药学毕业论文--人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达

1、 人源胸腺素原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达【摘要】 目的 克隆人胸腺素原/白介素2 融合基因，构建其原核表达载体并在大肠杆菌系统中有效表达。方法 采用rtpcr方法，从人白血病细胞和人t淋巴细胞中分别扩增得到胸腺素原/白介素2 基因，利用基因重组技术将融合基因片段重组于pet42a原核表达载体上，构建成pet42api。经酶切、测序鉴定后，将重组质粒转化大肠杆菌rosseta，iptg诱导蛋白表达。表达产物经离子交换和分子筛纯化后进行western blot分析，通过人外周血单核细胞玫瑰花结实验对融合蛋白进行了初步的活性测定。结果 凝胶电泳显示pcr产物的长度约750 bp，测序结果

2、表明，扩增片段与预期序列一致。重组菌在iptg诱导下表达相对分子质量为28 kda的蛋白，纯化后的融合蛋白能提高人外周血单核细胞玫瑰花结形成率，表明具有一定活性。结论 成功克隆和构建了人胸腺素原/白介素2融合基因的原核表达载体，并在原核表达系统中得到有效表达。 【关键词】 胸腺素原；白介素2；融合蛋白；表达abstract:objective to clone human prothymosin and interleukin2 fusion gene into the prokaryotic expression vector and to express the fusion protei

3、n effectively in e.coli system.methods the human prothymosin and interleukin2 gene were amplified by rtpcr from human leukemia cells and t lymphocytes respectively. the two genes were fused with a linker and the fusion gene fragment was used to construct a prokaryotic expression vector pet42api by d

4、na recombinant technique. after identification by restriction analysis and dna sequencing, the recombinant plasmid was transformed into e.coli rosetta. the overexpressed protein induced by iptg was purified by anion exchange chromatography and sephacryl s200 chromatography. the biological activity o

5、f the fusion protein was assayed using t cell erosette formation test of human blood. results the pcr product was about 750 bp in length, which was consistent with the expected size of the fusion gene. plasmid pet42api was transformed into rosetta and a new protein with a relative molecular weight o

6、f 28 kda was expressed. the purified fusion protein could increase the erosette formation rate of human peripheral mononuclear cells.conclusion the encoding sequence of human prothymosin and interleukin2 fusion gene was successfully cloned into the prokaryotical expression vector pet42a and can be e

7、xpressed effectively in e.coli system.key words:prothymosin ; interleukin 2; fusion protein; expression人源胸腺素原(prothymosin，prot)是由109个氨基酸组成的一种小分子酸性蛋白。它具有多种不同的生物学活性，主要是促进细胞增殖和具有免疫调节剂的作用1-3。胸腺素原作为细胞外信号蛋白，对细胞凋亡起调节作用，在细胞凋亡抑制剂的协同下可预防脑部中风4。skopeliti等5在外周血单核细胞的培养过程中加入prot，培养液中检测到il1及其受体、hsp90等多种蛋白的过度表达，而产生的

8、il1可激活t细胞受体而促进t细胞增殖和il2的产生。人白细胞介素2 (interleukin2, il2) 是由133个氨基酸组成的多肽。burchill6等人研究发现il2和il2r(il2受体)主要是调整t细胞生长和维持t细胞的稳定。il2可缩短脑脊髓炎自身免疫过程并增强荷瘤鼠的免疫调节作用，对因移植性或化学方法诱发的肿瘤产生治疗效果7。il2还能提高nk细胞（自然杀伤细胞）和lak细胞（淋巴因子激活的杀伤细胞）的活性，可以用于治疗癌症，但是过度使用il2会带来不良反应。il2和 prot协同作用于自体肿瘤的反应比单独使用il2所引起的反应要强8,9。il2和prot的联合使用不仅能降低

9、单独使用il2产生的毒副作用，而且还能够提高抗肿瘤的效果8,10。因此，本研究将il2和prot进行融合，并引入柔性连接肽linker，构建了prot/il2融合蛋白的原核表达载体pet42api，并在大肠杆菌系统中得到了有效表达，为进一步研究该融合蛋白的功能奠定基础。 1 材料与方法1.1 材料 菌种rosetta(de3)、载体pet42a由本实验室保存。rna提取试剂盒：qiagen公司，rtpcr试剂盒、限制性内切酶nde i和xho i、t4dna连接酶、dna fragment quick purification/recover kit购自大连宝生物公司，hrp兔抗羊酶标二抗购自

10、sigma公司，人hl60白血病细胞购自中山大学，hitraptm q阴离子交换柱、sephacryl s200购自安玛西亚公司，其他试剂均是进口或国产的分析纯试剂。1.2 方法1.2.1 引物设计将白介素2融合于胸腺素原的羧基端，为保持两者的活性，在两者之间放入一段连接肽，连接肽的组成：sggggs。prot基因的克隆：上游引物：p1：5ccaggatcccatatgtca gacgcagccgtag3；下游引物：p2：5actaag cttttagtcatcctcgtcggtcttc3。il2基因的克隆：上游引物：p3：5gtcggatccatggcacct acttcaagttctaca

