25mL 比色管中，补加水至 2.0mL,然后按（3）法测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗多糖含量。6、注释（1）本方法线性围在 0.010.1mg/mL，线性方程为y=0.3095x+0.0004，r=0.9989,若工作需要标准曲线可延长至 0.20mg/mL。（2）本法测定样品中多糖时，提取时间以1 小时为宜，以免因提取时间过长引起糖结构变化甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低。（3）比色法测定多糖并非特异性反应，本法灵敏度高，出现测定结果平行性偏差较大，主要是操作不够严谨

9、所致，反复几次的沉淀、洗涤、弃去上清液、样液的转移等都是造成测定结果偏差的原因。实际操作时每个样品要多做几个平行样，并尽量取用几个近似值的均值报告结果。由不同材料组成的保健品所形成乙醇沉淀物的结构也不同，用 80%的乙醇洗涤沉淀物时（如在15mL 离心管中操作）可先加少量（0.5mL）在旋涡混合器或超声波振荡器中以增大撞击及分散沉淀物的强度，尽量将沉淀物打散，然后再加数毫升 80%乙醇洗涤，对于一些粘黏包裹状的沉淀物，也可先加少量水溶解，然后再加 80%的浓度洗涤，力求将附在沉淀物的杂质除去。（4）关于乙醇的浓度：由于保健食品组方的复杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效果是不同的，通常使

10、用 80%乙醇浓度不一定完全使用于所有的保健品中粗多糖测定， 最好能在 75%、80%、85%、90%、95%的乙醇浓度之间做预实验以优选最佳的乙醇浓度。（5）关于酶解 1）淀粉酶的水解具有专一性，她只水解淀粉而不会水解其他多糖，在淀粉酶的作用下，使淀粉水解成低分子糊精和麦芽糖，再在糖化酶（如葡萄糖苷酶）的作用下变成葡萄糖。酶的用量应根据酶的活力而定。2）糖化酶是几种酶的简称（学名-1,4-葡萄糖水解酶），包括葡萄糖苷酶、淀粉葡萄糖苷酶（简称为葡萄糖苷酶）、普鲁兰酶。药用辅料的淀粉一般都是直链淀粉，用 -淀粉酶+葡萄糖苷酶（作用于直链淀粉，1,4 糖苷键）处理就可，如要作用于支链淀粉，需同时加

11、入普鲁兰酶（作用于 1,6-糖苷键）才能完全变为葡萄糖。3）酶的活性对酶解的效果影响较大（6）多糖还原糖换算系数 0.9 之解释（7）粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖计或葡聚糖计，因两者测定值相差很大。（第 82 页）四、 葡聚糖的分光光度测定法本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构、相对分子质量 1*104 以上的水溶性粗多糖的测定。本方法的最低检出浓度为 5.0mg/L。1、方法提要食品中相对分子质量大于 1*104 的高分子物质在 80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚硫酸反应以碳水化合物形式比色

12、测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。4、测定步骤（1）样品处理1）样品提取：称取混合均匀的固体样品 2.0g，置于 100mL 容量瓶中，加水 80mL 左右， 与沸水浴中加热 2 小时，冷却至室温后补加水至刻度线,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。2）沉淀粗多糖：准确吸取 1）项终滤液 5.0mL 或液体样品 5.0mL，置于 50mL 离心管中， 加入无水乙醇 20mL,混匀 5min 后，以 3000r/min 离心 5min，弃去上清液，残渣用 80%（体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作 34 次。残渣用水

13、溶解并定容至 5.0mL，混匀后供沉淀葡聚糖。3）沉淀葡聚糖：准确吸取 2）项终溶液 2mL，置于 20mL 离心管中，加入 100g/L 氢氧化钠溶液 2.0mL、铜试剂溶液 2.0mL，沸水浴中煮沸 2min，冷却，以 3000r/min 离心 5min， 弃去上清。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作 3 次，残渣用 10%（体积分数）硫酸溶液 2.0mL 溶解并移至 50mL 容量瓶中，加水稀释至刻度线，混匀。（2） 标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使用液0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mLL、0.60 mL、0.80mL、1.00mL（相当于葡聚糖 0mg

