第16章 细胞间信息传递

1、生物化学生物化学 杭州职业技术学院杭州职业技术学院 学习目的学习目的 了解细胞膜通道的信息传递途径了解细胞膜通道的信息传递途径 了解鸟苷酸环化酶信息传递通路了解鸟苷酸环化酶信息传递通路 了解酪氨酸蛋白激酶信息传递通路了解酪氨酸蛋白激酶信息传递通路 熟悉细胞间信息传递的通讯方式熟悉细胞间信息传递的通讯方式 熟悉信息分子和受体的特点熟悉信息分子和受体的特点 熟悉依赖熟悉依赖G G蛋白的腺苷酸环化酶信息传递途径蛋白的腺苷酸环化酶信息传递途径 熟悉细胞内受体的信息传递途径熟悉细胞内受体的信息传递途径 第十六章第十六章 细胞间信息传递细胞间信息传递 signalsignal cellcellchange

2、change 增殖增殖 分化分化 代谢代谢 功能功能 应激应激 凋亡凋亡 cellular signal transductioncellular signal transduction or or or lost or lostdiseasedisease 第一节第一节 细胞间信息传递方式细胞间信息传递方式 直接信息传递直接信息传递 (direct communication)(direct communication)： 信息分子通过相邻细胞间的连接通道从一个信息分子通过相邻细胞间的连接通道从一个 细胞进入另一细胞的信息传递。我们把细胞之间细胞进入另一细胞的信息传递。我们把细胞之间 的这种

3、结构称为裂隙连结的这种结构称为裂隙连结(gap junction) (gap junction) 信息传递信息传递(indirect communication)(indirect communication) 细胞产生的信息分子分泌到细胞外，经扩散细胞产生的信息分子分泌到细胞外，经扩散 或血液运送到靶细胞或血液运送到靶细胞(target cell)(target cell)，信息分子与，信息分子与 靶细胞受体结合，并通过一定机制将信息传递到靶细胞受体结合，并通过一定机制将信息传递到 细胞内部，从而靶细胞做出相应的反应细胞内部，从而靶细胞做出相应的反应 第二节第二节 信息分子与受体信息分子与受

4、体 细胞间信息分子细胞间信息分子 由细胞分泌的起调节靶细胞生命活动由细胞分泌的起调节靶细胞生命活动 的化学物质统称为细胞间信息分子的化学物质统称为细胞间信息分子, , 细胞内信息分子细胞内信息分子 在细胞内传递调控信号的化学物质统在细胞内传递调控信号的化学物质统 称为细胞内信号分子称为细胞内信号分子 受受 体（体（receptorreceptor） 细胞膜上或细胞内能特异性识别信息分子细胞膜上或细胞内能特异性识别信息分子 并与之结合，进而引起细胞生物学效应改变的并与之结合，进而引起细胞生物学效应改变的 特殊蛋白质或糖脂。共有两类：位于细胞膜上特殊蛋白质或糖脂。共有两类：位于细胞膜上 的受体称为

5、膜受体，位于细胞内的受体称为胞的受体称为膜受体，位于细胞内的受体称为胞 内受体。膜受体又包括内受体。膜受体又包括与离子通道偶联的受与离子通道偶联的受 体，体，与与G G蛋白偶联的受体；蛋白偶联的受体；具有鸟苷酸环具有鸟苷酸环 化酶活性的受体；化酶活性的受体；具有酪氨酸蛋白激酶活性具有酪氨酸蛋白激酶活性 的受体的受体 能与受体呈特异性结合的信息分子则称为能与受体呈特异性结合的信息分子则称为 配体（配体（ligandligand） 受体的特点受体的特点 高度特异性高度特异性 高度亲和性高度亲和性 结合反应的可逆性结合反应的可逆性 可饱和性可饱和性 特定的生物学效应特定的生物学效应 第三节第三节 受

