唾液淀粉酶最适pH值的测定试验设计

1、唾液淀粉酶最适 pH 值的测定实 验设计生物化学实验考核设计方案唾液淀粉酶最适 pH 值的测定实验小组成员 : 刘倍材 何标才 揭春晓 李芮实验目的：1. 掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。2. 掌握唾液淀粉酶最适 PH的测定原理和方法。3. 熟悉影响酶促反应速度的因素。实验原理：1酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、 PH、激动 剂和抑制剂等。 上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度 的影响， 可用定性或定量的反应来观察。 利用碘与淀粉机器不同 程度纾解产物反应的颜色， 来衡量酶促反应的速度的快慢。 蓝色 紫红色黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。 此为定性观察。2

2、. 进一步利用郎伯比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液 的浓度符合一定的比例关系。 由于在被水解的程度也不一样。 当 唾液淀粉酶不能将完全水解时， 淀粉遇碘呈蓝色， 吸收波长位于 660nm处。不同 PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同， 吸光度值也不同。 因此， 通过测量 660nm处的吸光度值， 可以了 解 PH对酶促反应的影响， 吸光度最小的溶液其 PH即为唾液淀粉生物化学实验考核设计方案酶的最适 PH。实验步骤：1. 缓冲溶液的配制。 取 12 支试管进行编号 1-12 ，分别 按下表加入试剂。编号123456PH5.86.06.26.46.66.80.2mol/LNa2HPO4(ml

3、)0.400.620.931.331.882.450.2mol/LNaH2PO4(ml)4.604.384.073.673.122.55蒸馏水5.005.005.005.005.005.00编号789101112PH7.07.27.47.67.88.00.2mol/LNa2HPO4(ml)3.053.604.054.354.584.740.2mol/LNaH2PO4(ml)1.951.400.950.650.420.26蒸馏水5.005.005.005.005.005.002. 唾液的采集。先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉 , 让备取者下 嘴唇抵住干净的杯子口， 在备取者眼前放上一些

4、话梅， 这时， 备 取者的唾液会不停地流出来。生物化学实验考核设计方案3.唾液的稀释。取 10 支试管，进行编号 1-10 ,进行稀 释。编号12345678910唾液(ml)0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1蒸馏水 (ml)2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.04. 唾液稀释倍数的选取。另取 10 支试管，分别编上 A-K号，各取上述稀释的唾液各 1ml， 分别加入相应编号的试管里，向 10 支试管内同时加入 1ml 的 0.02 的淀粉溶液，振荡混匀后放入 37 C 恒温水浴 5分钟后取 出，滴加 23 碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中 的一支，记录稀释倍数。5. 最适 PH 的测定。另取 12支试管,进行编号 ,按下表加入试剂。进行测定编号1234567891011120.02 淀 粉溶液 (ml)1111111111113ml 缓冲溶 液 pH5.86.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.037 摄氏度水浴 10 分钟稀释唾液(ml)1111111111114生物化学实验考核设计方案37 摄氏度水浴 2 分钟 , 取出 , 分别加入 2-3 滴碘液 , 以蒸馏水作为对照管 , 用 660nm 波长测定吸光度A6606. 结果分析当在