排石颗粒中总黄酮的含量测定

1、实训二十二、实训目的：1. 掌握紫外 -可见分光光度法（标准曲线法）含量测定的一般操作步骤和技2. 理解标准曲线法含量测定的原理。3. 了解本测定法的设计思路。二、检验依据1. 排石颗粒药品标准 中国药典 2005 年版（一部）正文部分 594页【处方】连钱草车前子（盐炒）关木通徐长卿石韦瞿麦忍冬藤滑石苘麻子 甘草【含量测定】对照品溶液的制备精密称取经120C干燥至恒重的芦丁对照品20mg,置 100ml 量瓶中，加 50甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至刻度 ,摇匀,即得（每 1ml 含无水芦丁 0.2mg）。标准曲线的制备精密量取对照品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.

2、0ml， 分别置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇 匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠 试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外 -分光光 度法（附录V A）,在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为 横坐标，绘制标准曲线。测定法取本品装量差异项下的内容物，研细，取5g或1g（无糖型），精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇100ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量

3、取 2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇 至刻度，摇匀，作为空白对照。另精密量取2ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自 加50%甲醇至5ml”起，依法立即测定吸光度，从标准曲 线上读出供试品溶液中无水芦丁的量，计算，即得。本品每袋含总黄酮以无水 xx（C27H30O16）计，不得少于 0.12g。2紫外-可见分光光度法中国药典2005年版（一部）附录V A三、检验 原理本实验以无水芦丁为对照品，通过配制成不同浓度的系列溶液，加5%亚硝酸钠溶液和 10%硝酸铝溶液，再加氢氧化钠试液显色，以相应的溶液为空白， 照紫外-分光光度法（中国药典附录V A）测定吸光度，以吸光度为纵坐 标

4、，浓度为横坐标，绘制标准曲线。将供试品依法处理，测定吸光度，从标准 曲线上读出供试品溶液中以芦丁计总黄酮的浓度，并计算出排石颗粒中总黄酮 的含量。四、仪器与试剂紫外分光光度计、石英吸收池、量瓶（10ml、100ml、500ml）、吸量管（1ml、5ml）、干燥箱、分析天平（感量 0.0001g）、具塞锥形瓶、滤纸等。甲醇、芦丁对照品、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、排石颗粒等五、实训内容与步骤：1对照品溶液制备在100ml量瓶中，用分析天平（感量 0.0001g）精密称取 经120C干燥至恒重的芦丁对照品20mg,称量范围0.01950.0205g,加50% 甲醇适量，超声处理使溶解，放冷，用 5

5、0%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml 含无水芦丁 0.1950.205mg） 。2. 标准曲线的制备用用移液管精密量取对照品溶液1.0ml、 2.0ml、 3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，用用移液管加 5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟；加10%硝酸铝溶液0.3ml,摇 匀，放置6分钟；加氢氧化钠试液4ml，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应 的溶液为空白。照紫外-分光光度法（中国药典附录V A）,在510nm的波 长处测定吸光度 ,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,并计算回 归方程A二a+bC和相关系数r。3. 供

6、试品溶液制备取本品装量差异项下的内容物，研钵研细，取5g或1g（无糖型），用分析天平（感量0.0001g）精密称定，称量范围4.50005.4000g,或 0.60001.4000g（无糖型），置锥形瓶中，用移液管精密加入甲醇100ml，用分析天平（感量0.0001g）称定重量（保留四位有效数字），超声处理 20分钟，溶 解,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,弃去初滤液,收集续滤液，得样品溶液。用移液管精密量取样品溶液 25ml，置50ml量瓶中， 加水至刻度，摇匀，用移液管精密量取 2ml,置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻 度,摇匀,作为空白对照液。另用移液管精密量取上述

7、样品溶液 2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至 5ml，用移液管加5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀，放置6分钟；加10%硝酸铝 溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟；加氢氧化钠试液4ml，再加50%甲醇至刻度， 摇匀,即得供试品溶液。4. 上机测定立即将空白对照液和供试品溶液置紫外分光光度计中,在 510nm 波长处测定吸光度（ A供） ,记录测量数据。5. 含量计算（ 1 ）将回归方程转变成下列浓度计算公式,再将 A供代入即可计算出供试品溶液中以芦丁计总黄酮的浓度 C供（ mg/ml ）。C 供（mg/ml） = （A供 a） /b（2）按下式计算药品中总黄酮的含量（g/袋）含量（g/袋）二

8、【操作要点】 C供（g/ml） x 10-3稀释倍数x V样（ml） X平均装量（g/袋）W样（ g） xx 药典凡例精确度项下规定： 恒重，除另有规定外，系指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg 以下的重量；干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥 1 小时后进行；炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼30 分钟后进行。 实验中加亚硝酸钠溶液和硝酸铝溶液后要摇匀，并按规定时间充分放 置，否则反应不完全会影响测量结果。 由于供试品溶液显色后稳定性较差，故需立即上机测定。 其他操作要点参照本章紫外 -可见分光光度法中的 “注意事项 ”。六、结果判断将测定结果与药品标准规定比较，若在限度范围之内则判定符合规定。七、实训思考（ 1 ）实验中加入亚硝酸钠溶液、硝酸铝溶液和氢氧化钠溶液的目的是什么？（ 2）为什么在 510nm 的波长处测定吸光度？八、实训测试排石颗粒中总黄酮含量测定实训测试表（百分计） 测试指标测试内容及观测点着装检验写出检验依据的出处：依据1.根据药品标准什么规定判断本法为标准曲线法？ 相关知识 2.写出本法含量测定原理。先在以下括号内填写操作步骤的序号和名称，然后进 行实验。（）操作步骤（）及实 （）验（）（）（）（）（）结果描述清场分评价等级值 A B C D E1.00.70.