6、体介导的信息传递途径受体介导的信息传递途径 与离子通道偶联的信息传递途径与离子通道偶联的信息传递途径 与与G G蛋白偶联的信息传递途径蛋白偶联的信息传递途径 与鸟苷酸环化酶偶联的信息传递途径与鸟苷酸环化酶偶联的信息传递途径 与酪氨酸蛋白激酶偶联的信息传递途径与酪氨酸蛋白激酶偶联的信息传递途径 与细胞内受体偶联的信息传递途径与细胞内受体偶联的信息传递途径 与与G G蛋白偶联的信息传递途径蛋白偶联的信息传递途径 G G蛋白蛋白(G protein/GTP binding protein)(G protein/GTP binding protein)是位于细胞膜胞是位于细胞膜胞 浆一侧，能与鸟嘌呤核

7、苷酸结合并具有水解浆一侧，能与鸟嘌呤核苷酸结合并具有水解GTPGTP活性的蛋白质。活性的蛋白质。 G G蛋白由蛋白由、三个亚基组成，其中三个亚基组成，其中亚基可以结合亚基可以结合GDPGDP或或 GTPGTP，同时具有，同时具有GTPGTP酶的活性。在静息时酶的活性。在静息时G G蛋白的蛋白的亚基上结合着亚基上结合着 GDP(GDP(即即G-GDPG-GDP，为非活化型，为非活化型) )，受体处于与配体有高亲和力的活化，受体处于与配体有高亲和力的活化 状态状态 、和和亚单位亚单位 组成的异三聚体组成的异三聚体G G GDPGDP G GP P 失活状态失活状态活性状态活性状态 G G蛋白循环

8、蛋白循环 当形成受体与配体结合后，与当形成受体与配体结合后，与G-GDPG-GDP的亲和的亲和 性增高，于是便受体性增高，于是便受体- -配体配体-G-G蛋白蛋白-GDP-GDP复合体。该复合体。该 复合体形成后复合体形成后G G蛋白的蛋白的亚基构象改变，与亚基构象改变，与GDPGDP的的 亲和力下降，与亲和力下降，与GTPGTP的亲和力增大，于是的亲和力增大，于是GDPGDP被胞被胞 浆中的浆中的GTPGTP置换置换( (即即G-GTPG-GTP，为活化型，为活化型) )。 在复合体完成在复合体完成GTP GTP 置换的同时复合体分离为置换的同时复合体分离为 -GTP-GTP和和。-GTP-

9、GTP调控下游腺苷酸环化酶调控下游腺苷酸环化酶 (Adenylyl cyclase(Adenylyl cyclase，AC)AC)、磷脂酶、磷脂酶 C(PhospholipaseC(Phospholipase，C)C)、Ca2+Ca2+、K+K+通道以及通道以及肾肾 上腺素受体激酶等。上腺素受体激酶等。 G G蛋白激活蛋白激活: : GTPGTP与与G G相结合相结合 G G蛋白失活蛋白失活: : GTPGTP酶水解酶水解GTPGTP 受体受体 G G GDPGDP G G GTPGTP 效应蛋白效应蛋白G G GTPGTP 效应蛋白效应蛋白 G G GDPGDP G G蛋白介导的细胞信号转导

10、途径经蛋白介导的细胞信号转导途径经 三三 种途径下传种途径下传 -R-R 2-R2-R，M-RM-R 1-R1-R，ET-RET-R GsGs Gi Gi GqGq ACAC PLCPLC cAMP cAMP PIPPIP2 2 IP IP3 3 PKA PKA DAG(DG)DAG(DG) CaCa2+ 2+释放 释放 靶蛋白靶蛋白 靶基因转录靶基因转录 PKCPKC 靶蛋白的磷酸化靶蛋白的磷酸化 磷酸化磷酸化 cAMP-cAMP-蛋白激酶蛋白激酶A A途径途径 细胞膜上有两类受体与该途径有关，一类是细胞膜上有两类受体与该途径有关，一类是 激动型受体，当信息分子与该类受体结合后，激激动型受体