11、aagaa3；下游引物：p4：5ccaggctcgagttaagttagtgttgagatgatgc tttg3。prot/il2融合基因的克隆：上游引物：p5：5ttctttgtagaacttgaagtaggtgcagag ccaccgccacccgagtcatcctcgtcggtcttct3，下游引物：p6：5agaagaccgacgaggatgac tcgggtggcggtggctctgcacctacttcaagtt ctacaaagaa3。其中，引物p1和p4分别引入了限制性酶切位点nde i和xho i。1.2.2 目的基因的pcr扩增用引物p1和p2从人hl60白血病细胞中进行rt

12、pcr克隆出prot基因；用引物p3和p4从人t淋巴细胞中进行rtpcr克隆出il2基因；以il2 dna片段为模板，用引物p3和p5进行pcr，获得linkeril2；以protdna片段为模板，用引物p4和p6进行pcr，获得linkerprot；用linkeril2和linkerprotdna片段以 11混合作为模板，用引物 p1 和p6进行pcr，扩增出融合基因protlinkeril2 dna片段（pi）。每步pcr都包含相应的模板和上下游引物、tag聚合酶、dntps ，pcr仪设定的扩增条件：先在94 变性5 min ，再于94 1 min，58 1 min ，72 1 min

13、进行30个循环，最后于72 延伸10 min，pcr结束后，取1 l反应液进行10 g/l琼脂糖凝胶电泳检测pcr结果。pcr 产物用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后，dna回收试剂盒回收纯化。1.2.3 重组质粒pet42api的构建及鉴定用限制性内切酶nde i、xho i对经试剂盒纯化后的pcr产物和表达载体pet42a进行双酶切，酶切完毕，10 g/l琼脂糖凝胶电泳，切下胶中所需片段，以dna fragment quick purification/recover kit回收。酶切后的pcr产物与回收后的载体用t4dna连接酶连接。连接产物转化大肠杆菌rosseta，将重组菌rosseta/

14、pet42api涂布于含有35 g/ml氯霉素和100 g/ml 卡那霉素的lb琼脂平板，挑取阳性单克隆，置含相应抗生素的lb培养液的试管中37 振摇过夜，用碱裂解法小量制备质粒dna，获取的质粒分别用nde i和xho i单、双酶切，10 g/l琼脂糖凝胶电泳鉴定，质粒进行dna测序鉴定。1.2.4 融合蛋白的诱导表达 将鉴定正确的阳性克隆菌株rosseta/pet42api，接种到含有35 g/ml氯霉素和100 g/ml 卡那霉素的5 ml lb 培养基中，在37 以180 r/min 培养过夜，以150 比例接种至含相应抗生素的50 ml lb 中，在37 ，180 r/min 条件下

15、培养至a600 为0.40.5，用终浓度为1 mmol/l 的iptg 诱导蛋白表达。之后在同等条件下继续培养4 h。取适量菌液在4 条件下，5 000 r/min 条件下离心5 min，菌体沉淀用1 ml 细菌裂解液（50 mmol/l trishcl，ph=7.2，50 mmol/l nacl）重悬。重悬液用超声法破碎细胞，裂解菌体再在13 000 r/min 条件下离心5 min。分别取菌体裂解上清液（可溶蛋白部分）和沉淀重悬液（不可溶蛋白部分）各10 l，sdspage电泳分析蛋白表达情况。1.2.5 融合蛋白的纯化菌体经超声破碎后，4 ，13 000 r/ min，离心10 min，

16、取上清，用0.22 m低蛋白吸附的滤器过滤后上样。经阴离子交换柱粗纯（平衡缓冲液50 mmol/l trishcl，ph7.5，10 mmol/l nacl；洗脱缓冲液50 mmol/l trishcl，ph7.5，500 mmol/l nacl），洗脱峰再过sephacryl s200分子筛(20 mmol/l trishcl，150 mmol/l nacl，ph7.5)，收集洗脱峰并进行sdspage电泳分析。1.2.6 融合蛋白的western blot分析纯化后的融合蛋白样品，用sdspage分析，将凝胶上的蛋白转移至硝酸纤维素膜，30 v过夜。用封闭液含5%脱脂奶粉的tbst（20

17、mmol/l trishcl，ph7.5，500 mmol/l nacl，0.05% tween20）室温封闭1 h，tbst洗膜3次，每次10 min，加入羊抗il2单克隆抗体，室温孵育1 h。重复洗膜3次，加入辣根过氧化物酶标记的兔抗羊igg，室温作用1 h，再洗膜3次，加入dab显色液，室温静置，用蒸馏水终止反应。1.2.7 融合蛋白活性初步鉴定按常规方法用淋巴分离液分离健康人外周血单核细胞，1 %台盼蓝染色计数细胞。用含血清的培养液调整细胞数至2106个/ml。各取细胞液100 l入试管，分为生理盐水组及不同浓度的纯化蛋白组：110-7 、1 10-8、1 10-9mol/l 组，37

