小分子蛋白电泳技术分享

1、1-lOkD的肽类用的 PH 8. 25) Tricine SDS-PAGE 实用方案 Tricine-SDS-PAGE是用丁分离分子虽:在 一、试剂配配制： 1 Low Bis acrylamide ( 49. 5% T, 3% C ) Acylamide 48. Og Bis 1. 5g Water make up to 100ml 2. High Bis acrylamide (49. 5% T, 6% C) Acrylamide 46 5g Bis 3. Og Water make up tolOOml 3. Gel Buffer (3M Tris/cl, PH8.45, 0. 3%

2、SDS) SDS 0. 3g Tris 36. 4g Water make up to 100ml PH to Spacer gel 配 lml,加 0. 7ml; Stacking gel 配 1. 25ml.灌胶前临时 加10%AP (过硫酸钱)和TEMED. 胶配制的通用配方: 16. 5 o T . C separating gel (ml) 30 6 8 10 49. 5%T6 】jC 10 2 2. 6667 3. 3333 Gel buffer 10 2 2. 6667 33333 p0% Glycerol 6.4 1.28 1. 7067 2.1333 DTV(d is til

3、led 3.6 072 0. 96 L2 10% AP OJ 0. 02 0. 0267 04333 TEMED 0. 01 0. 002 0. 0027 0. 0033 5 1 13333 1.6667 斗 9.5% T 3% C 1.05 0.21 0.28 035 Gel buffer 1.65 033 044 055 DTW 2.3 0.46 0.6133 0.7667 10% AP 0.0165 0.0033 0.0044 0.0055 TEMED 0.00165 0.0003 0.0004 0.0006 斗 T 3% C Stacking gel (ml) 6.2S 1.25 16

4、667 2.0833 49.5% T3%C 0.5 0.1 0.1333 0.1667 Gel buffer 1.55 031 0.4133 05167 DTW 4.2 0.84 1 12 1.4 10% AP 0.05 0.01 0.0133 0,0167 TEMED 0.005 0.001 0.0013 0.0017 V bbl QQ. conf 三10臨盪隔Spacer gel (ml) 1用Bio-Rad mini电泳装昼进行电泳.30V电泳lhr, 100V至电泳结束 2.固定，染色及脱色：小分子虽肽类在SDS-PAGE胶中容易扩散，因此电泳结束后，有时需要固定20min （固定液：

5、0.5%戊二醛，30%乙醇），再进行染色 20-30min （染色液：50$甲醇，10%乙醇，0. 2% G-250），在脱色液（45%甲醇，10%冰醋酸）脱色20-30min;脱色完毕，把胶放在水中或10%甘油中 四.电泳示例照片 小分子该选择用trie in e-SDS-PAGE. protocol上写着 the com mon role of glycerol in SDS gels is to in crease the den sity of soluti ons and to facilitate gel casting; it has no obious effect on pr

6、otein separation I tried 25% Tricine gel for 3KD peptide, looks good Good Luck! 哦，我自己经常做2x多的分子，用的是15%的gel,效果很好的。lxKD的用 16%的PAGE就应该可以了。 你可以试一试Tricine-SDS-PAGE, 16%的分离胶，6%的浓缩胶。 分离胶单体母液：46. 5g丙烯酰胺+3g双叉丙烯酰胺，双蒸水溶解定容到100ml 凝胶浓度49. 5%,交联度6% 浓缩胶单体母液：48g丙烯酰胺+l5g双叉丙烯酰胺，双蒸水溶解定容到100ml 凝胶浓度49. 5%,交联度3% 配方: 分离胶 母液3. 3ml+凝胶缓冲液3. 3ml+30%甘油2. 4ml+双蒸水 1.0ml+10%AP45 卩 I+TEMED4.5 卩 1 浓缩胶 母液0. 3ml+凝胶缓冲液0. 93ml+双蒸水 1.27ml+10%AP25 卩 I+TEMED2. 5 卩 1 分离范围1100KD,最佳分离范围270KD 初始电压30,等样品进入分离胶电压升至80,最终电压可