14、、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、 0.08mg、0.10mg）置于 25mL 比色管中，准确补加水至 2.0mL,加入 50g/L 苯酚溶液 1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸 10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀， 至沸水浴中 2min，冷却至室温，用分光光度计在 485nm 波长处以试剂空白为参比， 1cm 比色皿测定吸光度值。以葡聚糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。（3） 样品测定：准确吸取样品测定液 2.0mL，置于 25mL 比色管中，加入 50g/L 苯酚溶液 1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸 10.0mL,在旋涡混

15、合器上小心混匀， 至沸水浴中 2min，冷却至室温，用分光光度计在 485nm 波长处以试剂空白为参比， 1cm 比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含量，计算样品中粗多糖含量。同时做样品空白试验。6、准确度与精密度在不同食品中进行不同浓度的加标回收试验，回收率为 87.8%110.87%，不同实验室对同一样品进行 10 此测定结果的相对标准偏差为5.8%。7、注释本方法测定的水溶性多糖含有 10 个以上单糖残基。经过五个检测单位的验证，本方法所测定的结果一葡聚糖计。（3） 干扰因素试验证明，在样品中加入与粗多糖灯亮的乳糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖及 2 倍量得淀粉、糊精，不影响样品中

16、粗多糖的测定结果。但在测定过程中应避免糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚硫酸与糖和碳水化合物起反应。（6） 某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进行测定，但样品预处理时将乙醇改为丙酮即可。（7） 液体样品中粗多糖含量低时，可取样50.0mL 加热浓缩至 5.0mL 后，再依法操作测定。（8） 洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物用80%乙醇洗净，否则结果偏高。8、关于保健食品粗多糖测定方法分光光度法的说明多糖因单体组成、结构、聚合度、物化性质等各异，故测定方法不同，此法适用于测定高分子量的糖类物质（10000Da多糖的定义是聚合度大于 9 的糖（第 110

17、 页）十一、硫酸软骨素的分光光度测定法本方法硫酸软骨素的检出限为 0,01mg/L。1、方法提要结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带正电荷，易与带酸性基团的生物大分子发生静电作用而形成离子配合物，已用于脱氧核糖核酸、干扰素等的分光光度法分析。结晶紫结构中的氨基带正电荷，硫酸软骨素的磺酸基和羧基带负电荷，两者通过静电引力和输水作用力形成络合物，产生变色效应，吸光度降低。吸光度的降低量与硫酸软骨素含量线性相关。4、测定步骤（1）样品处理：精密称取容物 25mg，置于 100mL 量瓶中，加水适量，超声处理 10min， 加水定容至 100mL,过滤，取续滤液 4mL,置于 100mL 量瓶中，加

18、水至刻度，得样品溶液。（2）分光光度法测定：取供试品溶液1mL，置于10mL 具塞刻度试管中，加入pH5.0 的醋酸醋酸钠缓冲液 1.0mL 和结晶紫并粗三溶液 0.6mL，加水至 10.0mL，摇匀，30水浴保温 20min,放至室温。以水为参比，于 588nm 波长下测定吸光度。6 注释硫酸软骨素是提取于动物软骨的黏多糖类物质，在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要作用。硫酸软骨素除了作为药用品外，大量的是作为改善关节病的补充品，作为健康食品应用，在美国已经风行多年，经过多年的应用，已经证明硫酸软骨素对改善老年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果。（第 113 页）第二节 皂苷类化合物

19、的测定方法一、总皂苷的分光光度测定法1、方法提要样品中总皂苷经提取、PT大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re 为对照品，于 560nm 处比色测定。4、测定步骤（1）样品处理1）固体样品：称取 1.0g 左右样品置于 100mL 烧杯中，加入2040mL85%乙醇，超声波振荡 30min，再定容至 50mL,摇匀，放置，吸取上清液 1.0mL,挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。2)液体样品：含乙醇的酒类样品：准确吸取 1.0mL 样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析。非乙醇类液体样品：准确吸取 1.0mL 样品（如浓度高或颜色深，

