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1、原发性肺癌中 DMBT1基因的表达 （一 ）作者：文海云，罗松古，李君，何建猷 【摘要】目的探讨原发性肺癌组织中 DMBT1基因表达水平与肺癌临床 和病理特征的关系。方法以逆转录 聚合酶链反应（ ）检测原 发性肺癌中 DMBT1基因的表达水平。结果 37 例原发性肺癌中 10 例 DMBT1表达正常 （27.03%,10/37），有 27例 DMBT1表达低下或完全无表 达（72.97%,27/37）;DMBT1的表达与原发性肺癌的病理类型、 TNM 分 期、吸烟史等均无明显相关 （P 0.05），但与肺癌组织分化程度及有无 淋巴结和 （或 ）远处转移有相关性（ P80.05(t=0.385)

2、 性别 1.000 女性 1293 男性 25187 肿瘤大小 (cm)5.0 1.45.1 1.8 0.05(t=0.269)肿瘤分类 0.460中心型 20164 周围型 17116 病理类型 1.000 非小细胞肺癌1.1.2 主要试剂异丙醇、氯仿和乙醇等均为国产分析纯， Trizolreagent 购自 GIBICO公司，逆转录试剂盒购自广州基因工程公司，实验试剂均用无菌去离子三蒸水配制1.1.3 引物引物设计参照文献，均由上海生物工程公司合成，包括5末端、 3末端和引物，见表 2。表 2 引物序列引物引物序列 5末端片段引物（ A/2AS ）末 端 片 段 引 物（ 4A/4AS ）

3、 引物3 （antisense）1.2 方法1.2.1RNA的抽提用 Trizol 抽提法提取肺组织 RNA，分光光度计测定其OD值，纯净 RNA的 OD260/OD280比值要 2.。0选择 cDNA上的两个位点（ 5末端、 3末端）进行 PCR扩 增，扩增片断分别为 233bp、746bp，内参（扩增片断为 415bp）被用来鉴定 cDNA的质量。未加模板的反应管被用来作为阴性对照， 以 排除污染。反应体系组成：Totalvolume25 ，lTemplateRNA3l， ，dNTPMix（10mMofeachdNTP）1 l，5.9 l ， RNaseInhibitor（optional）0.1 ，Primers（eachPrimer）1 。热循l环参数： 50逆转录 30min，95始变性15min，30 个主循环（94变性 1min，60退火 1min，72延伸 1min ），72终延伸 10min。1.2.3 电泳 产物在 1.5% 2.0%琼脂糖凝胶上电泳， EB 染色20

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