组织学与胚胎学：组织学绪论

1、 组织学与胚胎学组织学与胚胎学 Histology and Embryology 第一章第一章 组组 织织 学学 绪绪 论论 Introduction of Histology 组织学研究内容组织学研究内容 组织学在医学中的地位组织学在医学中的地位 人体各部结构人体各部结构 （解剖和组织） 疾病时各结构疾病时各结构 的变化的变化（病理 学） 疾病时各结构疾病时各结构 功能的变化功能的变化 （病理生理学） 诊断学诊断学 内科学内科学 外科学外科学 儿科学儿科学 眼科学眼科学 妇产科学妇产科学 人体各结构功能人体各结构功能 （生理与生化） 解剖学：解剖学：肉眼肉眼-分辨率：分辨率：0.1mm 意大

2、利文艺复兴意大利文艺复兴达达芬奇，维萨利芬奇，维萨利 o 1665 年年, Robert Hook (英国人英国人)-Cell o 100年之久，石蜡切片术年之久，石蜡切片术 微米（微米（mm）0.2m0.2m 组织学发展简史组织学发展简史 o 1838年德国学者年德国学者T.Schwan、M. Schleiden “细胞学说细胞学说” o 人体细胞约人体细胞约1 1101015 15 细胞， 细胞，200200余种余种 o 1801年年, Bichat (法国人法国人)-组织（组织（Tissue） Histology ：希腊文：希腊文 组织：功能相关的细胞群和细胞外基质。组织：功能相关的细胞

3、群和细胞外基质。 细胞细胞 组织组织 器官器官 o 人体基本组织人体基本组织上皮组织、结缔组织、肌组织及上皮组织、结缔组织、肌组织及 神经组织神经组织 二、组织学主要研究方法二、组织学主要研究方法 （一）常用光镜标本制作技术（一）常用光镜标本制作技术 1.1.切片切片标本的制备标本的制备 涂片、铺片与磨片标本的制备涂片、铺片与磨片标本的制备 o涂片涂片 o铺片铺片 o磨片磨片 o 取材与固定：取材与固定： o 固定使组织中蛋白质迅速凝固，防止组固定使组织中蛋白质迅速凝固，防止组 织自溶或腐败，以保持生活状态下的结织自溶或腐败，以保持生活状态下的结 构。常用的固定剂有甲醛、酒精等构。常用的固定剂

4、有甲醛、酒精等 o 脱水脱水:上行梯度乙醇上行梯度乙醇 o 透明透明: :二甲苯二甲苯 石蜡切片标本的制备石蜡切片标本的制备 o 包埋包埋：包埋前先浸入已融化的石蜡中使蜡进入：包埋前先浸入已融化的石蜡中使蜡进入 组织中组织中, 然后石蜡包埋。然后石蜡包埋。 o 切片和染色：切片和染色： 切片厚度切片厚度 5-10m, 苏木精（苏木精（hematoxylin） 伊红（伊红（eosin） o HEHE染色染色 HE染色原理染色原理: 苏木精为碱性染料，细胞核和细胞质中的核酸染成蓝苏木精为碱性染料，细胞核和细胞质中的核酸染成蓝 紫色；紫色； 伊红为酸性染料，细胞质中的碱性蛋白和细胞外基质伊红为酸性染

5、料，细胞质中的碱性蛋白和细胞外基质 染成粉红色。染成粉红色。 嗜碱性（嗜碱性（basophilia） 嗜酸性（嗜酸性（acidophilia） o 封固：封固： o 火棉胶切片火棉胶切片（celloidin section） o 冰冻切片冰冻切片 (frozen section） o 恒冷箱切片机恒冷箱切片机（cryostat ） （二）电子显微镜技术（二）电子显微镜技术 1932年，德国人年，德国人Ruska和和Knoll 发明了电子显微镜发明了电子显微镜 测量单位：纳米测量单位：纳米（nm) 1nm=1/1000m （获（获1986年诺贝尔奖）年诺贝尔奖） 分辨率：分辨率：0.1-0.2n

