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文档简介

1、测序原理及流程 v 原理 v 流程图 原理 I.杂交杂交：利用碱基互补原理，通过退火将 anchor结合于测序样品末端的已知序列； II. 连接：连接：随后在T4 ligase的作用下，使与待测 位点碱基互补的荧光探针与anchor连接并与 样品互补结合； III. 收集信号：收集信号：收集与样品结合后的荧光探针在 特定激发光下发出的荧光信号，由荧光信号 的种类确定样品上所测位点的碱基种类。 Beads 5DNA3 Beads 5DNA3 Anchor Anchor Probe Beads 5DNA3 Anchor Probe 信号收集 确定碱基 荧光 信号 Beads 5DNA3 Ancho

2、r Probe NaOH Cut Beads 5DNA3 Beads 5DNA3 New Anchor next cycle 流程图 杂交杂交 退火将anchor结 合于样品末端 连接连接 T4 ligase的作用使与 待测位点碱基互补的 荧光探针与anchor连 接并与样品互补结合 信号收集信号收集 收集与样品结合后 探针在特定激发光 下发出的荧光信号 杂交 2SSPE 28， Wash 60，30s Load Anchor 42，2min 结合结合 连接连接 25 连接 Reaction buffer 25， Wash Load： T4 Ligase Probe Reaction buffer 30， 10min Washing buffer 2SSPE 30， Wash 采图采图 信号收集信号收集 采图采图 完成后完成后 25 Load： 1 X NaOH Load： 2SSPE 25 洗脱结束，洗脱结束， 进入下进入下cycle 测序过程的总结测序过程的总结 1、3步骤步骤：杂交；连接；信号收集。 2、常用酶、常用酶：T4连接酶（30）。 3、2种滤光片种滤光片：绿色滤光片CY3；黄色滤光片TR。 4、4种反应种反应Buffer：2SSPE；Reaction Buffer；1 X Buffer N（ NaOH）；Washing Buffer 5、1Base，2

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