11、，当信息分子与该类受体结合后，激 活活ACAC，使细胞内，使细胞内cAMPcAMP生成增加；另一类是抑制型生成增加；另一类是抑制型 受体，当信息分子与该类受体结合后，抑制受体，当信息分子与该类受体结合后，抑制ACAC活活 性，使细胞内性，使细胞内cAMPcAMP生成减少。生成减少。 与激动型受体结合的信息分子有：胰高血糖与激动型受体结合的信息分子有：胰高血糖 素、促肾上腺皮质激素、素、促肾上腺皮质激素、型肾上腺素等；与抑型肾上腺素等；与抑 制型受体结合的信息分子有：乙酰胆碱（制型受体结合的信息分子有：乙酰胆碱（M M）、）、 型肾上腺素、阿片肽等。型肾上腺素、阿片肽等。 PKAPKA是一个四聚

12、体，由是一个四聚体，由2 2个催化亚基和个催化亚基和2 2个调节亚基组个调节亚基组 成。每个调节亚基上有成。每个调节亚基上有2 2个结合个结合cAMPcAMP的位点。当调节亚基的位点。当调节亚基 结合结合cAMPcAMP后，调节亚基与催化亚基解离，游离的催化亚基后，调节亚基与催化亚基解离，游离的催化亚基 才表现出其催化活性。才表现出其催化活性。PKAPKA催化一些蛋白质的丝催化一些蛋白质的丝( (苏苏) )氨酸氨酸 残基的羟基磷酸化。残基的羟基磷酸化。 PKAPKA的作用：的作用： 催化许多细胞内蛋白质的磷酸化催化许多细胞内蛋白质的磷酸化 磷酸化钙通道，引起磷酸化钙通道，引起Ca2+Ca2+内

13、流；内流； 磷酸化微管蛋白，引发细胞的分泌功能；磷酸化微管蛋白，引发细胞的分泌功能； 游离的活性催化亚基进入核内，使转录调控相关蛋白的游离的活性催化亚基进入核内，使转录调控相关蛋白的 丝氨酸磷酸化，最终引起基因的表达水平变化。丝氨酸磷酸化，最终引起基因的表达水平变化。 蛋白激酶蛋白激酶A A 信号分子信号分子- -受体受体 G G蛋白蛋白 GDPGDPG G蛋白蛋白 GTPGTP 磷酸酯酶磷酸酯酶C C 磷酸酯酶磷酸酯酶C C 磷脂酰肌醇磷脂酰肌醇 二酯酰甘油二酯酰甘油三磷酸肌醇三磷酸肌醇 PKCPKC胞质中钙离子增加胞质中钙离子增加 钙调蛋白钙调蛋白 IP3-Ca2+IP3-Ca2+、钙调蛋

14、白途径、钙调蛋白途径 IP3IP3受体是分子较大的四聚体，其亚基的羧基端部分受体是分子较大的四聚体，其亚基的羧基端部分 构成钙通道。当构成钙通道。当IP3IP3与受体结合后，受体变构，钙通道开与受体结合后，受体变构，钙通道开 放，贮存于内质网的放，贮存于内质网的Ca2+Ca2+释放出来，使胞液内释放出来，使胞液内Ca2+Ca2+浓度升浓度升 高；内质网的高；内质网的Ca2+Ca2+储备枯竭后，还能激活细胞膜的钙通道，储备枯竭后，还能激活细胞膜的钙通道， 引起细胞外引起细胞外Ca2+Ca2+内流，也使胞液内内流，也使胞液内Ca2+Ca2+浓度升高。浓度升高。 Ca2+Ca2+升高可以激活升高可以

