肝素钠生产工艺综述(20210306012439)

1、精品文档 一、肝素分类 它与蛋白质结合在一起存在于肠肝素是哺乳动物体内含的一种粘多 糖，粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、 抗血栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，脑血管疾 病的显效药物。，相当肝素是由猪或羊黏膜提取，平均分子至为 15000（标准）（1）普通 稳定。的称为低分子肝素。低分子肝素与普通 肝6000（2）通常把分子至小于素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好， 而抗凝出血倾向较弱，有取代、依诺肝素钠）（法安明普通肝素的趋势。 近年临床常用的有：达肝素钠 ）o ）克赛、低分子肝素钙（速避凝、那 屈肝素钙（目 前正在深入研究的肝素制剂中还有低抗凝活性肝素

2、、改 构型肝（3） 这些药物特点是具有低抗凝、高抗栓、作用 时间长和出，素、类肝素 等血作用少的优点，很有开发前途。 二、肝素钠简介 Heparin Sodium Gansuna 英文名：拼音名： 本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物 而发挥抗凝作用。它对凝血过程的三）（AT-质，通过激活抗凝血陶IIIIII 精品文档. 精品文档个阶段均冇影响，在体内外均冇抗凝作用，可延长凝血时间、 凝血酶原 时间和凝血酶时间。口月艮不吸收，皮下、肌肉或静脉绐药 均吸收良好。（药典版）三、肝素钠检测 Heparin Sodium 英文名：拼音名：Gansuna 属黏多糖类本品系自猪或牛

3、的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠 盐，的效价不得少毎lmg物质，具有延长血凝时间的作用。按干燥 品计算，150单位。于 本品在水中易溶。【性状】 本品为白色或 类白色的粉末；有引 湿性。40mg 1 ml中含【比旋度】 取本品，精密 称定，加水溶解并稀释制成每 。E）,比旋度应不小于+ 35的溶 液，依 法测定（附录VI的2.5mg 分别加水制成每1ml中含【鉴别】 （1）取本品与肝素标准品，第三法）试验，供试品和标准品所显斑点 F 电泳法（附录V溶液，照本品的水溶液显钠盐的鉴别反（2） 1.1。 的迁移距离之比应为0.9 ）o应（附录III溶解后，依法测定（附录10ml0.10g ,加水酸

4、碱度取 本品【检查】7.5 o pH值应为5.0 VI H）,溶液应澄清无溶解后， 0.50g加水10ml溶液的澄清度与颜色取本品的波长处测定，640nm A）,在IV色；如显浑浊，照分光光度法（附录 A号标准比色液（附 录IX 0.018;如显色，与黄色1吸收度不得大于 第一法）比较，不 得更深。的溶液，照分光光度法（附4mg取本品，加水制成每lml中 含吸收度 280nm 在0.20的波长处，在）IV录 A测定，260nm 其吸收度不得大于；精 品文档. 精品文档。于0.15的波长处，其吸收度不得大万单位），加水40黏 度 精密称取本品（按实际测得的单位计算相当于呈瓶中，研钵用水 冲洗并移

5、入10ml适哩研细，移入干燥并称定重呈的水至刻度，摇 内，俟温度平衡后，加25水浴呈瓶中，将哩瓶置25C 的 m 0.45“计茸供试品溶液的密度。取溶液，必要时用匀，称定重 呈，的毛 mm 第一法），用内径约为1滤膜过滤，照黏度测定法（附 录VI G o测定其动力黏度，不得大于0.030Pa.s C 0.1 C细管，在 25按干燥品计算，第二法）测定，照氮测定法（附录VD D总氮量 取 本品， 2.5 %o 1.3% 含总氮至应 为）进行有机破VII C取本品约 25mg,精密称定，照氧瓶燃烧法（附录硫 为吸收10ml燃烧瓶，以浓过氧化氢溶液lOOOmlO.lml与水坏，选用 分2 15分钟后

6、，加热缓缓煮沸液，俟生成的烟雾完全吸收后，宜冰 浴中0.1 30ml,（pH3.7）50 ml钟，冷却，加乙醇-醋酸铁缓冲液， 乙醇定至（0.05mol/L）滴茜素红溶液0.3ml为指示液，用高氯酸颔滴 定液，的S（0.05mol/L） lml高氯酸钦滴定液相当于1.603mg淡橙红色。 每 10.0%。按干燥品计其，含硫呈不得少于减压干燥至恒重，60C 干燥失重 取本品，置五氧化二磷干燥器内，在 ）o （附录VHI L减失 重呈不得过5.0%遗留残渣应为28.0VHI （附录N）, 0.50g炽灼残 渣 取本品，依法检查 41.0%。摇匀，呈瓶中，加水溶解并稀释至刻 度，100ml取本品钾盐

7、0.10g ,置干燥C （精密称取在；B作为供试 品溶液（）另呈取标准氯化钾溶液150持品文档. 精品文档至瓶中，加水溶解并稀释至，置1000ml 1小时的分析纯氯化 钾 191 mg ）溶液稀释至刻度，摇匀，至瓶中，加（B 5.0ml,置50ml刻度，摇 匀）杂质检查法）IV D作为对照溶液（A）。照原子吸收分光光度法 （附录的波长处分别测定，应符合规定。在766.5nm 第二法），含重金属不得 H0.50g ,依法检查（附录VIII重金属取本品 三十。过百万分之 依法单位的溶液，中含1000热原 取本品，加氯化钠注射液制成每lml 2ml , 应符合规定。lkg XI D）,剂呈按家兔体重

