半边莲提取物的抑菌效果研究-本科毕业论文全文

1、学科分类号: 本科学生毕业论文题 目（中文）： 半边莲提取物的抑菌效果研究 （英文）：Study on the Bacteriostatic Effect of Extract fromLobelia Chinensis 姓 名 学 号 3 院 （系） 生命科学与化学工程系 专业、年级 生物工程 2009级 指导教师 2013年5月6日目录摘 要IAbstractII第1章 绪论11.1半边莲简介11.2半边莲中的有效活性成分11.3半边莲的药理作用11.4半边莲的研究现状21.5研究的目的与意义3第2章 实验材料与方法42.1实验材料42.1.1实验原材料42.1.2实验菌株42.1.3试剂

2、42.1.4实验仪器与设备42.2实验方法42.2.1 原材料的预处理42.2.2半边莲提取物的制备42.2.3培养基的配置52.2.4样品的处理52.2.5菌种活化与菌悬液母液制备52.2.6菌悬液浓度测定52.2.7滤纸圆片法测试62.2.8细菌最小抑菌浓度的测定(MIC)7第3章 实验结果与分析83.1菌悬液浓度的测定83.2半边莲提取物对六种菌的抑制作用93.3半边莲提取物最低抑菌浓度(MIC) 的确定10第4章 结论与讨论124.1结论124.2讨论12参考文献14附录16致谢17半边莲提取物的抑菌效果研究摘 要本实验主要采用了滤纸片法、试管两倍稀释法、平板划线分离法、平板菌落计数法

3、等方法对半边莲的抑菌效果进行了研究，研究结果表明半边莲提取物为1.0 g/mL时大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、青霉菌、酵母菌抑菌圈直径分别为21.3 mm、19.2 mm、16.4 mm、15.6 mm、12.5 mm、12.0 mm。根据最小抑菌浓度的测定可知半边莲提取物对大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌四种细菌的最小抑菌浓度分别为12.5 mg/mL、12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL。因此半边莲提取物对革兰氏阴性细菌的抑制效果要强于对革兰氏阳性细菌的抑制效果，对真菌的抑制效果最差。 【关键词】半边莲；黄酮；抑菌；提取 Study

4、on the Inhibitory Effect of Extract from Lobelia Chinensis AbstractFour main methods were adopted to examine the inhibitory effects of Lobelia Chinensis: Filter paper method, Two times dilution method, Streak plate method and Plate count method. Research results show that when extracting 1.0 g/mL of

5、 Lobelia Chinensis, the bacteriostatic diameter of Escherichia coli, Bacillus termo, Staphylococcus aureus, Bcillus subtilits, penicillium, and Saccharomyces cerevisiae is 21.3 mm, 19.2 mm, 16.4 mm, 15.6 mm, 12.5 mm, 12.0 mm respectively. According to the assessment of the minimal inhibitory concent

6、ration (MIC), the MIC of Lobelia Chinensis extract on Escherichia coli, Bacillus termo, Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis is 12.5 mg/mL, 12.5 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL respectively. Therefore, this experiment concludes that the extract of Lobelia Chinensis has stronger inhibitory effects o

7、n gram-negative bacteria than on gram-positive bacteria and has the weakest inhibitory effects on fungus.Keywords Lobelia chinensis alkaloid bacteriostasis extract第1章 绪论1.1半边莲简介半边莲(Lobelia chinensis Lour)为桔梗科多年生小草本植物，又名急解索、细米草、蛇舌草等。被子植物门，双子叶植物纲，菊目，桔梗科 ，半边莲属，半边莲。生于水田边、沟旁、路边等湿处。产于华东、华南、西南、中南各地。半边莲全草入药