15、激活Ca2+-Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (Ca2+-calmodulin-dependent protein kinase(Ca2+-calmodulin-dependent protein kinase，CaMCaM激激 酶酶) )。当钙调蛋白。当钙调蛋白(CaM) 4(CaM) 4个个Ca2+Ca2+结合位点结合结合位点结合Ca2+Ca2+后，钙后，钙 调蛋白变构，一些依赖调蛋白变构，一些依赖Ca2+-CaMCa2+-CaM的蛋白激酶就被激活，后的蛋白激酶就被激活，后 者的底物谱非常广，可以磷酸化许多蛋白质的丝者的底物谱非常广，可以磷酸化许多蛋白质的丝( (苏

16、苏) )氨酸氨酸 残基，使之激活或失活。残基，使之激活或失活。 由磷脂酶由磷脂酶C C水解水解PIP2PIP2，生成的，生成的DGDG是脂溶性，生成后仍是脂溶性，生成后仍 留于细胞膜。留于细胞膜。DGDG的信息传递途径引起短暂的蛋白激酶的信息传递途径引起短暂的蛋白激酶C C的的 活化，主要与内分泌腺、外分泌腺的分泌、血管平滑肌张活化，主要与内分泌腺、外分泌腺的分泌、血管平滑肌张 力的改变、物质代谢变化等有关。力的改变、物质代谢变化等有关。 与鸟苷酸环化酶偶联的信息传递途径与鸟苷酸环化酶偶联的信息传递途径 cGMPcGMP广泛存在于动物各组织中，其含量约为广泛存在于动物各组织中，其含量约为cAM

17、PcAMP的的 1/10-1/1001/10-1/100。cGMPcGMP由由GTPGTP在鸟苷酸环化酶（在鸟苷酸环化酶（guanylate guanylate cyclasecyclase，GCGC）的催化下生成，其生成和降解过程如下：）的催化下生成，其生成和降解过程如下： GTPGTP G G MgMg2+ 2+ PPiPPi cGMPcGMP 磷酸二酯酶磷酸二酯酶 H H2 2O O CaCa2+ 2+ 或 或 MgMg2+ 2+ 5 5 - GMP- GMP cGMPcGMP能激括能激括cGMPcGMP依赖性蛋白激酶依赖性蛋白激酶(cGMP-(cGMP-蛋白激酶，蛋蛋白激酶，蛋 白激酶

18、白激酶G)G)，从而催化有关蛋白或有关酶类的丝（苏），从而催化有关蛋白或有关酶类的丝（苏） 氨酸残基磷酸化，产生生物学效应。氨酸残基磷酸化，产生生物学效应。 与酪氨酸蛋白激酶偶联的信息传递与酪氨酸蛋白激酶偶联的信息传递 途径途径 酪氨酸蛋白激酶（酪氨酸蛋白激酶（tyrosine-protein kinasetyrosine-protein kinase，TPKTPK） 能特异的催化蛋白质分子中的酪氨酸残基磷酸化，改变被能特异的催化蛋白质分子中的酪氨酸残基磷酸化，改变被 磷酸化蛋白质的生物学活性，继而产生细胞内效应。该作磷酸化蛋白质的生物学活性，继而产生细胞内效应。该作 用与细胞的生长、增值、分

19、化等过程密切相关。细胞中的用与细胞的生长、增值、分化等过程密切相关。细胞中的 TPKTPK分为两大类，第一类位于细胞膜上称为受体型分为两大类，第一类位于细胞膜上称为受体型TPKTPK，该，该 类受体均具有催化功能，所以又称为催化型受体，如胰岛类受体均具有催化功能，所以又称为催化型受体，如胰岛 素受体、表皮生长因子受体等；另一类受体位于胞浆中称素受体、表皮生长因子受体等；另一类受体位于胞浆中称 为非受体型为非受体型TPKTPK，但它们常与非催化型受体偶联。，但它们常与非催化型受体偶联。 当配体与受体结合后，催化型受体结构发生改变，催当配体与受体结合后，催化型受体结构发生改变，催 化受体蛋白的胞内

