抗生素效价计算过程强烈推荐.doc

1、USP Cylinder-plate assay美国药典管碟法-一（标准曲线法）1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml）,分别为SI、S2、S3、S4和S5,其中S3 为中间浓度。除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不 相连的三个分别加入Si心为1、2、4或5）,另外三个不相连的加入S3。待检样 品（Unknown）加样方式如Si,具体放置方法如下图1：图1：标准及样品管碟放置方式图例Replicate!Replicate?Replicate32、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例：下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组

2、测量结果:表2：抗生素效价检测测量结果表Stan*dardCocKcntra tion (U/ml)PlateRcpliRferee 亞)SampleCorrectedmean (mm)Zone 1(mm)Zone i(mm)2omS(mm)Mean$DM5DZone 2(T2one4 忡m)Zone 6(mm)Mean$D%ISD3 JO1U.l15.51 $315.867OJOO1.314UJ13414.167缺2314.022216D15.916.21414.114.4315.715814.0U.214.1115.6庁515.5670,15814H715.11480.2651.814.9

3、80215.5戌614J14$15431371S.4IS3UA15,014.16.25115.816,015.7890-1691.116.616.816.3163780.2331.416.511215315.6曲愀16.51623UJ157曲169161*ZM2511%15.615515.6670.1410.917311017.017.1670.2241317.222215.715.51731A17J315.815.8173U.31&715.72?Unknown11571S.815.78G.1791-11S.31S.81SJ15.47603072.015322213515.715,715.fi

4、13.81SJ315515.815315J15.115,11 This is the value of the overa! reference mear refetred to as the orretion pein匕备注：ZoneK 3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值;Zonc2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值;U2表示待测样品1。2. 1进行初始讣算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。例如：15.867= (16.1,15.6,15.8,16.0.15.8) 9 个数据的平均值14.167= (14

5、.6,14.1,13.5,14.5.14.1) 9 个数据的平均值2.2变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差(包括标准对照和样品的)， 进而计算出其相对标准偏差值(RSD,该值应不超过10%)。例如：标准偏差 0.200 = s( 16.115.8)相对标准偏差 1.3% = (0.200/15.867) *1002.3进行平板间的差异校正：计算公式如下。Xc = Xs-(Xr-P)Xc=标准品平均值的校正值Xs=原始的标准品的平均值Xr=对照值的平均值P=校正值例如：14.022= 14.167-（15.867- 15.722）= 14.167-0.1452. 4建

6、立标准曲线：标准曲线1112. 3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构 成。（使用适宜的计算软件或手动讣算）（注意一一可以使用自然对数或底数为 10的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果） 例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。表3：标准曲线数据表Standard SetCorrected zone Measurements (mm)Concentration (U/mL)Si14.0223.2S214.9894.0Reference (S015.7225S416.5116.25Ss17.2227-8125图4：线形回归结果抗生素效价

7、标准曲线精品.2. 52ln(C)标准曲线:Z = 3.5502* ln(C) + 9.9794乙校正抑菌圈大小C二浓度 R:二 0. 99682.5待测样品效价：估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值(三个平 板的)。用上面介绍的标准品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。 注意-一另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度$的对数值 在估计效价的回归线中进行校正。在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样 品的含量对数值Lu。Lu = (Z a)/ba=回归线的截距 b=回归线的斜率要得知待测样品的效价，取Lu的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为 参考值浓度的百分比。例如：待测样品校正值(表2中)=15. 522待测样品效价的In