8、，具备利尿消肿，清热解毒等功效，可用于治疗大腹水肿、面足浮肿、痈肿疔疮、蛇虫咬伤等。全草主要含生物碱，此外还有黄酮苷、皂苷、氨基酸、多糖等1-6。1.2半边莲中的有效活性成分半边莲中的有效成分主要有生物碱、黄酮类、皂苷、氨基酸等，此外还有琥珀酸钠、延胡索酸、对羟基苯甲酸钠和酚类等7-10。(1)生物碱：半边莲内主要含有的生物碱为山梗菜碱、山梗菜酮碱、山梗菜醇碱、异山梗菜酮碱。这些物质具有中枢兴奋剂作用。(2)黄酮类：含有芹菜素、木犀草素、香叶木素等，黄酮类化合物的生理活性广泛， 具有生物抗氧化性、消除自由基、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂降血压、降低血糖、抗癌、镇痛、免疫、抗炎作用、抗菌和对

9、消化性溃疡的保护作用等药用保健功能。(3)皂苷：具有镇咳祛痰平喘作用，还有抑菌功能。(4)琥珀酸钠：对热有较好的稳定性，溶解性能好，广泛用于方便面海鲜汤料、肉制品、酱油、海鲜类产品、调味品、腌制咸菜等(5)延胡索酸：用于制造聚酯树脂及多元醇，以及作为染料的媒染剂或是调味料。它是一种普遍的食物添加剂及膳食补充剂，且有时在饮料或发酵粉中作为酒石酸的代用物 (6)对羟基苯甲酸钠：广泛用于食品、化妆品、医药的防腐、防霉剂和杀菌剂等方面。1.3半边莲的药理作用(1)利尿利胆作用：正常大鼠灌服半边莲浸剂，以及正常人口服半边莲粉剂，均有显著而持久的利尿作用。尿量、氯化物排出量均显著增加。半边莲水煎醇提物犬静

10、脉注射有利胆作用，使胆汁流量增加两倍以上胆汁中固形物、胆酸盐、胆红素的浓度均下降11。(2)对神经系统的作用：半边莲碱对植物神经节、肾上腺髓质、延脑各中枢、神经肌肉接头以及颈动脉和主动脉体的化学感受器都有先兴奋后抑制作用，其作用与菸碱相似，但强度较弱。半边莲所含的琥珀酸与戊巴比妥钠合用有协同镇痛作用，并能镇静和降低体温。另有报道，半边莲碱可致吐，其原理既与延脑催吐化学感受区有关，亦有周围机制参与12,13。(3)呼吸兴奋作用：其水煎剂和生物碱能刺激颈动脉体化学感受器，反射的兴奋呼吸中枢。剂量过大则引起呼吸麻痹而死亡。半边莲碱吸入有扩张支气管的作用14。(4)抗蛇毒作用：小鼠注射最小致死量的眼镜

11、蛇蛇毒，在半小时前灌服半边莲制剂及其所含的琥珀酸钠、延胡索酸钠、对羟基苯甲酸钠，均有较高的保护作用。(5)抗溃疡作用：本品所含的琥珀酸，可对抗大鼠幽门结扎产生的胃溃疡，是由于抑制胃液分泌和扩张胃肌而呈抗溃疡作用。(6)轻泻作用：半边莲煎剂口服，有轻泄作用，并能抑制食欲15。(7)抑菌作用：体外试验，山梗菜煎剂对常见致病性真菌有明显的抑制作用。对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌亦有抑制作用。(8)凝血作用：腹腔注射给药可缩短小鼠断尾的出血时间。1.4半边莲的研究现状中药作为我国的传统医药，在应用上具有悠久的历史，在治疗因细菌而引起的感染类疾病中应用广泛，尤其是近年来中药复方制剂或提取物的应用进一步提高了

12、临床疗效。研究表明：清热解毒中药抑菌作用肯定并且对一些耐药菌有一定抑菌和降低耐药性作用，对一些局部感染、肠道疾病、呼吸道疾病均有较好的疗效中药复方制剂作用优于单味中药，尤其中药注射剂与抗生素合用可以提高临床疗效。并且中药还有天然无毒害、无残留、广谱抗菌、高效、成本低廉、技术依赖小等优势，这为中药在抗菌领域的全面推广奠定了基础。半边莲在我国分布广泛，资源丰富，同时，半边莲中存在许多生理活性物质，具有抗菌作用，这为开发植物源天然食品防腐剂，抑菌剂研究提供了宝贵资源。近年来，由于天然提取物的安全优势，从植物中提取活性物质是天然物质研究的热门课题。研究表明，不同性能的抗菌剂间适当配合，可增强抗菌作用，