20、肽链酪氨酸残疾磷酸化，这一过程称为化受体蛋白的胞内肽链酪氨酸残疾磷酸化，这一过程称为 自身磷酸化；非催化型受体与配体结合后，受体胞内部分自身磷酸化；非催化型受体与配体结合后，受体胞内部分 被非受体型被非受体型TPKTPK磷酸化。磷酸化后的受体通过细胞内的特磷酸化。磷酸化后的受体通过细胞内的特 异性蛋白传递信息，产生生物学效应。异性蛋白传递信息，产生生物学效应。 PI3KPI3K GFGF TPKTPK 靶蛋白靶蛋白 磷酸化磷酸化 Grb2Grb2 SosSos RafRaf MEKMEK ERKERK 靶蛋白靶蛋白 磷酸化磷酸化 转录因子转录因子 磷酸化磷酸化 靶基因靶基因 转录转录 PLCP

21、LC PIP2PIP2 DAGDAG PKCPKC IP3IP3 CaCa2+ 2+ 50 kinds50 kinds RasRas （二）非受体（二）非受体TPK信号转导途径信号转导途径 IL、IFN、促红素（多数细胞因子）、促红素（多数细胞因子） FAK Src家族中家族中PTK PTK磷酸化磷酸化 激激 活活 诱导转录诱导转录 DNA 核内调节基因表达核内调节基因表达 细胞因子细胞因子 应答元件应答元件 细胞表型改变细胞表型改变 JAK JAK-STAT通路 JAK JAK STAT 与细胞内受体偶联的信息传递途径与细胞内受体偶联的信息传递途径 与细胞内受体结合发挥调节作用的信与细胞内受

22、体结合发挥调节作用的信 息分子多是分子量比较小的脂溶性激素，息分子多是分子量比较小的脂溶性激素， 如性激素、糖皮质激素、盐皮质激素、甲如性激素、糖皮质激素、盐皮质激素、甲 状腺激素、状腺激素、1 1，2525（OHOH）2-D32-D3等。该类信息等。该类信息 分子与细胞浆（或细胞核）中的特异性受分子与细胞浆（或细胞核）中的特异性受 体结合后，移动到细胞核内的特定体结合后，移动到细胞核内的特定DNADNA序列序列 上，进一步完成对基因表达的调控。这种上，进一步完成对基因表达的调控。这种 调控有时是促进蛋白质的生物合成，有时调控有时是促进蛋白质的生物合成，有时 是抑制蛋白质的生物合成。该类调控方

23、式是抑制蛋白质的生物合成。该类调控方式 比较慢，但作用时间较长。比较慢，但作用时间较长。 小结小结 细胞间的信息传递方式包括直接传递和间接传递。细细胞间的信息传递方式包括直接传递和间接传递。细 胞膜受体介导的间接信息传递途径是本章的重点。胞膜受体介导的间接信息传递途径是本章的重点。G G蛋白蛋白 是细胞膜受体信息传递的重要偶联体，与是细胞膜受体信息传递的重要偶联体，与G G蛋白偶联的信蛋白偶联的信 息传导途径有：息传导途径有：1cAMP-1cAMP-蛋白质激酶蛋白质激酶A A途径，途径，cAMPcAMP激活蛋白激活蛋白 激酶激酶A A，后者使某些底物蛋白发生磷酸化直接调节物质代，后者使某些底物

24、蛋白发生磷酸化直接调节物质代 谢；谢；2 IP3-Ca2+2 IP3-Ca2+、钙调蛋白途径，受体激活磷脂酶、钙调蛋白途径，受体激活磷脂酶C C，使，使 PIP2PIP2水解产生水解产生IP3IP3和和DGDG，它们可引起细胞内，它们可引起细胞内Ca2+Ca2+浓度增加，浓度增加， 激活激活Ca2+-Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶，进而引起底物蛋白钙调蛋白依赖性蛋白激酶，进而引起底物蛋白 的磷酸化。的磷酸化。TPKTPK偶联的信息传递途径，包括受体型偶联的信息传递途径，包括受体型TPKTPK和非和非 受体型受体型TPKTPK，它们通过不同的方式使受体发生磷酸化反应。，它们通过不同的方式使受体