18、 水浴90 min；用生理盐水洗涤绵羊红细胞，将细胞数调整至2108个/ml；在每支试管中加入绵羊红细胞100 l，在4 放置23 h；涂片，染色，于高倍镜下计数200个淋巴细胞中形成玫瑰花结的细胞数(结合3个及3个以上绵羊红细胞)，计算玫瑰花形成细胞的百分数。 2 结 果2.1 pi基因的rtpcr结果及克隆载体的构建与鉴定 以特异性引物经pcr扩增后，pcr产物经1%的琼脂糖凝胶电泳分析，获得约750 bp大小的dna片段(如图1)，产物回收后进行xho i和nde i双酶切并连入原核表达载体pet42a中，形成重组表达质粒pet42api，转化大肠杆菌rosseta，挑取阳性克隆抽提质粒

19、，分别用xho i、nde i进行单、双酶切，酶切结果如图2，双酶切片断与预期片断大小一致，测序结果与预期序列一致。2.3 融合蛋白的表达 重组菌rosseta/ pet42api在1 mmol/l iptg 37 条件下诱导表达4 h，菌体经超声波破碎，sdspage电泳结果显示，在分子量为28 kda 处有蛋白过量表达，与预期的融合蛋白大小一致（如图3），且融合蛋白以可溶形式存在。 2. 4 融合蛋白的纯化 可溶性融合蛋白采用hitraptm q阴离子交换柱和sephacryl s200分子筛纯化（图4）后，洗脱峰经sdspage电泳分析，蛋白纯度可达95%以上（图5）。纯化的融合蛋白经w

20、estern blot分析，在杂交膜上出现了明显的单一条带，分子量约为28 kda（图6）。2.6 e玫瑰花结实验 将纯化的融合蛋白稀释成不同的浓度，分别加到人外周血单核细胞悬液中与绵羊红细胞一起温育，与对照相比，可以明显提高淋巴细胞玫瑰花结形成率，结果见表1。这表明大肠杆菌表达的融合蛋白具有一定的活性。表1 融合蛋白对人外周血单核细胞e玫瑰花结形成率的影响（略）3 讨 论 本实验使用的菌株为rosetta（de3）菌株，它是经过修饰后专用于带有大肠杆菌稀有密码子的原核蛋白表达的菌株。多数氨基酸有不止一个密码子，而不同的生物使用这61个密码子的偏爱性不同，对大肠杆菌密码子应用情况的分析表明,一

21、些密码子很少使用，尤其是arg密码子aga，agg，cgg，cga，ile密码子cua，gly密码子gga和pro密码子ccc很少被用到。prot /il2融合蛋白基因中共有13个稀有密码子，而且还有3个密码子连续出现，这会影响融合蛋白在大肠杆菌中的表达。事实证明，prot /il2融合基因在选用bl21作为宿主菌时，根本检测不到目的蛋白。基于这种情况，本实验从众多的宿主菌中挑选rosetta作为表达菌，获得了该融合蛋白的可溶性表达。rosetta菌株还能够由一种氯霉素抗性的、与pet相容的质粒提供aua，agg，aga，cua，ccc和gga的trna，所以这类菌株能够明显改善大肠杆菌中由于

22、稀有密码子造成的表达限制。在prot /il2融合蛋白基因构建中，为了使表达的两种细胞因子的空间构象尽量与天然产物相近，以保持其最大的生物学活性，本实验在引物中设计了6个亲水性和低电荷效应的氨基酸序列作为接头(4个gly、2个ser)，因为甘氨酸结构简单，对融合蛋白的立体构象影响较小。 综合以上，本实验成功地利用pcr方法扩增了人il2/prot融合基因，将其克隆到原核表达载体pet42a上，并转化大肠杆菌rosetta，通过iptg诱导成功表达并纯化获得了il2/prot融合蛋白。玫瑰花结实验表明，纯化后的融合蛋白具有一定的生物学活性。本研究为进一步研究该融合蛋白的生物学活性奠定了一定基础。

23、【参考文献】 1butera s t, pisell t l, limpakarnjanarat k, et al. production of a novel viral suppressive activity associated with resistance to infection among female sex workers exposed to hiv type 1 j. aids res hum retrovir, 2001,17(8):735-744.2chang t l, mosoian a, pine r, et al. a soluble factor secre

24、ted from cd8+ t lymphocytes inhibits human immunodeficiency virus type 1 replication through stat1 activationj. j virol, 2002,76(2):569-581. 3cocchi f, devico a l, garzinodemo a, et al. identification of rantes, mip1a and mip1b as the major hivsuppressive factors produced by cd8+ t cellsj. science,1