13、这对于高效、广谱、无毒、天然食品防腐剂的寻找和筛选，对于农产品的深加工和促进食品工业的发展有着重要的科学意义和应用价值16,17。目前针对半边莲提取物对各种类微生物的抑制效果差异性方面的研究非常缺乏，主要集中在对它的药理方面、临床应用和其内物质的提取工艺的研究较多。如黄礼德18等人研究的半边莲不同提取物镇痛抗炎作用得出结论：半边莲具有一定的镇痛抗炎作用，其镇痛抗炎作用可能涉及中枢及外周神经系统，而生物碱类和黄酮类物质可能是半边莲提取物镇痛抗炎的药效部位。但对该药的具体作用机制不详，待进一步深入研究。林雪群19等人研究的半边莲生物碱对高血压鼠脑动脉血管重构的作用得出结论：半边莲生物碱可抑制高血压

14、鼠脑基底动脉ET-1蛋白及ET-1mRNA的表达，提示半边莲生物碱在预防和治疗高血压诱发的脑血管重构中有重要的作用。对半边莲内物质的提取工艺主要集中在对其内生物碱、黄酮苷和多糖的提取上。还有一些人对半边莲的化学成分展开了研究，如杨靖华20等人对半边莲的化学成分展开了较为全面的研究，通过对具体化学成分的分析了解了理论上的功能作用。这为对半边莲在某一方面的研究奠定了一定的基础。同时也有部分人员的研究涉及到了半边莲的抑菌效果，但几乎都是只涉及到半边莲提取物对细菌有抑制作用，而没有研究半边莲提取物对各种类型细菌的抑制效果差异21。1.5研究的目的与意义半边莲在我国是一种分布广泛，且容易采摘的中草药，具

15、有一定的药用价值，现今国内外对半边莲的研究较多，但大部分都是在围绕半边莲内所含物质的提取、鉴定及单一药理作用，而对其本身无需过度处理就能达到抑菌效果的特性研究较少，本实验就是针对这一现象，对半边莲进行较为简单的处理并以此来直接研究其对不同种类的细菌的抑制效果。本实验通过测得半边莲提取物对各种类细菌的最小抑菌浓度，以研究其对不同种类细菌的抑菌效果差异，从而总结出半边莲提取物对不同种类的细菌的抑菌优劣，以期在以后研究半边莲对新细菌的抑菌效果时提供一定的参考依据。第2章 实验材料与方法2.1实验材料2.1.1实验原材料新鲜全株半边莲，湖南科技学院校外采集，洗干净待用。2.1.2实验菌株金黄色葡萄球菌

16、、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌、青霉菌、酵母菌。青霉菌由选择培养基选择得到，其它菌由湖南科技学院生物实验室提供。2.1.3试剂牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、氢氧化钠、盐酸、硝酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁(MgSO47H2O)、氯化钾、硫酸亚铁、蔗糖等，均由湖南科技学院提供。2.1.4实验仪器与设备表2-1 实验主要仪器仪器名称仪器型号生产厂家电子分析天平AUY-120岛津国际贸易有限公司电热鼓风干燥箱WG-71天津市泰斯特仪器有限公司恒温光照培养箱MJX-250B-Z上海博迅实业有限公司无菌操作台ZHJH-1109上海制成分析仪器制造有限公司电热恒温水浴锅DK-98-1A天津市泰斯特仪器有限公

17、司自动型手提式灭菌锅YXQ-LS-18SI上海博迅实业有限公司其它实验仪器还有：实验电炉、酒精灯、玻璃棒、三角瓶、烧杯、吸管、移液管、吸耳球、试管、培养皿、漏斗、容量瓶、滤纸、打孔器、涂布棒、接种环、高精度pH试纸等。2.2实验方法2.2.1 原材料的预处理取一定量洗净的半边莲放入鼓风干燥箱，温度为50 ，干燥一段时间后取出，用剪刀将其剪碎，长度约为一厘米，留存待用。2.2.2半边莲提取物的制备称取经过预处理的干燥半边莲20 g，以蒸馏水作为溶剂，按照料液比1：50加入蒸馏水，用实验电炉在沸腾条件下加热，直至溶液蒸发至200 mL，过滤，滤液再用实验电炉加热蒸发，蒸发至20 mL时停止电炉加热