20、需稀释一定体积后再取 1.0mL）,直接进行柱分离。（2）柱层析：以 PT大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL 上柱，用15mL 水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。（3）显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿， 使残渣溶解，再加入 0.8mL 高氯酸，混匀后移入 10mL 比色管中，塞紧盖子，于60以下水浴加温 15min 取出，冷却后准确加入冰乙酸 5.0mL，摇匀后以 1.0cm 比色皿与 560nm 处与人参皂苷Re 标准管

21、同时比色。（4）标准曲线绘制：人参总皂苷浓度在 40200g/mL 之间与吸光度值呈线性关系，相关系数（r）0.999. 6、注释回收率：90%105%。（第 122 页）第三节 黄酮类及苷类化合物的检测方法一、总黄酮的分光光度测定法本方法总黄酮检出限为 3.5g/mL。1、方法提要黄酮类化合物是具有苯骈吡喃环结构的一类天然化合物的总称，一般都具有4 位羰基， 且呈黄色。黄酮类化合物多分布于植物中，大多数以苷的形式存在。黄酮类化合物中的 3- 羟基、4-羟基或 5-羟基或邻二位酚羟基与铝盐进行络合反应，在碱性条件下生成红色的络合物。4、测定步骤（1）样品处理1）固体样品：称取 12g 干燥的固

22、体样品，用滤纸包紧，置于平底烧瓶中加入 50100mL70%乙醇溶液，浸润后，在80水浴下回流 2h，至黄酮类化合物基本提取完全。粗提取液冷却后，减压抽滤，并用少量70%乙醇溶液洗涤残渣，合并滤液。在50下减压蒸馏，除去其中的乙醇，直至烧瓶溶液呈无醇味。倒数烧瓶溶液，并用 30mL 热水分 3 次洗涤烧瓶，抽滤后，将滤液导入分液漏斗中，以 75mL 氯仿分 3 次萃取脱脂，待完全分层后，收集下层水溶液并定容至 50mL。称取 12g 经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法装柱，用水饱和。吸取上述脱脂后的水溶液12mL，沿层析柱慢慢滴入柱，放置一定时间，待测液被充分吸附后，用 70%乙醇或甲醇洗脱，流速

23、为 1.0mL/min,至流出液基本无色，一般收集 10mL 即可。上述洗出液用洗脱剂（70%乙醇或甲醇）定容后即可用于测定。2）液体样品：准确吸取样品 3.0mL，定容至 50mL 后，直接以 75mL 氯仿分 3 次萃取脱脂， 其余步骤同上。（2）标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液 0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL（相当于芦丁 0g、75g、150g、300g、450g、600g），分别移入 10mL 刻度比色管中，加入30%乙醇液至 5mL,各加 5%亚硝酸钠溶液 0.3mL，振摇后放置5min，加入 10%硝酸铝溶液 0.3mL,摇匀后放置

24、 60min，加 1.0mol/L 氢氧化钠溶液 2mL,用 30%乙醇定容至刻度，以零管为空白，摇匀后用1cm 的比色皿，在510nm 处测定吸光度，绘制芦丁含量（g）与吸光度的标准曲线。（3）样品测定：根据样品中总黄酮含量高低，取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤与 510nm 处进行吸光度的测定（样品如有沉淀，应过滤后测定）。芦丁浓度在 0.00750.060mg/mL 围呈直线关系。6、注释（1）方法精密度：对同一样品在相同条件下，重复测定6 次，其相对标准差为 4.4%。（2）方法回收率：对总黄酮含量为1.52%的减肥茶加入相似浓度的芦丁标准品进行回收试验，其平均回收率为 103

25、.2%。（3）对于以葡萄、山楂等有色水果味原料的样品，可用未加铝盐试剂的样液为空白或采用标准加入法进行测定，以避免样液颜色对测定干扰而引起结果偏高。（第 131 页）六、原花青素的分光光度测定法本法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子与松树皮提取物）中原花青素含量的测定。1、方法提要原花青素（也称缩合单宁）是黄烷3醇的寡聚体与多聚体，属多份类化合物。与其 他酚类化合物不同，黄烷醇（缩合单宁、单体、双体等）在酸性介质中可与香草醛反应，生成在 500nm 处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。如无提纯的原花青素，可用儿茶素代替4、测定步骤（1）样品中原花青素液的制备：植物材料经4 倍体