25、995,270(5243):18111815.4ueda h, fujita r, yoshida a, et al. identification of prothymosinalpha1, the necrosis apoptosis switch molecule in cortical neuronal culturesj.j cell biol,2007,176(6):853862.5skopeliti m, kratzer u, altenberend f, et al. proteomic exploitation on prothymosin alpha induced mon

26、onuclear cell activationj. proteomics, 2007,7(11):18141824.6burchill m a, yang j, vang k b, et al. interleukin2 receptor signaling in regulatory t cell development and homeostasisj. immunol lett,2007,114(1):18.7montero e, alonso l, perez r, et al. interleukin2 mastering regulation in cancer and auto

27、immunityj. ann ny acad sci, 2007,1107:239250.8voutsas i f, baxevanis c n, gritzapis a d, et al. synergy between interleukin2 and prothymosin alpha for the increased generation of cytotoxic t lymphocytes against autologous human carcinomasj.cancer immunol immunother,2000,49(8):449458.9eckert k, grunb

28、erg e, immenschuh p, et al. interleukin2 activated killer cell activity in colorectal tumor patients: evaluation of in vitro effects by prothymosin alpha1j. cancer res clin oncol, 1997,123(8):420-428.10lopezrodri j l, cordero o j, sarandeses c. interleukin2 killer cells: in vitro evaluation of combi

29、nation with prothymosin alphaj. lymphokine cytokine res, 1994,13(3):175-182.14-范文最新推荐- 班主任工作总结与反思班主任工作总结与反思班主任工作总结与反思 （中国大学网 .com）鲁迅先生曾经说过“教育根植于爱”，一位著名的外国教育家更是一针见血地指出“没有了爱就没有教育”说法，班主任必须懂得“欲致鱼者先通水，欲致鸟者先树木“的道理；同时班主任是班级管理工作的直接参与者，是学生在学习生活、心理健康、人生态度和价值观念的引导者，是帮助学校开展各项工作的协调者，所以，在实际的工作中班主任这一角色至关重要，这也决定了班主

30、任工作的千头万绪，班主任必须要有为才有位，班主任工作总结与反思。在过去一个学期的班主任班级管理工作中，我主要从下面几方面来着手： 一、工作篇 （一）、在班级管理上： 建设一个和谐上进的班级，需要全班学生的共同参与，其中，班干部的选拔尤为重要。俗话说：火车跑得快，全靠车头带。班干部正式这种角色的最好演绎，因此，建设一支高素质的班级领导核心也尤为重要。因此在班干部的培养上，我主要采取以下措施： 1、军训期间，多与学生交流，了解学生的兴趣爱好。在与新生的日常交往中，分析和了解他们的性格特征，对他们的沟通能力、办事效率等各个方面作出一个整体的评价，对积极认真、埋头肯干、热情奔放并具有一定组织能力、威信

31、度高的学生给予充分的重视，通过确立班级负责人的形式，把他们锻炼为首届的班委成员。在坚持民主推选与自荐的原则之下，挑选出一批积极上进，具有班级管理能力的班干队伍； 2、在开展班级管理工作时候，对班干部，班主任要采取“授人以鱼不如授人以渔”的方法。在实际的操作中，要理清“具体的指导和放手工作”的关系，在班级管理和班委成员共同分析和讨论班上的具体情况下，鼓励他们发挥创造性，放手在他们独立开展工作，把为同学们服务的理念植入他们的工作中。从取的效果来看，一支团结的班干队伍，在协助班主任开展日常的工作，促进良好的班风建设方面，其作用是很大的。同时，对班干部进行责任心的教育，班干队伍要树立起表率的先锋带头作

32、用教育等问题上，也是紧抓不放。 （二）、在学风建设上： 一个优秀的班集体，在学风建设上，也必须具有学习氛围浓厚，在成绩上有你追我赶的学习劲头，因此在学风建设上，主要从以下方面来加强： 1、积极配合学校，在班集体上大力开展信心教育活动，根据本班的具体实际，制定班级信心誓词，充分用课堂、班会和与学生谈心的时间，向学生进行信心教育的渗透，对学生进行赏识教育，多给学生鼓舞，多给学生自信，多给学生支持； 2、与各学科老师沟通联系和交流，了解学生的学习成绩，分析学生的各科存在的问题；加强对学生进行法上的指导，进行有针对性的辅导， 3、发动学生成立各科学习兴趣小组，实行互助式的学习。 （三）、在心理辅导上：

33、 一个健康的学生，除了在生理上的成熟结合健康外，心理素质的好坏也同样重要。对于有心理问题障碍的学生，心理辅导尤为需要。高中一年级，在面对一个全新的学习、生活环境，容易产生不适应的反抗心理，缺乏自信心、也回产生忧郁、甚至自卑，所以根据学生成长的过程，在心理辅导上主要从以下方面着手： 1、深入学生宿舍，多与学生交流，了解学生近期在学习、生活、心理上存在的问题；抓好生活习惯,培养学生自理能力、自立能力和高贵的修养，工作总结班主任工作总结与反思。在三个月内，全面掌握学生的性格特点和个性，并争取与他们每一位学生都谈过心； 2、加强与心理学老师的沟通，及时发现问题学生，以防范于未然； 3、在家校方面，多与

