最新牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌汇编

1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌一、实验目的 ：1、学习并掌握培养基配制的原理， 掌握配制牛肉膏蛋白胨培养基的方法和步骤。 2、学习并了解高压蒸汽灭菌的原理和操作技术。二、实验原理：（一）微生物分离与纯化1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备与灭菌 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基， 它含有 牛肉膏、蛋白胨和 NaCl 。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白 胨主要提供氮源，而 NaCl 提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼 脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下 96 C时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉 网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在 40 C时凝固，通常不被微

2、生物分解利用。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其 pH 调至中性或微 碱性，以利于细菌的生长繁殖。三、实验仪器和试剂1、仪器：分析天平；锥形瓶；移液管；高温电炉；容量瓶；烧杯；无菌培养皿； pH 试 纸；胶头滴管；玻璃试管；酒精灯；高压蒸气锅；玻璃棒；2、试剂：牛肉膏；蛋白胨；NaCI ;琼脂；蒸馏水;四、实验步骤:（一）分离纯化制备试验菌种的菌悬液1培养基的配置配置牛肉膏蛋白胨的液体培养基，待培养基冷却后进行分装。将分装完毕后 的培养基进行高压蒸汽灭菌； 称量：按试验用微生物培养基配方，逐一称取各种药品放入烧杯中。液体培养基配方：牛肉膏蛋白胨NaCI葡萄糖蒸馏水0.6g

3、2gig2g200ml 溶解：将去蒸馏水加入到上述烧杯中使各种成分溶解，难溶的物质，例如 蛋白胨、加热促进其溶解，待全部溶解后，加水补足加热蒸发的水量。制备固体 培养基，加热融化琼脂时要不断的搅拌，避免琼脂糊底烧焦。 调节pH值；初配好的培养基往往不能符合所需要的 pH值，故需用pH试纸检测，并以一定浓度的盐酸溶液和氢氧化钠溶液调节培养基溶液pH值至7& 分装：将调节好pH值的培养基分装于十支试管和两个锥形瓶中（注意防止 培养基沾污管口或瓶口，避免浸湿橡皮塞塞引起杂菌污染）。分装液体培养基时， 每支试管装的量为试管高度的1/31/2，锥形瓶中各加入250 300ml培养基。 分装完毕后，将试管

4、及锥形瓶用橡皮塞塞紧，防止高压蒸汽灭菌时管内压力过大 冲开。 包扎：加塞后，在全部试管胶塞外包裹双层报纸，并用棉绳捆扎好，同样 的，将两个锥形瓶也用同样的方法包扎好。最后，用记号笔注明培养基名称，日 期。2、灭菌本试验采用高压蒸气灭菌法。 加水，立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1/3处。 把需灭菌的器物放入锅内（器物不要装得太满，否则灭菌不彻底），关严锅盖（对角式均匀拧紧螺旋），打开排气阀。 启动电源开关。 待炉内水沸腾后，蒸气将炉内冷空气驱净，关闭排气阀。 升压，升温。关闭排气阀以后，锅内成为密闭系统，蒸气不断增加，压力计和温度计的指针上升，当压力达到1.05kg/cm2（温度为12C）即灭菌开始，这时开、关电源，保证压力维持在 1.05 kg/cm 2，20min左右。 中断热源，达到灭菌时间要求后停止加热，任其自然降压，当指针回到“0” 时，打开排气阀（排气阀不能过早打开，否则培养基因压力突降，温度没下降而 翻腾冲到棉塞处，既损失培养基又沾污了棉塞 ）。 揭开锅盖，取出器物，分装至无菌培养皿中，静置。 二十四小时后观察是