8、每注射检查（附 录 ）测定，应符合规定；测XI【D【效价测定】 照肝素生物检定法（附 录 得的结果应 %o 110为标示呈的91 % 抗凝血药。【类别】 密封，在凉暗处保存。【贮藏】 肝素钠注射液【制剂】 四、肝素钠生产工艺流程 斤，按斤肠粘膜加入清水1001、盐解：将刮好的新鲜肠粘膜，每100PH 的工业盐，搅拌均匀，再加烧碱液调肠粘膜和水的总重量，加入4% 分钟加水搅拌一次，度，加温时每50-5510-20值为8-9, 缓慢升温 度，96-982恒温小时，注您要间隔搅拌。恒温结束后，要快速升温 到 目尼龙布过滤。分钟，趁热捞出上层的渣子。用恒温10100精品 文档. 精品文档注您： 肝素和

9、蛋白质加盐过少，加盐过多会使下一步交换吸附含量超过规定, 分离不完全，碱性过强，会使肝素降解破坏，收率下降。同时还能使 一些蛋白质溶解度增大，造成过滤困难。碱性不足造成提取液偏酸， 则在高温的情况下，肝素迅速破坏，升温过怠会使蛋白质早凝固，影 响肝素 的分解和溶出。时，5-5%3。2、吸附：待提取液温度冷至 50-55度，应检测盐浓度为需用清水将树脂洗净已处理号的树脂。5% 如树脂上含齐盐水，即可加入分钟为宜，搅转/控干，方可使用。搅 拌吸附6-8小时，转速60-80拌须使树脂上下翻动，否则吸附效果 差，收率低。吸附完毕，弃去上层目的尼龙布过滤出树脂。加入提取 液的树脂呈：新吸附液，然后用10

10、0 %o加入，旧树脂可按提取液的 树脂可按提取液的5-6%8-10 度左右的温水，漂洗干净。再放入与树脂403、洗涤：过滤后的树脂 用分钟，除去洗涤）10-20重呈相等的盐溶液中（盐溶液的浓度为5% 左右 低分子肝素和一些蛋白质，然后将树脂过滤。的盐溶液中搅 20-22%第一次洗脱将过滤号的树脂放入浓度为4、洗脱：过滤后将 树脂控干进7。：小时，树脂和盐水的比例为10。5-6拌洗脱小时以 上，树脂和盐，搅拌16-18%3行第二次洗脱，调盐溶液浓度为水的 比例与第一次相同，过滤后的水即是药液。 精品文档. 精品文档10-12PH值为调除杂：将稀碱水加入洗脱后的药液里，要快 搅慢加，5、小时后，抽

11、出上层药液，下沉的是杂质，且分钟，静止 沉淀20搅拌2渣子放另外桶内过滤。过滤后的药液和下次药液除杂 时合并待用。 , 即可加入5值为PH7-7。6、沉淀：将抽出除杂后的药液加入盐酸 调由于酒精的浓度不同，(酒精进行沉淀。向药液里加入酒精要快搅 慢加。加盖密，用酒精计测至酒精度为30-35%因此沉淀肝素的酒精 用疑不等)小时。弃去废酒精收集糊状肝素。注您在抽出废酒精时， 20封，沉淀以备柔中脱不可抽动沉淀的肝素。将多次生产的肝素钠 浆收栗在一起，水干燥。 的酒精内95%脱水：、将生产的肝素钠浆，用双层的确良布过滤后放 入7小时，加盖密封。过滤后按上述方法重复一次，使其充分的将 20浸泡肝素上的

12、水分交换下来。 、干燥：待肝素钠浆沥干后，放在不锈钢盘中烘干，用铲子来回的翻 8度，注您温度低于要求是不易烘干的，温度高50-55动，温度保持 在度时会使肝素钠的生物活性下降。干燥后的肝素很易吸潮，应及于 6()回时用双层塑料袋密封包装，于通风干燥处存放。精品文档. 精品文档 五、肝素钠精制新工艺，本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素, 在该过程中采用低温离，技术粗品肝素钠 中残留杂蛋白在纯化过程 中很难解决在除酸性蛋白过程中，被除去的缺点。在粗品肝素钠中 加入胰蛋白礴对这些杂蛋白进行礴解，从而提高精品肝素钠的效价和 效价回收率。再结合一次氧化除杂过程1、工艺流程 2、溶解水浴C50左右 NaCI

13、溶液进行溶解。称取适呈肝素钠粗品加 质呈分数3%小时，过滤除不溶性杂质。静宜28.0加热，用NaOH 溶液调pH 至、酶解法除蛋白3蛋白质复合物的形式存在，通过礴解 或盐解肝素在动物体内是以肝素-去除复合物的蛋白质成分，游离肝 素。但在实际生产过程中，复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的， 粗品中总存在数呈不等的蛋白质。粗可以进一步去除粗品中残存的结 合蛋白质. 不品肝素钠必须经过精制，的肝素活性得到释放而”“仅 因杂蛋白的去除而提高效价，而且因被掩蔽获得较高活性。为此，利 用蛋白水解礴专一水解蛋白的特点，并结合调采用酶解除蛋白法，该 法能在除去蛋 白质,酸除蛋 白和氧化除蛋 白方法 时较少影响肝素总效 价。使残留在肝素中的少呈蛋白质降在肝素钠溶液中加入少至的胰蛋 白礴，再结合调酸破和氧化蛋白质复合物中解离出来，从肝素解成 小分子肽制得精品肝素钠的效价和效加回收率均有不同程度提高Q 法除蛋白，精品文档. 精品文档.反应时间40C79, 温度pH 酶解反应条件：蛋白酹加入 呈0.05%, 5ho 4、调酸除蛋白加入亚硫酸氢钠作保护剂。在在调酸 除蛋白过程中，为防止肝素失活，低