34、学生家长沟通，全面了解学生的成长经历； 4、开展形式多样的主题班会，教育学生学会感恩、惜时、养成良好的习惯和生活作风。 二、成绩与问题篇 以上就是我在前一个阶段在教学管理工作的一些做法。在上述做法的指导下，高一（8）班在班风建设和学风氛围上，都表现出一种积极上进的苗头： 学风建设上：在信心教育的影响下，我们班上的学生改变了自卑的学习心理，信心宣誓精神饱满、热情高涨；在两次段考里面，学生所取得的进步也是比较明显的，如何劲坡、李晓梅两位同学，在两次段考里面都取得90名以下的进步；在这两次段考中，共有64人次取得了不同程度的进步；数学、语文、生物、历史等科目的总体平均分有了进一步的提高；在课堂自习和

35、晚修上，绝大部分学生能够做到勤于学问，告别三闲，有一股“静、净、竞”的学习氛围。 班级管理上：班干队伍素质加强，责任心意识浓厚，班级体荣誉感强，团结作风好。特别是班长文启彬，陈佩琪等，他们在班级管理意识上十分负责，班上的黎远康、焦天志、陈志浩、黄燕秋等同学都到级组参加学生的管理工作；学生在军训期间、心理剧表演上，显示出团结意识，在学习上的互助意识强，如梁钻珊帮助学生莫文敬，使得他在第二次段考中前进了400多名，进入级组600名；在为患疾学生捐款时，我们班的爱心意识强，捐款数额为高中部班级前列。 在宿舍管理：d601和d602宿舍取得了星级宿舍，在宿舍学生基本形成了一种兄弟姐妹的和谐。学生独立生

36、活和自主解决的问题有了很大的进步，如朱婉婷、周永浩在宿舍内务，在老师的教育和同学的帮助下，有了很大的改善等。 虽然在班级管理上，取得一些成绩，但是仍然还有很多不足：如学生自主学习的气氛还不足；优秀班没有突破；学生在惜时教育上缺乏，迟到现象会时有发生，目标意识也不强等问题依然存在；在管理方面，还欠缺更加科学、民主；学生的知识能力层次不一，落后面大，在处理问题时还有一些急躁，对于学生的部分心理，还不能更好的掌握，关心、爱护学生还不能够全面到位等等。 三、反思篇 正所谓付出不一定有收获，但不付出就一定没有收获。尽管在这一阶段制定了详细的工作计划，但是在具体的班级管理过程中，在吸取班主任对班级管理的经

37、验和教训上，也有一些方法和管理的漏洞有待改善和加强，甚至是值得反思的。 （一）、班主任班级管理工作有待加强。 作为一个新班主任，在班级管理工作上，由于缺乏经验，在实际的管理过程中出现了各种不太适合新时期班主任对班级管理的一些方法和原则，因此班主任的管理工作在以下方面，是需要进一步完善： 1、班主任批评的艺术性。 2、管理工作的跟踪、反馈的及时性。 3、班级管理精致化水平有待加强。对宿舍管理上出现的问题就是上述原因所导致； 4、学生心理辅导的持久性。还没有真正做到与他们每一位学生都谈过心或者建立学生心理档案，做好个案的详细记录等等，这些都是在班级管理工作中的漏洞和不足。 （二）、班主任工作的反思

38、 1、管理上的原则性 2、管理过程中的民主性 3、注重班主任的工作和心得交流。著名的作曲家肖伯纳曾经说过“假如你手中有一只苹果，我的手中也有一只苹果，大家彼此交换，你我的手头上依然只有一个苹果；但是倘若你有一种思想，我有一种思想，大家彼此交换这种思想，那么每个人就有两种思想”。因此班主任队伍要从实现管理的优化，通过班主任工作心得的交流是必要的，这样可以做到举一反三，触类旁通，在解决同一问题的时候，集思广益，寻找问题的最好的解决方法和途径。 四、方向篇 为了更好提高自己的业务水平和班级管理艺术，进一步完善自我，在以后的工作过程中，我认为有以下几点是我应该要努力的方向。 1、树立正确的教育教学理念

39、，平等对待每一位学生。在班主任工作当中，始终坚持养成教育、惜时教育、信心教育、感恩教育为主题的系列培养学生的做法；同时多向有经验的教师请教教学上的问题和班主任管理工作具体操作流程，向优秀班级学习管理经验。 2、加强本学科的知识水平，扩大视野，在具体的教学过程中，努力做好“读好一本书、写好一笔字、说好一口话”。加强对中学生心理知识的学习力度，提高分析学生学习心理，人际交往心理等方面的能力。 3、向学生学习。做一个老师是要有耐心的，班级管理工作也要需要持久的付出，在班主任工作黔驴技穷的时候，学生的所提出的民主化管理的方法，是非常值得借鉴的，如果班主任工作能够吸取和采纳部分有建设性的建议，学生与班主