18、，改用水浴加热，温度为80 ，直至蒸发为膏状物，冷却，密封，至于冰箱内备用。 2.2.3培养基的配置蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL。将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值，使得pH值在7.27.4之间，加入琼脂，加热煮沸使琼脂溶化，分装于锥形瓶内，用棉花、牛皮纸包好用高压蒸汽灭菌锅加热至121 经20 min高压灭菌。营养肉汤培养基的配制：蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、氯化钠5 g、蒸馏水1000 mL。将各组分混合、溶解后调节pH至7.27.4之间，分装于锥形瓶内，121 高压灭菌20 min。察氏培养基的配

19、制：硝酸钠3 g，磷酸氢二钾1 g，硫酸镁(MgSO47H2O)0.5 g ，氯化钾0.5 g，硫酸亚铁0.01 g，蔗糖30 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL 。将各组分混合、溶解后调节pH至7.27.4，分装于各试管、烧瓶内，121 高压灭菌20 min。2.2.4样品的处理准确称取膏状物样品5.0 g，溶于以配置好的0.85 %的生理盐水中，边加热边搅拌，使样品完全溶解，再加入生理盐水到5 mL，配置成1 g/mL样品溶液，置于紫外灯下照射1小时灭菌后备用22。2.2.5菌种活化与菌悬液母液制备(1)五种供试菌株的制备：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌、酵母菌5种

20、供测试的菌种分别移接入相对应的培养基上平板培养，每种培养两皿。细菌置于37 恒温、95 %恒湿培养箱内培养，酵母菌置25 恒温培养箱中培养。每种菌取一皿供测试试用，另一皿置于0 4 冷藏备用。(2)青霉菌的制备：从发霉的橘子皮上挑取少量青色菌落在培养基上划线培养，待菌落长出来后选取符合青霉菌菌落特点的菌落再次接种入相应培养基培养，培养两皿。置于25 恒温培养箱培养。一皿供测试试用，另一皿置于0 4 冷藏备用。(3)菌悬液母液的制备:在无菌条件下，用接种环挑取活化后的菌体，放入装有5 mL无菌生理盐水的试管中，充分振荡摇匀，制成菌悬液母液。2.2.6菌悬液浓度测定(1)大肠杆菌、变形杆菌菌悬液测

21、定测定方法为平板菌落计数法编号：取无菌培养皿9套，分别用标签纸表明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5 mL无菌生理盐水的试管，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。稀释：用1 mL无菌移液管吸取1 mL，准确放0.5 mL以充分混匀的菌悬液母液(待测样品)，加入标有10-1字样的试管中，此为10倍稀释，移液管中多余的菌液放回原试管中。将10-1在手掌中震荡数下，使菌液充分混合。另取一支1 mL移液管插入10-1试管菌液中吸取1 mL，精确的放0.5 mL菌液于10-2试管中，此为100倍稀释，其余依此类推。取样：用3支1 mL的无菌移

22、液管分别吸取10-4、10-5和10-6稀释菌悬液各1mL，放入相应的无菌培养皿中间，每个培养皿放0.2 mL，移液管中多余的菌液放回原试管中。倒平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中倒入熔化后冷却至45 左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基约15 mL，置水平位置迅速旋动培养皿，使培养基与菌液混合均匀(旋动时不宜用力过度，否者会使培养基荡出培养皿或溅到培养皿盖上)。待培养基凝固后，将平板倒置于37 恒温培养箱中培养。计数：细菌培养24 h后取出培养培养皿，根据统计的菌落数，计算出同一稀释度3个培养皿上的菌落平均数，按下列公式进行计算： C=ab5C：每毫升样品中菌落形成单位数a：同一稀释度3次

