ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项

1、-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项一原理根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴 定ABO血型。所谓正定型，是用己知抗一A和抗一B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用己知A 细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一A或抗一B。二试剂和材料1. 抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见木节附注）2. 5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3. 受检者血清；4. 受检者5%红

2、细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。三方法1.试管法取洁净小试管3支，分别标明抗A、抗B和抗一A十B,用 滴管分别加抗一A、抗B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底 部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液2滴，混和。（2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和0细胞。用滴管分别 加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和0型 5%试剂红细胞悬液I滴，混和。（3）立即以 lOOOr / min 离心 lmino(4) 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有 无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再 以低倍镜检查。(5) 观察结果时既要看有无凝集

3、，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。(6)凝集强度判断标准凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细 胞MF混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝 集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。2. 玻片法(1) 取清洁玻片1张(或白瓷板2块)，用蜡笔划成方格，标明抗- A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B

4、分型 血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混 和。(2) 另取洁净玻片一张(或口瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴 管滴加A、B和0型试剂红细胞悬液1滴。(3) 将玻片(或口瓷板)不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连 续约15min,以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。如以玻片作试验 时，也可用低倍镜观察结果。四结果判定ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞受检者血型抗-A抗-B抗-ABA细胞B细胞0细胞+-+-+-A-+-B-+-0+-AB注；十为凝集；“-为不凝集。五附注及注意事项1

5、. 分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细 菌污染。2. 试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗 涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3. 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。4. 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液， 以便容易核实是否漏加血清。5. 按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4C为最强， 但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20-24C)内进行试 验，37C可使反应减弱。6. 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性 或假阴性结果。7. 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱

6、状排 列的区别。&判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。正反定型结果不一 致的原因六常见有技术性问题或红细胞和血清本身的问题1. 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗一A血清效价不高，可 将A亚型误定为0型，AB型误定为B型。2. 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明 显，误判为阴性反应。3. 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于口血 病或恶性肿瘤：以及类B或cisAB等。4. 受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋口血症），或实验时温度过高， 常引起红细胞呈缗钱状排列。5. 受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗一B抗体，如丙种球蛋口 缺乏症。6. 各种原因引起的红细胞溶解

7、，误判为不凝集。部分溶血时，可 溶性血型物质中和了相应的抗体.7. 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不 符的原因。&血清中有意外抗体，如自身抗-I,常引起干扰。9.老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决 办法如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验1次。严格 执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结 果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题月必须进一步研究。 检查步骤1. 另从受检者采取I份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错 样本造成的不符合。2. 将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗一A、抗一B、抗一AI,抗一A十B及抗H做试

8、验可以得到其它有用的信息。3. 对受检红细胞作直接抗球蛋口试验，如结果呈阳性，表示红细 胞己被抗体致敏。4. 用Al、Az、B、0红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀 疑是抗一I,用0型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。5. 如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4C放置30min,用显微镜检查核实。6. 如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗一A或抗 B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测 定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。7. 如试验结果红细胞呈绢钱状排列，加等渗盐水I滴，混和，往 往可使绢钱现象消失。应注意不应先加盐水I滴于受检者血清中而 后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。&如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：(2)观察细胞与抗一A及抗一B的凝集强度，与抗一A的反应要比与 抗一B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗一B不凝集自 身红细胞上的类B抗原。(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质 而无B物质。(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴 性杆菌感染有关。9.如发现多凝集现象，应考虑由遗