6、m 1. 透射电镜术（透射电镜术（transmission electron microscope, TEM） 取材：极为新鲜；戊二醛、锇酸固定，超薄切片（取材：极为新鲜；戊二醛、锇酸固定，超薄切片（50-100nm） 醋酸铀和柠檬酸铅电子染色醋酸铀和柠檬酸铅电子染色 电子密度高电子密度高 电子密度低电子密度低 透射电子显微镜原理透射电子显微镜原理 透射电镜图像透射电镜图像 2. 扫描电子显微镜扫描电子显微镜 scanning electron microscope, SEM o 极细的电子束在样品上扫描，产生的二次极细的电子束在样品上扫描，产生的二次 电子用探测器收集，形成电信号运送到显电子

7、用探测器收集，形成电信号运送到显 像管，在荧光屏上显示物体表面的立体图像管，在荧光屏上显示物体表面的立体图 像。像。 o 戊二醛和锇酸固定，脱水、干燥和喷镀金戊二醛和锇酸固定，脱水、干燥和喷镀金 产生立体图像产生立体图像 扫描电子显微镜原理扫描电子显微镜原理 （三）组织化学和细胞化学（三）组织化学和细胞化学 原理原理: 在组织切片上加一定试剂，与组织或细胞中在组织切片上加一定试剂，与组织或细胞中 的待检物发生化学反应成为有色沉淀物，可用的待检物发生化学反应成为有色沉淀物，可用 光镜检出。重金属沉淀可用电镜检出。此法可光镜检出。重金属沉淀可用电镜检出。此法可 检测细胞内的酶类、糖类、脂类和核酸等

8、检测细胞内的酶类、糖类、脂类和核酸等 1. 糖类显示法糖类显示法: 最常用于显示细胞、组织内的多最常用于显示细胞、组织内的多 糖和蛋白多糖方法是过碘酸糖和蛋白多糖方法是过碘酸-雪夫反应雪夫反应 （periodic acid Schiff reaction, PAS） 基本原理基本原理 o 糖被强氧化剂过碘酸（糖被强氧化剂过碘酸（HIO4）氧化后，）氧化后， 形成形成-醛基；后者与醛基；后者与Schiff试剂中的无试剂中的无 色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色色品红亚硫酸复合物结合，形成紫红色 反应产物，反应产物，PAS反应阳性部位即表示多糖反应阳性部位即表示多糖 的存在部位。的存在部位。 肠绒

9、毛上皮中杯状细胞的肠绒毛上皮中杯状细胞的PAS反应反应 （四）（四） 免疫细胞化学免疫细胞化学 基本原理基本原理:根据抗原与抗体特异性结合的特根据抗原与抗体特异性结合的特 点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜 表面抗原和受体等大分子的存在和分布表面抗原和受体等大分子的存在和分布 荧光素（常用异硫氰酸）标记抗体荧光素（常用异硫氰酸）标记抗体 辣根过氧化物酶标记抗体辣根过氧化物酶标记抗体 o 直接法和间接法直接法和间接法 免疫组织化学方法免疫组织化学方法 免疫组织化学（免疫组织化学（Sp法）法） 荧光免疫细胞化学技术荧光免疫细胞化学技术 （五）细胞培养术（五）细胞培养术（cell culture） o 细胞培养又称体外实验（细胞培养又称体外实验（in vitro）。）。 o 无菌条件下将从机体取得的细胞模拟体内各种无菌条件下将从机体取得的细胞模拟体内各种 条件培养，可在倒置相差显微镜下观察和记录条件培养，可在倒置相差显微镜下观察和记录 细胞的生活状态。细胞的生活状态。 特点：可排除体内复杂的影响因素，观察单一因素特点：可排除体内复杂的影响因素，观察单一因素 对细胞形态和功能的影响，获得从体内实验难对细胞形态和功能的