40、任的距离将进一步拉近，学生敢于也乐于和班主任接近。 学高为师，德高为范，作为一名班主任，在日常行为应该以身作则，言传身教，这样学生才能亲其师，信其道，这也是新时期班主任的工作要求。在过去一个阶段的班主任工作中，由于管理知识水平的缺乏，经验生疏，在具体处理学生问题上有些不恰当的做法，因此在以后的工作实践中还需要不断探索和完善。短暂的从教经历让我真正体会到了为人师之苦，为人师之累，为人师之难，为人师之乐，它也让我对教师这一行业有了更新的认识和体会。班主任教学工作总结班主任教学工作总结班主任教学工作总结杨会娟光阴似箭，转眼之间，一个学期已接近尾声，班主任教学工作总结。班里的孩子懂事了很多，在一点一滴

41、地成长起来了。我作为他们的老师，内心感到很欣慰。现将一学期工作总结如下：班级管理方面一、抓住工作中的细节，切切实实地关爱孩子二年级的学生，虽然自理能力比一年级的孩子稍微好一点，但是对于一些细节，有些孩子还是容易忽略。需要教师给他们讲讲该怎样做，需要注意些什么，需要把生活中的一点一滴都落到实处，让学生养成良好的习惯。为了让孩子搞好个人卫生，每天我让上下铺的学生互相监督对方，看看是不是打香皂洗脸、洗脚，两天换一次袜子。对于个别孩子自理能力差，我告诉他们方法。例如，穿衣服时，先穿上衣，再穿下衣，脱衣服时，先脱下衣，再脱上衣。每次换衣服时，给她们讲需要注意的问题，如果不知道穿什么衣服，告诉老师，老师帮

42、助他。天气变冷时，对于孩子的穿衣情况，除了看一看，还用手摸一摸，提醒没有拉上拉链的孩子。除了洗刷穿衣，还随时关注孩子的身体情况。在量体温后，发现孩子有异常，就打电话通知家长，或者带着去校医室看病。每天早中晚饭之后，总是提醒孩子吃药。每节下课提醒他们喝水，泡上板蓝根。每天做着这些平凡而又琐碎的工作，因为我们的工作对象是天真纯洁的孩子，他们需要我们的呵护，需要我们给予他们更多的爱。当然，由于付出，也得到了回报，通过和家长交谈，家长感到老师对孩子的关爱。二、加强学生的思想品德教育作为班主任，要对学生进行思想品德教育，是他们的身心得到全面健康的教育。对于二年级的孩子来说，正是各方面接受教育的最佳时机。

43、除了学习，我想更为重要的是教会他们认识世界，明辨是非，学习怎样做人。针对班上孩子不能主动承认错误，爱找理由为自己辩解的情况。我首先教育他们，要勇于承认自己的错误，爱找理由为自己辩解的情况。我首先教育他们，有勇于承认自己的错误，发现自身的问题，不要报告别人。只要你改正错误，还是好孩子，老师像以前一样喜欢你。每次周末回家，我注重培养孩子对家长的感恩之情，把养成教育落到实处。我给孩子们讲，你们在学校表现这么棒，在家里也要把自己优秀的一面展示出来。每个孩子都很清楚父母对自己的付出，那么我们能做些什么来回报父母呢?由于做好了学生的思想工作，因此，布置的养成作业本，给父母洗脚、捶背，帮父母洗碗，学习整理房

44、间，给父母擦护肤霜，并比较父母的手和自己手的不同，以此写一则日记，学生完成的都很好，工作总结班主任教学工作总结。通过日记，家长也感受到孩子懂得理解，关心父母了，真的长大了，懂事了。三、培养得力的班干部队伍班干部是班级的核心，是班级的骨干力量，要建设一个良好的班集体，首先要建立一直责任心强，能力强的班干部队伍。最大限度放手，让他们参与班级管理，班主任只要适时引导就行了。如寝室长，我挑选那些纪律性不强的孩子，让他们当寝室长，并告诉他们，要想让同学们真正听你的，要想树立你的威信，就要做个表率，起到模范带头的作用，寝室的学生也会监督您。这样，原来调皮捣蛋的孩子，也能遵守纪律，能约束自己的行为。对于班级

45、卫生，我让劳动委员细化分工、层层治理、责任到人。如擦窗台、整理讲桌、拖地、倒垃圾、关灯开灯、开窗通风，都分工到人。这样，如果哪一项没有做好，劳动委员总结班级情况时，就要提出批评。当然，干得好的就会被表扬。由于班干部充分发挥作用，我班的寝室纪律、教室卫生都有所转变。四、培养学生良好的习惯对低年级的学生来说，养成良好的习惯至关重要。我先从坐姿、握笔的姿势、课前准备、课堂发言等看似细细碎碎的小习惯抓起，教育学生不能随手乱丢垃圾，要保持自己课桌的整洁，要爱护公物。在学习上，要有学习的积极性，要认真听讲，写作业要字迹端正、干净整洁，不拖拉作业。文明习惯方面，说话要有礼貌，见人要问好，学会尊重他人。还要狠