25、发生磷酸化反应。 在细胞内受体介导的信息传递中，配体主要是类固醇在细胞内受体介导的信息传递中，配体主要是类固醇 激素，他们可以通过细胞膜，在胞浆内或核内与受体结合，激素，他们可以通过细胞膜，在胞浆内或核内与受体结合， 复合物直接调控基因的转录。复合物直接调控基因的转录。 PgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#

26、s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x- A1D5G8KbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2

27、D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgS

28、kVnYq$t*x- A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcKcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&

29、v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w- A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8

30、KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w- A1D5G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVn

31、Zq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w- A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C

32、3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNf

33、RiUmXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w- A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u

34、*x+A2E5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w- z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7J

35、aMdPhSkWnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w- z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmX

36、p!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRgRjVmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w- z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+

37、B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMeP

38、hTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t&w- z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&

39、w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w- z1D4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9

40、KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w- z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTk

41、WoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjVmYp!t&w- z

42、1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6H9LcOg

43、RjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w- z1C4G7JaMePhSkWnZr$u$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbNeQhTlWo#r

44、%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x-A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x- A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G

45、8JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x- A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3F6I9LdOgRjV

46、mYq!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x-A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x- A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(

47、y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D5G8JbN

48、eQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x- A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!

49、t*w-z1D4G8JbMeQhTkWoZr%u(x+B2E5H9KcOfRiUmXp#s&v)y0z0C3F7IaLdPgSkVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(y+B2E6H9KcOfRjUmXp!s&v)z0C4F7IaMdPgSkVnZq$t*x- A1D5G8KbNeQiTlWo#r%v(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$u*x-A2D5G8KbNfQiTlXo#r%v(y0B3E6I9LcOgRjVmYp!t&w)z1C4G7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3

50、F6I9LdOgRjVmYq!t&w-z1C4G7JbMePhTkWnZr$u(x+A2E5H8KcNfRiUlXp#s%v)y0C3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMeQhTkWoZr$u(x+B2E5H9KcNfRiUmXp#s&v)y0C3F7IaLdPgSjVnYq$t*w-A1D4G8JbNeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*x- A1D5G8JbNeQiTlWo#r%u(y+B3E6H9LcOfRjUmYp!s&w)z0C4F7JaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQi

51、TlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!t&w)z1C4F7JaMePhSkWnZq$u*x+A2D5H8KbNfQiUlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2E5H8KcNfQiUlXp#s%v)y0B3F6IaLdOgSjVmYq!t*w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdPgSjVnYq!t*t*w-A1D4G8JbMeQhTlWoZr%u(x+B2E6H9KcOfRiUmXp!s&v)z0C3F7IaMdPgSkVnYq$t*

52、w- A1D5G8JbNeQhTlWo#r%u(y+B2E6H9LcOfRjUmXp!s&w)z0C4F7IaMdPhSkVnZq$t*x-A2D5G8KbNeQiTlXo#r%v(y+B3E6I9LcOgRjUmYp!s&w)z1C4F7JaMdPhSkWnZq$u*x-A2D5H8KbNfQiTlXo#s%v(y0B3E6I9LdOgRjVmYp!t&w-z1C4G7JaMePhTkWnZr$u*x+A2D5H8KcNfQiUlXo#s%v)y0B3F6I9LdOgSjVmYq!t&w-z1D4G7JbMePhTkWoZr$u(x+A2E5H9KcNfRiUlXp#s&v)y0C3F6IaLdOgSjVnYq!t*w-z1D4G8JbMeQh