23、重复的平均菌落数b：稀释倍数(2)金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、青霉菌、酵母菌菌悬液浓度测定测定方法为涂布平板计数法涂布平板计数法的基本操作与平板菌落计数法相似，不同之处在于涂布平板计数法是先将熔化培养基倒平板，待培养基凝固后编号，然后无菌移液管吸取以稀释好的菌液对号放在不同稀释度编号的平板上，每个平板只放0.1 mL，并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于实验台2030 min，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置于适宜温度的恒温培养箱中培养，枯草芽孢杆菌24 h后计数，金黄色葡萄球菌48 h后计数，青霉菌、酵母菌5天后计数。2.2.7滤纸圆片法测试取一定数量的定性滤纸，用打孔器将其

24、打成直径为10 mm的圆片，放入干燥的平皿中，于121 高压灭菌20 min，冷却放入样品溶液中浸泡30 min，在无菌操作台上沥去多余试液，用无菌镊子放在涂好菌液的培养基上。每皿呈“+”形对称放置四张圆片，每种菌平行做两个样。细菌置于37 恒温培养箱内培养1天以上；青霉菌及酵母菌于25 培养5天以上。培养结束后，用直尺测试培养基中抑菌圈的直径。2.2.8细菌最小抑菌浓度的测定(MIC)最小抑菌浓度(MIC)测定采用试管两倍稀释法测定。即在无菌操作台上取无菌试管8支，第1管加1.8 mL营养肉汤，第28管各加1 mL营养肉汤；以1 mL无菌移液管吸取已稀释好的药物1 mL，准确放0.2 mL药

25、液于第1支试管中，摇匀后用另一支移液管从1号试管吸取1 mL入第2管中，依次倍比稀释至第7管，混匀后自第7管弃去1 mL。此时，管中药液含量比依次为1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320、1/640，第8管不加药物为对照；各管均加入供试菌液0.1 mL ，混匀后置于37 恒温培养箱培养24 h。结果判定：肉汤清亮透明表示无细菌生长(-)，肉汤少量浑浊表示有少量细菌生长(+)，肉汤有部分浑浊或沉淀表示有部分细菌生长(+)，肉汤有大部分浑浊或大量沉淀表示细菌大量生长(+)，以能抑制细菌生长的提取物最高稀释度作为其最低抑菌浓度23,24。第3章 实验结果与分析3.1菌悬液浓度

26、的测定用平板菌落计数法和涂布平板计数法对六种菌悬液的浓度进行测定，结果见表3-1、表3-2、表3-3、表3-4、表3-5、表3-6。表3-1 大肠杆菌平板菌落计数结果记录(个)稀释度组数(菌落数)123平均110-4520688632613.3110-560695461110-68545.7表3-2 变形杆菌平板菌落计数结果记录(个)稀释度组数(菌落数)123平均110-3400424396406.7110-444353939.3110-56334由表3-1可知大肠杆菌菌悬液母液浓度约为3.0107 cfu/mL，将其稀释3104倍和3105倍后得到菌悬液浓度为1.0103 cfu/mL和1.

27、0102 cfu/mL的大肠杆菌菌悬液，留存备用。由表3-2可知变形杆菌菌悬液母液浓度约为2.0106 cfu/mL，将其稀释2.0103倍和2.0104倍后得到菌悬液浓度为1.0103 cfu/mL和1.0102 cfu/mL的变形杆菌菌悬液，留存备用。表3-3 金黄色葡萄球菌涂布平板计数记录(个)稀释度组数(菌落数)123平均110-4892800720804110-573858882110-651098表3-4 枯草芽孢杆菌涂布平板计数记录(个)稀释度组数(菌落数)123平均110-4800710760756.7110-565906774.7110-610677.7表3-5 青霉菌涂布平

28、板计数记录(个)稀释度组数(菌落数)123平均110-3920875850881.7110-4110808591.7110-581189表3-6 酵母菌涂布平板计数记录(个)稀释度组数(菌落数)123平均110-4525486500503.3110-555524450.3110-66645.3由表3-3可知金黄色葡萄球菌菌悬液母液浓度约为8.0107 cfu/mL，将其稀释8.0104倍和8.0105倍后得到菌悬液浓度为1.0103 cfu/mL和1.0102 cfu/mL的金黄色葡萄球菌菌悬液，留存备用。由表3-4可知枯草芽孢杆菌菌悬液母液浓度约为7.5107 cfu/mL，将其稀释7.51