26、积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60% 甲醇提取，40以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后沉淀。冰冻干燥的固体原青花素制剂，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶），制成原青花素液。原青花素液与 5下暗环境中保存备用。（2）样品测定：用锡箔将试管（ 14mm*120mm）包裹严，仅留试管口用于加样。向管加入试样 0.5mL，再加 3.0mL4%香草醛甲醇液混合，然后加入1,5mL 浓盐酸，彻底混匀，室温下显色 15min，也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm 处比色。（0.1mg 原花青素在 500nm 处的吸收值为 0,55）6、注释（1）本方法的检测围为（5500）*10-3mg

27、/0.5mL 样液。精密度与准确度大于1*10-3mg。（2）反应试管应用清洁剂浸泡 24 小时，彻底洗涤干净。（3）进行比色时，用水作空白对照。（4）500nm 处的OD 值应控制在 3 以下。（5）试样中花青素含量较高时，应从香草醛存在下所测 A500nm 值中减去无香草醛时所测值。（6）显色液应避光放置。（第 133 页）七、花青素的铁盐催化比色测定法1、方法提要原花青素氧化后能生成红色的花青素。通常用铁盐催化比色法测定总量，利用硫酸高铁铵的催化作用，以盐（OD550）,与原花青素化学对照品比较，便可定量计算出样品中原花青素的含量。4、测定步骤（1）标准曲线的绘制:分别移取上述不同浓度系

28、列使用液1.00mL 置于 10mL 刻度试管中， 加入 9mL 上述反应混合液，置于沸水与中加热，待水浴温度恢复至（99+1）时开始计时， 并塞紧塞子（勿摇匀），准确加热 40min 后，立即取出，用冰水快速冷却至室温，以正丁醇定容至刻度线，塞紧后充分摇匀，在 550nm 处以空白管调零扣除背景，测定吸光度值 OD550， 并以最小二乘法绘制原青花素浓度（g）吸光值 OD550 曲线。（2）待测样品液的制备：准确称取胶囊容物 0.51.0g，加污水乙醇（遇醇溶性较差的样品，可加入少量的蒸馏水促进溶解），溶解（对于软胶囊取整粒称重后再用小刀割破，用超声波以乙醇多次提取）,定容至 100mL,摇

29、匀，即得到样品储备液。再移取 0.51mL 储备液（根据提取物浓度高低确定具体的量，使待测液原花青素浓度在 0.050.20mg/mL 围）定容至50mL,摇匀得到待测样品液。（3）样品测定：移取 1.00mL 待测液依照上述标准曲线绘制同样操作，测定OD550，查标准曲线，并计算原花青素的含量。6 注释（1） 线性围：本法原花青素浓度在 26.00416.0g 围，最低检出限为 4g。（2） 准确性：添加浓度为52.00208.0g 的标准（OD550 在 0.1570.520 围），3 次测定平均回收率在 90.64%109.5%。（3） 精密度（重现性）：同一样品液 8 次测定，相对标准

30、差为 2.13%2.98%。（4） 干扰物质：常见的维生素，芦丁、类胡萝卜素、食品抗氧化剂、各类油脂基体未见明显干扰，由于多糖、蛋白质不溶于无水乙醇，故不会干扰测定。（第 151 页）第四节 酶、激素及源性物质的检测方法七、氯化高铁血红素的分光光度测定法本方法氯化高铁血红素的最低检出浓度为0.15g/mL。1、方法提要氯化高铁血红素是以新鲜猪血经冰醋酸法提取加工而成的动物性补铁剂，能被人体黏膜上皮细胞分解为原卟啉及二价铁，从而进入血液被机体吸收和利用。氯化高铁血红素制品以氢氧化钠溶液溶解和定容后，以 1cm 比色皿于波长 385nm 处进行检测，与标准品比较进行定量。4、测定步骤（1）样品处理

