体内药物分析实验_0

1、最新资料推荐体内药物分析实验1. HPLC 法测定大鼠血浆中的山奈酚 1.1 目的要求 1. 掌握血 浆样品的前处理方法。2. 熟悉方法回收率和萃取回收率实验操作和评价。3. 熟悉大鼠眼眶采血技术； 熟悉方法学研究中其他评价内容。1.2 主要实验材料与仪器 山奈酚(Kaempferol ) 及其对照品， 黄芩素( baicalein )， 抗坏血酸， 肝素， - 葡萄糖醛酸苷酶 (-glucuronidase )和硫酸酯酶 ( sulfatase )，分析纯甲醇， 冰醋 酸、 无水乙醚， 色谱纯乙腈； 高效液相色谱仪， 氮吹装置， 恒 温水浴， 漩涡混合器， 13000r/min 台式离心机，

2、 不同规格移液枪 ( 5, 20, 50, 100, 200, 1000L ) 和容量瓶( 10， 25mL)， 510mL 具塞离心管若干； 雄性 SD 大鼠( 180220g)。1.3 实验原理 山奈酚吸收进入体 内后， 多以二相代谢物葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的形式存在。由于山奈酚葡萄糖醛酸苷和硫酸酯的对照品难以获得， 故采用加 入硫酸酯和葡醛酸苷水解酶处理样品， 使代谢物水解后测定苷元山 奈酚的浓度。实验以黄芩素为内标， HPLC 法测定血浆中山奈酚浓度， 对建 立的方法进行方法学评价。1.4 实验方法 1. 色谱条件：C18 柱(250mm4.6m，m 5m)， 配保护柱， 柱温 40；

3、乙腈 -0.5% 冰醋酸（35:65 ） 为流动相， 流速 1mL/min ； 检测波长 370nm； 进 样量 20L 。2. 溶液配制：取山奈酚对照品约 2.5mg ， 精密称定， 置 25mL 量瓶中， 用 甲醇溶解并定容。精密吸取适量， 分别用甲醇稀释成 0.3 、0.6 、 3、 6、 9、 20 和 30g/mL 的标准系列溶液， 置 4冰箱保存。另取黄芩素适量， 精密称定， 用甲醇溶解并定量稀释至 0.1mg/mL 的溶液， 精密吸取 1.5mL 置 10mL 量瓶中， 用甲醇定容， 得内标溶液， 置 4冰箱保存。3. 血浆样品处理：取大鼠血浆样品 120L， 加入甲醇 20L、

4、 1%冰醋酸（含 2mg/mL 抗坏血酸） 32L、 - 葡萄糖醛酸苷酶（ 20U/mL）和硫酸酯酶（ 6U/mL） 的混合水溶液 50L ， 37水浴温育 30min 后，加入内标溶液 50L ， 然后加无水乙醚 2mL， 漩涡混合 5min ， 于 12019r/min 离心 5min ； 取上清液在氮气流下挥干， 残留物用 100L 甲醇复溶， 12019r/min 离心 5min ， 取上清液进样分析。4. 专属性考察：取空白血浆、 添加山奈酚与内标的空白血浆、 血浆样品， 按 血浆样处理项下方法处理， 照色谱条件项下方法进样测定。比较所得色谱图， 考察血浆内源性物质是否干扰测定， 药物及 内标是否达到基线分离。最新资料推荐若有必要， 适当调整色谱条件， 已达到专属性要求。5. 标准曲线制备：精密吸取 120L 大鼠空白血浆 9 份， 分别加入 20L 不同浓度的标准系列溶液， 制得 0.0（空白）