用血球计数板对酵母菌进行计数

1、用血球计数板对酵母菌进行计数一、血球计数板的构造1、血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之 用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一 种常见的生物学工具。 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特 制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的 平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面，刻有一 个方格网。 在血球计数板的方格网上刻有 9个大方格， 只有中间 的一个大方格为计数室，供计数用。2、计数室刻度有2种：一种是25中格X 16小格，而另一 种为16中格X 25小格（如下图），它们都是由400个小格组成。计数板每个计数室边长为1mm（即每一个大方格边

2、长为1 mm，则每个计数室面积为1mm2即每一大方格的面积为1 mn2）。 盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高度为0.1 mm。所以每个计数室的容积为0.1 mm 3。计数时，如果使用16中格X 25小 格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下 4 个中格（即100小格）的酵母菌数。如果规格为 25中格X 16小 格的计数板， 除了取其 4个对角方位外， 还需再数中央的一个中 格（即 80 小方格）的酵母菌数。注意：计数时中格的边界是双 线，要以内线为边界。3、看懂血球计数板上板面数值的含义：0.1 m两嵴的表面比两个平台的表面咼，即载玻片与盖 玻片之间高度 =所加菌液的厚度。1

3、/400 mm2每个小格的面积。XB-K 25中的“ 25” 计数室有 25个中格。4、每毫升培养液中酵母菌总数 =每小格平均菌数X 400X 104 X菌液稀释的倍数。16X 25的计数板计算公式：细胞数/ml= （100小格内的细胞数?100）X 400X 104 X稀释倍数25X 16 的计数板计算公式：细胞数 /ml= （80 小格内的细胞 数?80）X 400X 104 X稀释倍数二、取样、制片和观察中的几个要求1 、从试管中吸取出培养液进行计数之前，建议将试管轻轻 震荡几次。这是为什么？轻轻震荡几次是为了使试管中酵母菌分布均匀， 减少实验误 差，使实验更加准确。2、制片时为什么不直

4、接向计数室滴加酵母液？因为滴管的1滴体积远大于计数室的0.1 mm3,直接滴加会 使盖玻片浮起， 所以需要摇匀稀释的酵母菌液， 用无菌滴管吸取 少量菌液，从盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入计数室。注 意：计数室内不能有气泡，若有气泡则重新制片。3、发现视野内酵母菌数目太多，挤成一堆，无法进行计数， 应进行怎样的处理后，才能进行精确地计数？用 1/10 稀释法处理。另取一试管，加入 9mL 的无菌水；充 分振荡培养液后，量取1 mL培养液；加入9mL无菌水的试管中， 完全混合后，使其稀释10倍。稀释后，取0.1 mL进行计数。依 次进行稀释到每小格 3-5 个为宜（或所计数的几个中格内的酵母

5、细胞总数小于 300 个）。4、对于带芽体的酵母怎样计数？ 活酵母有出芽生殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为 2 个菌体计数， 若芽体小于母细胞一半时为 1 个酵母细 胞。5、对于正好位于中格边框的个体怎样计数？按左上原则， 即对于压在小方格界线上的酵母菌， 应只计数 相邻两边及其顶角的酵母菌（通常遵循左上原则）。6、血球计数板如何清洁？ 血球计数板使用后，先用自来水浸泡，然后用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晒干或用吹风机吹干或用 95%的乙醇 或无水乙醇、 丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。 通过镜检观察小格 内是否残留菌体或其他沉淀物， 若不干净， 则必须重复清洗直到 干净为止

6、。三、应用和巩固例 1. 利用计数板可在显微镜下对微生物细胞进行直接计 数。计数板是一个特制的可在显微镜下观察的玻片， 样品就滴在 计数室内。计数室由25X 16=400个小室组成，容纳液体的总体 积为 0.1 mm3 。现将 l mL 酵母菌样品加 9 mL 无菌水稀释，用 无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室， 盖上盖玻片并用滤纸吸 去多余菌液。现观察到图中所示 a、b、c、d、e 5 个中格 80个小室内共 有酵母菌440个，贝V上述1 mL酵母菌样品中约有菌体 个。为获 得较为准确的数值，减少误差，你认为可采取的做法是 。【解析】因为平均每个小格的菌体数 =440/80=5.5 （个）， 体积是0.1 mm 3/400，所以，酵母细胞个数/mL=小格平均菌 数x 400X 10 4 X 稀释倍数=5.5 x 4X 106X 10=2.2 X 108。可采 用重复取样求平均值的方法获得较为准确的数值，减少误差。【答案】 2.2x108 对样品重复计数 2-3 次，求平均值例 2. 为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，甲、乙 两小组同学完成了有关实验， 定期采用在显微镜