痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程

1、精品文档.痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程1 观察标本合格后操作。一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深 部咳出痰，吐进无菌容器内送检。涂片白细胞小于 10，上皮细胞大于 25 为不合格 痰，相反白细胞大于 25，上皮细胞小于 10-25 为合格痰标本。2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。3 接种环灭菌 待冷却后取痰液接种到血平板 、中国兰平板（或麦康凯平板 上）。平板划线分离培养：（ 1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。（ 2）每划一区域应将接种环烧灼一次 ，冷却后再划下一区域，每一区域的划 线应接触上一区域的接种线 2-3 次使菌量逐

2、渐减少以形成单个菌落。（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于 35C 培养 18-24 小 时。4 观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌 、阴性菌 、球菌还是杆菌后 鉴定种属。5 做药敏试验 报告结果。便培养标准操作流程1. 收取有粘液或 脓血、稀水粪便标本。2. 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。3. 接种环灭菌 待冷却后取粪便接种到血平板 、SS 平板、中国兰平板（或 麦康凯平板上）。平板划线分离培养：（ 1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。（2）每划一区域应将接种环烧灼一次 ，冷却后再划下一区域，每一区域的划 线应接触上一区域的接种线 2-

3、3 次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于 35C 培养。4 培养 18-24 小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌 、阴性菌 、球菌还是 杆菌后 鉴定种属。5 做药敏试验报告结果尿培养标准操作流程1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。 （把外阴用肥皂清洗一遍， 再用清水清洗两遍， 待干 或用干净布擦干）用导尿管的病号需新换导尿管后取标本2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。3接种环灭菌一待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液 1ul（大约一接种环）一 接种到血平板 ，接种环灭菌 -待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板 上） 。 （抗菌素治疗患者应增加

4、一个 10ul 接种。 ）4 平板单区划线法：用灭菌接种环在血平板与中国兰（或麦康凯）平板的中间位置单区划线（这种方法适合菌落计数，假如细菌多不容易分出单个菌落。 ）5 划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于 35C 培养 18-24 小时。6 观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌 、阴性菌 、球菌还是杆菌后 鉴定种属。7 做药敏试验 报告结果。注：接种1ul尿量者，菌落数乘以10,接种10ul尿量者，菌落数乘以100.即为每ml 尿液中所含有的细菌数（ CFU/ml ） ,如菌落数生长过多无法计数则报告大于100000 CFU/ml.分泌物培养标准操作流程1在 无菌环境下用一次性拭子快速

5、取分泌物或脓液标本。2点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。平板划线分离培养：（1） 用拭子将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环 划线。（2） 每划一区域应将接种环烧灼一次 ，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应 接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。（3划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35 C培养18-24小时。3观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌 、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。4做药敏试验一-一报告结果。穿刺液培养标准操作流程1 收取合格的穿刺液标本。 （咨询下是否按要求取的标本）2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。3 将穿刺液接种到增菌培

6、养液进行培养。 （穿刺液含细菌数量较少， 因此，必须做增 菌培养）4 培养 18-24 小时候后，用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取 0.5 毫升液 体打入血平板 、巧克力平板（ CO2 环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦 康凯平板上）接种环灭菌 待冷却后。平板划线分离培养：（ 1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。（2）每划一区域应将接种环烧灼一次 ，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应 接触上一区域的接种线 2-3 次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35 C培养18-24小时5 观察菌落特征

7、涂片染色，确定阳性菌 、阴性菌 、球菌还是杆菌后 鉴定种属。6 做药敏试验 报告结果。注 ：标本经增菌转种平板后，经 35 C24-48 小时孵育后，如无细菌生长，平 板还应继续孵育至第 3 天 .如怀疑有奴卡菌，平板应持续孵育 7 天证实无菌生长， 才能报告阴性 .血培养标准操作流程1 用严格无菌技术静脉采血法采集 2 套外周血，作培养标本。2 检查培养瓶确保它们被安全放置，检查瓶子上的标签确认与申请单上的患者资料 是否一致。3保证获得适量的血液.小孩最少3ML大人最少5ML,正常应该是10ML4 放入 35 c 孵育 7 天。5 孵育至 3 天后和 5 天后 分别用酒精消毒培养液瓶口，用五

8、毫升注射器抽取 0.5 毫升液体打入血平板、巧克力平板（C02环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或 麦康凯平板上）接种环灭菌待冷却后。平板划线分离培养：（ 1 ）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二 三区依次用接种环划线(2)每划一区域应将接种环烧灼一次 ，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应 接触上一区域的接种线 2-3 次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。(3)划线完毕将平板加盖倒置(琼脂平板的底部向上)于 35 C培养18-24小时6 培养瓶继续孵育至第七天，每日早晨取出检查有无生长，并摇均培养液续孵。 下列几种情况提示细菌生长。( 1 )均匀浑浊，发酵葡萄糖产生气泡。( 2

9、)微浑浊有绿色变化。( 3)血球上面出现颗粒状或絮状沉淀物生长，或自下而上的严重溶血。( 4)浑浊并有胶冻状凝固，瓶壁有颗粒黏附。( 5)表面有菌膜、菌环状生长，下呈浑浊。7 肉眼见有细菌生长做如下处理：( 1)取生长物涂片，做革兰染色。 ( 2)取生长物做药敏试验(直接试验) 。( 3)取生 长物做相应的生化鉴定。 (4)取生长物移种血平板、 巧克力和中国兰(或麦康 凯)等平板进行分离以获得纯培养。8 革兰氏染色所见结果应及时报告临床医师。9 根据革兰染色的结果，以培养瓶内培养液为菌液，做直接法药物敏感性测定，争 取在较短时间内得出初步结果，供临床医师作为治疗的参考。标本经平板分离纯 培养后

10、须重复做鉴定及药敏试验 ，以验证用增菌液直接试验结果的可靠性。10 无细菌生长表现的培养瓶，在观察的 7天中，最少 2次 盲目转种。需养培养瓶用血琼脂平板、中国兰(或麦康凯)及巧克力平板 (二氧化碳环境 ) ，分别于增菌 培养第 3 日和第 5 日各作一次盲目分离培养； 培养 48 小时后观察结果， 7 天仍未 见生长 报告阴性 。各种标本培养采样时的 注意事项：采样时必须按采样要求操作， 并且须在使用 抗菌素前进行，并及时送检。结果判断时必须注意区别病原菌和正常菌群。正常无菌部位培养出细菌有临床意义。有正常菌群存在的部位，培养出细菌须区分是否为 正常菌群并结合临床情况判断。革兰氏染色标准操作

11、流程1 取干燥、标本薄而均匀的涂片。2 加龙胆紫染色 10 秒，之后水洗，甩干。3 加碘溶液染色 10 秒，之后水洗，甩干。4 加脱色液脱色（ 10-20）秒，之后水洗，甩干。5 最后加沙皇溶液复染 10 秒，之后水洗。6以滤纸吸干或在空气中干后，镜检7报告结果（革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。）抗酸染色标准操作流程1 取干燥标本薄而均匀的涂片。2 涂片自然干燥后，放置染色架上，玻片间距保持 10mm 以上的距离；火焰固定 （ 在5 秒内将玻片置于火焰上烤 4 次 ）3 滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，染色 10 分钟或更久。（不需加温步骤）4 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。5 自痰膜上端外缘滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色（ 1-2）分钟；如有必要，需流 水洗去酸性酒精溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色