46、抓安全教育，告诉学生上下楼梯靠右走，一个台阶一个台阶走。教育学生活动时不追逐打闹，以免出现安全事故。还给孩子讲，周四回家，在教室等，家长接。教育学生过马路时，要看清车辆才走，把不安定因素消灭在萌芽状态。五、家校沟通，携手共进学生的教育离不开老师和家长的共同协作，因此，经常和家长取得联系，才能更好的教育好学生。我充分利用校信通这一平台，将每周回家布置的展示作业和养成作业，以及提醒学生要带的东西，都以短信的形式告诉家长，让家长做到心中有数，可以督促孩子更好地完成作业，也让家长为孩子准备好需要带的物品。另外，对于学生的学习情况及表现，哪些方面有进步，哪些方面还有不足，对于学习积极性欠缺的孩子，我都会

47、打电话及时和家长沟通，让家长全面真实地了解孩子的在校情况，通过"家校联系卡"反馈过来的意见，在接下来的工作中会对症下药，多关注那些某方面表现欠佳的孩子，使其改掉缺点。教学方面：一、扎实抓好识字教学二年级是识字写字教学阶段，本学期要认450个生字，会写350个生字。因此，我采用了多种方法帮助学生识字。例如卡片识字、猜谜识字、拆分法、加一加、减一减，还注重形近字、同音字，这样，极大地调动了学生识字的积极性。比如"幸"和"辛"，虽然不断强调、更正，但是学生还是容易弄混，我就让学生思考，采用什么方法会牢牢记住。有同学编字谜识记"幸&

48、quot;：一只少尾巴的羊在土堆上吃草，识记"幸"：十个人立在那儿很辛苦。这样，学生就记得很清楚。因此，鼓励学生从不同角度去思考，去识记，可以激起学生学习的兴趣，也让学生在快乐中识字，达到了良好的效果。二、做好期末复习工作我采用两条线复习，一条线重点复习课本、课后习题、语文园地里的练习题，另一条线分块复习，复习拼音、词语、句子阅读、作文，复习时做到讲练结合，即讲方法，又精选一些习题，这样，既巩固课本上的基础知识，又让学生掌握做一些做题的技巧和方法。总之，本学期以来，对工作做到了脚踏实地、尽职尽责。我体会到只要专心地爱孩子们，为孩子真诚地付出，必将获得孩子们的爱和尊重，班集体

49、在爱的滋润下才会散发活力。但是，又因自身能力有限，也存在着一些不足：1、个别学生的不良学习习惯还有待进一步改善。2、对待学生学法的指导，还有待进一步提高。3、对待班上的后进生，还需要探寻更有效的方法，多下功夫，使他们的学习有所进步。今后的打算：1、健全班干部的管理，继续培养一批能干的班干部队伍，激起学生的潜能.2继续做好培优补差工作，帮助学困生，用爱温暖他们，提高他们。3、始终把养成教育放在首位，重点抓好孝顺与感恩的教育。4、让学生多看书，注重积累，注重运用，逐步提高自己的写作水平。（中国大学网）班主任工作总结的六个切入点班主任工作总结的六个切入点原文地址：班主任工作总结的六个切入点作者：柳岸

50、钓客总结是班级管理过程的终结环节，也是班主任必做的一项重要工作，班主任工作总结的六个切入点。学期和学年末工作总结的质量，直接反映着班主任的管理水平。实践表明班主任的工作总结写哪些内容是一个方面，但关键是要找准切人点。班主任总结工作应从如下六个方面切入。一、从检查计划的实效入手工作总结实际上是对工作计划的检查。班主任总结工作就是为了检查计划的完成情况，对进展的幅度、取得的成绩、存在的问题，进行全面的回顾、说明和评价。因此，在总结工作之前，班主任应带领全班同学，对照计划中的各项指标，逐一进行回顾，看看当初确定的任务是否完成，采用的方法究竟效果如何，哪些指标已经达到了，哪些工作接近指标，哪些工作的指

51、标还未达到。对照计划进行总结，符合学生认识发展的规律，是防止计划落空，客观总结工作的最有效的手段。只有对计划落实情况逐项对照检查，才能看到班级的成绩和进步的幅度，学生才会找到自己的位置，感到有信心、有希望。一般地说，当班级工作的成绩与计划中目标完全一致或基本一致时，总结会对全班学生产生很大的激励作用。二、从总结工作经验入手班主任工作总结要想避免空泛，对今后的工作起到启发作用，必须十分重视对工作经验的总结。事实上，任何班级管理的经验，在尚未进行总结时，仅仅是属于感性认识的范畴，带有很大的尝试性、局限性和盲目性。只有通过总结，使之上升到理性认识的高度时，才具有经验的价值。比如抓学生日常行为规范的养

