Waters2695高效液相色谱仪操作规程

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2、、开机前的准备工作：1检查设备电源、流路、信号连接是否完好；2流动相：配制相应的流动相,经0。22mm微孔滤膜抽真空过滤后,或检查是否需要添加。适当选择滤膜，水系/有机系（反光面朝上）。3样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.22mm滤膜过滤。二、开机平衡系统：1开机自检：打开电源开关,仪器开始自检（4-5min)，待屏幕上方出现“idle”自检完成。2脱气：按面板右下方“menu/status”键进入“status”界面，移动光标至“degasser mode”，按enter选择“on”，打开在线脱气。一般默认是开的。3设定柱温：在“status”界面，光标至“col htr set”

3、,输入目标温按enter。4清洗柱塞杆:按“menu/status”键回到“menu”界面，按下排功能键“diag,然后再按下排功能键“prime seal wsh,“start，冲洗12min后，“halt”，“close.5wet prime：在“status”界面中“composition下,选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“direct function键，移动光标选择“wet prime”，“ok，流速及时间可使用默认值,也可自行设定（如：5ml/min，3min），“ok”即可。将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通道选25v 5ml/min，3m

4、in)。6注射器排气泡及清洗：进入“direct function”界面后,选择“purge injector，“ok”，默认数值为6,“ok”。7清洗注射针：进入“diagnostics”界面，按下排功能键之“prime ndl wsh”，“start”，默认30秒钟，“close，即可返回“diagnostics”界面.注：以上47为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡,则可重复6）直至排除。8平衡柱子:在“status界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后,再wet prime操作一次，然后设置流速,平衡色谱柱3060min。三、编辑仪器方法和方法组：1打开

5、电脑双击桌面上的empower，输入用户名system、密码manager选择项目和系统.2新建方法与方法组新建方法：单击监视区方法组编辑向导-新建2695的参数：单次输送体积（建议130）、针头深度0、脱气设置开、泵模式（等度/梯度）、柱温。2489配置:通用(灯开启、波长)-文件另存为（输入方法名xx）-保存-退出。新建方法组：选择所需的方法名称，点击下一步-输入方法组名（与方法名一致)。四、进样：1待“监视基线”稳定后，点击“中断样品组”开关，进入“进样”阶段。2当进行单进样时，在“运行样品的“单进样”界面中输入“样品名”“功能“方法组”“进样体积“运行时间等;“单进样”就是单次进样，完

6、成分析后即停止检测（流动相正常走动）;3当多进样时，在“运行样品”的“样品界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所在编号），“进样体积”、“进样数”、“功能、“方法组”、“运行时间”等。4开启绿色“运行“运行样品”开关.五、关机：1清洗注射器、针、柱塞杆：方法同开机平衡系统中的4-7。如果流动相中含有盐类，则实验结束后必须用水清洗柱塞杆。2如果流动相使用了盐,注意不要让有机溶剂直接和缓冲盐接触，中间要使用水过渡一下。先用水/甲醇（或乙腈）=95/5在1ml/min流速下清洗色谱柱和系统30分钟，再用甲醇或乙腈清洗30分钟;如果流动相中没有使用盐，则用甲醇或乙腈清洗色谱柱和系统30分钟

7、。3降低流速至0,待系统压力回零后,退出empower软件系统，关闭hplc系统。最后，关闭计算机及显示器电源.六、仪器使用注意事项:1水性流动相使用不要超过二天,最好每天新鲜配制以免微生物的生长。2样品组方法里的“功能”一项,有“平衡”及“平衡色谱柱”两个选项，其功能不同。若仪器方法选用梯度，用“平衡色谱柱”可以在进样前运行梯度来平衡柱子；而如果选用“平衡”则只是按照初始梯度条件等度平衡柱子。（当然，如果用等度的流动相条件，则两者没有区别）。3清洗柱塞杆的溶剂可以用水，或5-10甲醇(抑菌)。4清洗针的溶剂可以根据样品溶解性选择，如甲醇，或异丙醇-水（1:1）。5“实验结束后要注射器排气泡及

8、清洗（purge injector）”,1次即可，包括了“purge sample loop”。6在线脱气机打开后，开始时运行加速，压力很快降到1。0psi以下,然后维持0.5psi左右。7怀疑管路堵塞可卸下单向阀和在线过滤器进行清洗.单向阀安装注意方向（箭头朝上）。8注射器中的气泡快速有效排除方法:可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除气泡后，注射器中保留少量溶剂，做“purge injector小心安装上，再做几次“purge injector”观察没有气泡即可。其他方法，可以在“purge injector”开始后、注射器杆向上时，拧掉下边螺丝,上下抽推排除气泡,但手动排泡过程要在purge injector结束前完成。溶剂用甲醇较好，不用同时拧掉上方注射器。9当有多个“仪器方法”和“方法组”存在时要注意选择当前需要使用的“仪器方法和“方法组”；当“仪器方法”改变时尤其是流动相组成等发生变化时,必须对系统重建平衡，也就是在新的“仪器方法”流动相条件下平衡系统30分钟以上，使得基线重新稳定.10长期不使用hplc，应该将色谱柱从系统拆除，拆除前应该充分平衡色谱柱，一般为用甲醇或乙腈冲洗色谱柱40分钟以上。11若色谱柱长期保存未使用,则刚装入hplc系统时应以流量0。2ml/min平衡过夜(注意断开检测器避免不必要的