专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数--黎丽霞

1、预习目标专题2微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(一)知识与技能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数 分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性(三)情感、态度与价值观形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯预习重点对土样的选取和选择培养基的配制预习难点对分解尿素的细菌的计数一、教材导读 理论基础1 .筛选菌株(1) 实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时或其他微生物生长。(2)选择培养基：在微生物学中，将允许 _种类的微生物生长，同时 _和_其他种类微 生物生长的培养基，称作选择培养基。(3 )配

2、制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ;的微生物加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。2 .统计菌落数目(1 )测定微生物数量的常用方法有 和。(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。3 设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实

3、验结果的影响，提高实验结果的。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。二、疑问存档请你将预习中未解决的问题和有疑问的问题写下来，等待课堂上与老师和同学共同探究解决。疑惑点疑惑内容、预习自测1.下列微生物的产物中没有菌种特异性的一组是A氨基酸、核苷酸、多糖、色素B. 多糖、脂类、维生素、抗生素、氨基酸C. 核苷酸、多糖、维生素、毒素、抗生素D. 核苷酸、维生素、多糖、脂类、氨基酸2 微生物代谢的人工控制是指控制发酵时的温度包括A、B、C三项种内斗争A. 改变微生物的遗传特性B.C调节发酵过程中的 pH,氧气通入量D.3. 在微生物群体生长规律的测定中，不可能发生的是A

4、. 繁殖 B.生存斗争C.种间斗争D.4. 与调整期长短有关的因素中，可缩短调整期的一组是用与菌种相同的培养基营养丰富的培养基稳定期获得的菌种对数期获得的菌种接种时间提前接种量加大接种量减小接种种类加大AB 、C 、D 、5 微生物群体生长善的测定方法可以是测定样品的细胞数目测定培养基中细菌的体积测定初级代谢产物的总产量A. B. 测定次级代谢产物的总产量测定样品的细胞重量C. D. 专题2微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、课堂互动实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先

5、准备好的 _ 中。2 .制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。3 .微生物的与观察将10g 土样加入盛有 90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清 液，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 _进行平板涂布操作。 每个稀释度下需要 3 个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。将涂布好的培养皿放在 30 C温度下

6、培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-10的颜色反应。4 .细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对 3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。三：思考与讨论(1) 如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？(2) 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？四：典例分析类型一 选择培养基的配制【例1】分析下面培养基的配方：KHPQ、NMPQ MgSO7f0、葡萄糖、尿素

7、、琼脂。请回答：(1) 在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别 和(2)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的 ？解析：碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝 大多数生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。答案：(1)葡萄糖 尿素(2)有选择作用。因为此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利 用尿素的微生物才能够生长。类型二统计菌落数目【例2】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为

8、106的培养基中.得到以下几种统计结果，正确的是()A .涂布了一个平板，统计的菌落数是230B .涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260,取平均值238C .涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和2墨6，取平均值163D .涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250,取平均值233解析：在设计实验时，一定要涂布至少3个平板.作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了 3个平板，但是，其中 1个平板的计数结果与另两个相差太远， 说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案：D类型三设置对照【例3

9、】用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（）A. 未接种的选择培养基B. 未接种的牛肉膏蛋白胨 （全营养）培养基C. 接种了的牛肉膏蛋白胨（全营养）培养基D. 接种了的选择培养基解析：将菌液稀释相同的倍数， 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上 的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。对照遵循的原则是单一变量，所以与选择培养基一 样接种、培养。答案：C 五、随堂训练1 在一个“淀粉一琼脂”培养基的5个圆点位置，分别用不同方法处理，将此实验装置放在37C恒温箱中，保温处理 24h后，将碘液滴在培养基的 5个圆点上，其实验结果记录于下表：（0淀粉圆点实验处理方

10、法碘液处理后的颜色反应新鲜唾液与盐酸混合蓝黑色JULUL 八、11经过煮沸的新鲜唾液蓝黑色JULUL 八、11接种面包霉棕黄色只有新鲜的唾液?只有一定浓度的蔗糖溶液?请指出和所发生的颜色反应，以及接种的面包霉的分泌物分别是A.棕黄色、棕黄色、淀粉酶B.蓝黑色、棕黄色、麦芽糖酶C.棕黄色、蓝黑色、淀粉酶D.棕黄色、蓝黑色、麦芽糖酶2实验测定链霉素对 3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等，将平板置于37C条件下恒温培养 3天，结果如的D .培养长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触） 图所示。从实验结果分析以下叙述， 不正确的是A. 链霉素能阻止结核菌的生长B.

11、链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C. 链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D. 链霉素可以用于治疗伤寒病人3. 利用生物工程生产啤酒、味精、胰岛素、酸奶 常用菌种分别是A. 酵母菌、枯草杆菌、大肠杆菌、乳酸菌B. 酵母菌、大肠杆菌、青霉菌、乳酸菌C. 酵母菌、谷氨酸棒状杆菌、大肠杆菌、乳酸菌D. 黄色短杆菌、酵母菌、大肠杆菌、乳酸菌4. 下列操作不属于微生物的分离步骤的是A.稀释B .划线或涂布 C.接斜面5. 影响微生物生长的主要环境因素是A.阳光、温度、水分B .温度、水分、PH C .水分、PH氧D.温度、PH氧土壤中分解尿素的细菌的分离与计数参考答案：一.理论基础：1 （1） 目的菌珠 抑制 阻止（2）特定 抑制 阻止自养 能固氮的微生物;2（1）有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。（2）.稀释度细菌30-300 显微镜3.非测试因素可信度 无杂菌污染二实验设计： 1. 土壤，铲去表层土。 2. 培养基 多于 对照 3. 培养 1ml 9ml 0.1mL 4.30-300 平均数 三： 思考与讨论1 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3 个平板，计算出平板菌落数的平均值，然 后按课本旁栏的公式进行计