52、成教育，一学年(或几学年)下来，经过日日抓、月月抓、校内抓、校外抓、点滴抓、反复抓，最终取得了人人懂规范、人人守规范的效果，学校领导满意，学生家长放心。那么班主任总结这项工作时，是总结表现在外面的教育活动与形式，还是通过林林总总的教育活动及形式，揭示其本质呢?显然应该是后者。因为，表面化的东西没有经验价值，既不能传达给他人，也不能鞭策自己在此基础上继续深入地抓下去。反映现象性的东西是学生的事儿，班主任的作用就在于透过现象，抓住最根本的工作经验。可以说，有无经验是班主任工作总结质量高低的基本标志。三、从查找问题和不足入手总结工作必须坚持两分法的原则，既要看到成绩，又要发现问题，找到不足，这是班主

53、任总结工作的最可贵的一点。查摆问题首先要求班主任端正思想，敢于触及工作中的矛盾，勇于承担责任。一般来说，班级工作中暴露出的问题，很大程度上与班主任的工作作风、工作方法有关，有些可以说就是工作中的失误，工作总结班主任工作总结的六个切入点。退一步说，即便是发生在学生身上的问题，班主任也负有教育的责任。其次，要善于分析造成矛盾、出现问题的原因。这个分析必须是客观的、实事求是的、多角度的和令人信服的，掺不得半点主观的色彩。须知，学生对班主任关于问题的分析，是非常敏感的。再次，要区别主次。班主任的总结不要大小问题一块写，而应对问题进行排队，选择最具典型性的、大家普遍公认的、有说服力的主要问题来写，对次要

54、的、涉及面不大的问题则一笔带过。即使是比较严重的问题，总结时也不要使用恫吓、渲染、夸张的措词，而要让学生通过一些现象的分析，自己去体会问题带来的危害。这样，师生才能对问题形成共识。四、从为今后工作提供依据入手总结具有承前启后的功能，这一点往往被一些班主任所忽视。班主任的工作总结不仅意味着回顾过去，更重要的是为了指导未来。一项工作不论班主任完成的效果如何，都从某种意义上暗示着此项工作在今后完成的难易程度。完成得很好的工作，由于总结出了经验，今后做起来就会显得轻松自如；完成得不好的工作，如果及时找到教训所在，今后做起来也会减少一些困难。因此，班主任的，总结要对事关全局的重点工作进行典型剖析，不仅要

55、写出反映全貌的工作内容，而且要写出具有典型指导意义的工作方法，可采用夹叙夹议的形式，让数字和实例说话。重要部分要不惜笔墨，重彩浓抹，目的不仅仅是为了追求写法上的翔实、具体，更重要的是为今后的工作服务，至少可以归纳出一条可*而有效的思路。五、从发现"规律性的东西"入手工作总结中的经验和教训，都是班主任带领全班学生运用智慧和力量、在改造客观世界时主观的体会和收获。从实践论的观点看，班主任进行工作总结是对实际工作由感性到理性的再认识过程，是取得正确教育思想、班级管理经验以利于作出正确决策的必要手段，也是班主任工作总结的根本目的，通俗一点说，就是要通过总结发现一点"规律性

56、的东西"。在班级管理中，究竟有多少属于班级管理内在的、本质的东西?这是个很少有人思考的问题。比如，开展家庭教育，每学期都进行，方法不外乎家访、召开家长会、办家长学校、建立家校联系手册，但是这些方法在运用中分别能产生多大的效力?各有什么利弊?对什么样的学生采用什么方法最适宜?等等，都被班主任有意无意地忽视了，以至于出现了规律就在眼前却四处喊找不到规律的怪现象，这一点一定要引起广大班主任的重视。当然，任意夸大"规律性的东西"(随便抓个结论便当作"规律性的东西")的倾向，也是班主任在总结工作时应该防止的。六、从自下而上的全面总结入手对班级工作进行总结

57、的过程，实际是班主任与学生结合的过程，即使是小学一年级学生，也应该以小主人的身份参与到总结过程之中，而不应当让他们仅仅作为被总结的对象出现。班主任可以根据学生总结归纳事物能力的强弱，有步骤地组织他们进行总结，其基本程序是自下而上地进行。对低年级学生可开展"说说自己的优缺点"、"和同桌、邻座比一比"的活动，哪怕是点滴成绩和不足，只要是学生自己总结出的，也是非常可贵的。对于高年级学生，应让他们自己总结。首先，由班主任提出要求，拟定提纲，由学生个人进行总结，然后在小组会上交流，形成小组的总结，再由小组长在班委会上交流，形成全班的总结。总结的形成过程还要征求任课教师的意见，经过上下结合反复讨论之后由班主任召集班会，进行全面总结。这样形成的总结，有较强的群众基础，不仅能够有效地防止和克服班主任一统天下个人说了算的主