实验四 酶的特性实验

1、说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）写实验报告时， 可以只写需要做的实验内容 ！实验四 酶的特性实验、实验目的酶是生物催化剂， 生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。 通过本实验了解 酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、 PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的 影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。PH 对酶活力的影响、激活剂和抑制来说明酶的专一性。 淀粉和蔗糖无还原但不能催化蔗糖的水解。用班氏试二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、 剂对酶活力的影响 4 个小实验组成。（一）

2、酶的专一性1、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例， 性， 唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖， 剂检查糖的还原性。 班氏试剂为碱性硫酸铜， 能氧化具还原性的糖， 生成砖红色沉淀氧化亚 铜。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液（2）仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；（3）试剂：2% 蔗糖溶液； 溶于 0.3% NaCl 的 0.5%淀粉溶液； 班氏试剂。3、实验操作（1）稀释唾液的制备唾液的获取用一次性杯取一定量的饮用水， 漱口以清洁口腔， 然后在嘴中含 10-20ml 饮用水， 轻漱 2min 左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。不同稀

3、释度唾液的制备 （用大试管）本实验需制备 1：1、1：5、1：20、1：50、1：200 等五个不同浓度的稀释唾液。举例说明：1:5指的是稀释了 5倍的唾液，制备方法为 1份原液+4份蒸馏水。1: 20指的是稀释了 20倍的唾液，制备方法为 1份1： 5的稀释液+3分蒸馏水。（2 ）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）表1唾液淀粉酶稀释度的确定AvV 口吕号1 (1: 1)2 (1： 5)3 (1: 20)4 (1: 50)5 (1: 200)0.5%淀粉溶液（滴）44444稀释唾液（ml）1111137 C恒温水浴中保温 5分钟班氏试剂（ml）11111沸水

4、浴23分钟实验结果（2 ）淀粉酶的专一性表2淀粉酶专一性实验AvV 口吕号1234560.5%淀粉溶液（滴）4一4一4一2%蔗糖溶液（滴）一4一4一4最佳稀释度唾液（ml）一一11煮沸过的最佳稀释度唾液（ml）一一一一11蒸馏水（ml）11一一一一37 C恒温水浴中保温 5分钟班氏试剂（ml）111111沸水浴23分钟实验结果（二）温度对酶活力的影响1、实验原理酶的催化作用受温度的影响。 在最适温度下，酶的反应速度最高。 淀粉和可溶性淀粉遇 碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘 不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色， 在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可

5、由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。2、材料、仪器与试剂（1）材料：新鲜配制的唾液及其稀释液（2 ）仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；（3）试剂：溶于0.3% NaCI的0.5%淀粉溶液；KI - I2碘溶液;3、实验操作取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：表3温度对酶活力影响实验加样顺序AvV 口吕号1230.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）11煮沸过的稀释唾液（ml）1实验结果摇匀后，将1、3号试管放入37C恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、 3管均取出（将2号内液体分两半），用KI 12溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉 酶水

6、解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37C水浴中继续保温10分钟后，再用KI 12液实验，记录实验结果。（三）PH对酶活力的影响1、实验原理酶的活力受环境 PH值的影响极为显著。 不同酶的最适 PH不同。本实验观察 PH对唾 液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为6.8。2、材料、仪器与试剂（1 ）材料：新配制的 溶于0.3%NaCI的0.5%淀粉溶液（2 ）仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴（3）试剂：PH为5.0、5.8、6.8、8.0的缓冲溶液；KI I2碘溶液；PH试纸3、实验操作表4 PH对酶活性的影响实验PH55. 86. 88.0缓冲液（ml）3333

7、0.5%淀粉溶液（ml）1111向第一个试管加入稀释唾液后，置于37C的恒温水浴；等待 1min后向第二个试管加入稀释唾液，置于37C的恒温水浴；依次类推！最佳稀释度的唾液（ml）1111检查淀粉水解程度待向第四只试管加入唾液 2min后，每隔1分钟从第3管中取出1滴反应液于白瓷板上，力口碘液检查反应进行情况，直至反应液变为淡棕黄色（颜色有点淡即可）。即可从第一只试管依次添加碘液，时间间隔也为1min。碘液（滴）12121212现象为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明:各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加0.5%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液 1ml。

8、向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为 1分钟。将各试管 中物质混匀，并依次置于37C恒温水浴中保温。待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KI - 12溶液。添加KI - I2溶液，检验淀粉的水解程度。待混合变为淡棕黄色（颜色有点淡即可） 后，向所有试管依次添加 1-2滴KI 12溶液。添加滴 KI - 12溶液的时间间 隔，从第1管起，亦均为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。（四）唾液淀粉酶的活化及抑制1、实验原理酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。2、材料、仪器与试剂（1）材料：0.5%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液（2 ）仪器：试管及试管架；恒温水浴（3）试剂：1% NaCI溶液；1% CuSO4溶液；KI - I2碘溶液；1%Na2SO4溶液3、 实验操作（注意本实验的淀粉溶液为无NaCI的淀粉溶液）表4唾液淀粉酶活化及抑制实验AvV 口吕号12340.5%淀粉溶液（ml）1.51.51.51.5最佳稀释度唾液（ml）0.50.50.50.51% NaCI 溶液（ml）0.5一一一1% CuS04溶液（ml）一0.5一一1% Na2SO4溶液（ml）一一0.5一蒸馏水（ml）一一一0.537 C恒温水浴中保温 10分钟KI I2