29、04倍和7.5105倍后得到菌悬液浓度为1.0103 cfu/mL和1.0102 cfu/mL的金黄色葡萄球菌菌悬液，留存备用。由表3-5可知青霉菌菌悬液母液浓度约为9.0106 cfu/mL，将其稀释9.0103倍后得到菌悬液浓度为1.0103 cfu/mL的青霉菌菌悬液，留存备用。由表3-6可知酵母菌菌悬液母液浓度约为5.0106 cfu/mL，将其稀释5.0103倍后得到菌悬液浓度为1.0103 cfu/mL的酵母菌菌悬液，留存备用。3.2半边莲提取物对六种菌的抑制作用实验采用滤纸片法测得半边莲提取物对六种菌的抑制作用，将样品溶液配成2个浓度：1.0 g/mL，0.1 g/mL，菌悬液浓

30、度均1.0103 cfu/mL。测定抑菌圈的大小，比较抑菌效果。结果见表3-7。表3-7 半边莲提取物对各微生物的抑菌圈直径(mm)1.0 g/mL0.1 g/mL组号1212大肠杆菌21.021.619.119.4变形杆菌19.419.017.617.0金黄色葡萄球菌16.616.215.315.0枯草芽孢杆菌15.415.814.213.5青霉菌13.012.0-酵母菌12.0-注: “-”表示无抑菌圈出现。选取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌抑菌圈实物图见图3-1、图3-2。 图3-1 图3-2由表3-7可知，半边莲提取物溶液对6种供试菌均有一定的抑制作用，并且根据样品溶液浓度的不同抑制强度也有所

31、变化，提取物对大肠杆菌的抑制效果最好其次为变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌，对青霉菌和酵母菌的抑制效果最差，半边莲提取物溶液对各种菌的抑制效果强弱顺序为：大肠杆菌变形杆菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌青霉菌酵母菌。从菌的种类还可以看出半边莲提取物溶液对各种菌的抑制效果强弱顺序为：革兰氏阴性细菌革兰氏阳性细菌真菌。3.3半边莲提取物最低抑菌浓度(MIC) 的确定在该测试中采用二倍稀释法。稀释后样品溶液的浓度为：100 mg/mL，50 mg/mL，25 mg/mL，12.5 mg/mL，6.25 mg/mL，3.125 mg/mL，1.5625 mg/mL，0 mg/mL。菌悬液浓度采用1.0

32、102 cfu/mL的浓度。结果判定：肉汤清亮透明表示无细菌生长(-)，肉汤少量浑浊表示有少量细菌生长(+)，肉汤有部分浑浊或沉淀表示有部分细菌生长(+)，肉汤有大部分浑浊或大量沉淀表示细菌大量生长(+)，以能抑制细菌生长的提取物最高稀释度作为其最低抑菌浓度。结果见表3-8。选取大肠杆菌最小抑菌浓度实物图见附录图16。表3-8半边莲提取物对各细菌的抑菌效果供试细菌提取物浓度(mg/mL)100502512.56.253.1251.5630大肠杆菌-+变形杆菌-+金黄色葡萄球菌-+枯草芽孢杆菌-+根据表3-8的记录，得到半边莲提取物的最小抑菌浓度，见表3-9。表3-9 半边莲提取物对各细菌的最小

33、抑菌浓度菌种最小抑菌浓度(mg/mL)革兰氏阴性细菌大肠杆菌12.5变形杆菌12.5革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌25枯草芽孢杆菌50实验结果表明，样品溶液为100 mg/mL和50 mg/mL时各种测试菌株均不能生长，在25 mg/mL时只有枯草芽孢杆菌有少量生长，从而确定对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度是50 mg/mL。在12.5 mg/mL时金黄色葡萄球菌也开始生长，从而确定对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度是25 mg/mL。在6.25 mg/mL时大肠杆菌与变形杆菌均开始生长，从而确定对大肠杆菌与变形杆菌的最小抑菌浓度都是12.5 mg/mL。半边莲提取物对革兰氏阳性细菌的最小抑菌浓度平均为