31、1）固体样品（胶囊或片剂）：准确称取一定量样品，一边研磨，一边加入 0.1mol/L 氢氧化钠，使氯化高铁血红素充分溶解（注意不能加热溶解，否则引起结果偏高），定容后备检测。 2）液体样品：摇匀后准确吸取一定量样品，用0.1mol/L 氢氧化钠稀释后待测定。（2）标准曲线绘制：准确称取经105干燥至恒重的氯化高铁血红素标准品10.00mg，用0.1mol/L 氢氧化钠充分溶解并定容至 100mL,容量瓶中。吸取此储备液10mL，加于100mL 容量瓶中，加入0.1mol/L 氢氧化钠定容至刻度，摇匀，配成10g/mL 的标准使用液。分别准确吸取标准使用液 0mL、1.0mL、2.0mL、4.0

32、mL、6.0mL、8.0mL 至 10mL 比色刻度试管中，加0.1mol/L 氢氧化钠至刻度，以零管作空白调零，于385nm 处测定吸光度，并绘制氯化高铁血红素含量吸光度标准曲线。氯化高铁血红素浓度在 1.27.0g/mL 围吸光度与浓度呈直线关系（3）样品测定：取上述样品处理液依照标准曲线操作步骤测定 385nm 处的吸光度值，依据标准曲线查得氯化高铁血红素含量。（第 201 页）第九节、其他化合物的检测方法四、总蒽醌的分光光度测定法 1、方法提要蒽醌类化合物经酸水解用氯仿提取后，再用稀碱液萃取，与 1,8 二羟基蒽醌对照品比较，在分光光度计 530nm 处比色定量。4、测定步骤（1）样品

33、处理：准确称取均匀的样品粉末 0.52g 或适量，液体样品可取 10mL 左右（视含量而定），置于 200mL 带冷凝管的锥形瓶中，加 5mol/L 硫酸 40mL，加热回流水解 2 小时，稍冷后加氯仿 30mL，水浴加热回流 1 小时，分离出氯仿液，再加氯仿30mL，加热回流水解 30min，分离出氯仿液，再加氯仿20mL，如此反复，提取至氯仿无色位置，收集氯仿提取液过滤，将滤液移至容量瓶中，用氯仿定容至刻度（V1）,摇匀，精密吸取一定量（10mL左右）（V2）置分液漏斗中，用混合碱液（每次5mL）萃取至无色，将萃取液移至50mL 量瓶中，用混合碱液调至刻度。6、注释（1）总蒽醌包括游离蒽醌

34、和结合蒽醌，游离蒽醌测定，样品直接用氯仿提取至无色，再用混合碱液多次萃取氯仿提取液制得供试品溶液，而结合蒽醌测定系先用 5mol/L 的硫酸水解， 再用氯仿提取，再用混合碱液多次萃取氯仿提取液质的供试品溶液。（2）本方法线性围为 0.1160.580mg/mL（3）本方法的平均回收率为 97.0%（n=3）。（4）精密度RSD=1.2%（n=5）。（5）比色时注意比色液中是否混有氯仿微粒的干扰，而影响测定结果。（第 224 页）十四、几丁胺醣的脱乙酰度滴定法1、方法提要几丁胺醣又称壳聚糖、脱乙酰甲壳素、甲壳胺，由甲壳素在 80120下经强碱长时间脱去乙酰基而得到，化学名称为（1,4）-2-氨基-2-脱氧-D 葡聚糖。脱乙酰度为鉴定几丁胺醣纯度的重要指标。利用几丁胺醣呈弱碱性的特点，用过量的盐酸中和溶解，再以甲基橙为指示剂，以氢氧化钠滴定中和剩余的盐酸，可间接测定几丁胺醣消耗盐酸的量，从而计算出其脱乙酰度。4、测定步骤准确称取 0.25g 几丁胺醣样品，置于 100mL 烧杯中，加入 0.1mol/L 盐酸 40mL，在室温下用平头玻棒捣碎试样，并搅拌使其充分溶解，放置2 小时，加一滴 0.1%甲基橙作指示剂，用0.1mol/L 氢氧化钠滴定至红色刚好消失，保持1min，计算消耗的氢氧化钠标准溶液的体积。注：平行测定结果不大于 0.2%，计算结果精确至小数点后一位。（第 231 页