34、12.5 mg/mL，对革兰氏阳性细菌的最小抑菌浓度平均为37.5 mg/mL，是革兰氏阴性细菌的3倍。第4章 结论与讨论4.1结论实验数据表明半边莲提取物对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、真菌均有一定的抑制作用，但是根据菌种的不同，抑菌效果有较明显的差异，根据滤纸片法测得的结果显示，在半边莲提取物为1.0 g/mL时大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、青霉菌、酵母菌抑菌圈直径分别为21.3 mm、19.2 mm、16.4 mm、15.6 mm、12.5 mm、12.0 mm。根据最小抑菌浓度的测定可知半边莲提取物对大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌四种细菌的最小抑

35、菌浓度分别为12.5 mg/mL、12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL。从而得出结论：半边莲提取物对各种类细菌、真菌的生长有抑制的作用，但对真菌的生长抑制作用有限，在高浓度时才有微弱的抑制生长效果。所以半边莲提取物在抑制真菌的生长药用领域的应用不用投入太多。半边莲提取物对细菌的生长抑制作用较强，特别是在对革兰氏阴性细菌生长的抑制效果方面表现出了明显的优势，今后如要继续研究半边莲提取物对细菌的抑制效果，应在革兰氏阴性细菌方面重点研究以充分发掘出半边莲在抑菌领域的优势。4.2讨论半边莲提取物中含有较多的生物碱和黄酮类化合物，而研究表明生物碱类及酮类化合物等具有较强的抗氧化或是抑

36、菌作用，因此推测半边莲提取物中真正发挥着抑菌作用的物质就是生物碱类和黄酮类化合物25。细菌与真菌在生物类型、细胞结构、细胞大小、增殖方式、生存环境等各方面有存在较大差异。特别是在细胞结构方面，和真菌都具有细胞结构，属于细胞型生物，在它们的细胞结构中都具有细胞壁、细胞膜、细胞质，但却存在诸多不同，具体表现在：一是细胞壁的成分不同：细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，而真菌细胞壁的主要成分是几丁质。二是细胞质中的细胞器组成不同：细菌只有核糖体一种细胞器；而真菌除具有核糖体外，还有内质网、高尔基体、线粒体、中心体等多种细胞器。三是细菌没有成形的细胞核，只有拟核；真菌具有。四是细菌没有染色体，其DNA分子单

37、独存在；真菌细胞核中的DNA与蛋白质结合在一起形成染色体。据谢鹏26等人的研究知道黄酮类物质主要是通过破坏细胞壁及细胞膜的完整性引发一系列反应，从而抑制微生物的生长的。因此推测细菌与真菌的细胞壁差异是导致抑菌结果不同的主要原因。革兰氏阴、阳性细菌在细胞壁方面也存在较大的差异，革兰氏阳性菌细胞壁较厚，约2080 nm。肽聚糖含量丰富，有1550层，此外，尚有大量特殊组份磷壁酸。革兰氏阴性菌细胞壁厚约10 nm，仅2-3层肽聚糖，另外还有脂多糖、细菌外膜和脂蛋白。因此推测出革兰氏阴、阳性细菌的细胞壁结构差异影响了抑菌效果。半边莲资源丰富，对半边莲的抑菌成分进行深层次分离，纯化、鉴定，并进一步开发成一种可综合应用的天然药物，是下一步有待开展的工作，也具有广阔的发展前景。参考文献1 国家药典委员会中华人民共和国药典M北京：化学工业出版社，2005：77-782 中华人民共和国卫生部药典委员会中华人民共和国药典M广州：广东科技出版社，北京：化学工业出版社，1995：95-953 江苏新医学院中药大辞典M上海：上海科学技术出版社，1995：780-7814 韩景兰，张凤岭，李志宏，等半边莲化学成分的研究J中国中药杂志，2009，34(17)