第三组设计答辩桂金鹏

1、模拟微重力效应对大鼠成骨细胞Fzd9表达的影响 学生姓名：桂金鹏 学 号：10101019 指导教师：郑丽沙 提纲 背景介绍 研究目标 研究方案 实验结果及分析 结论 致谢 背景介绍 太空飞行由于人体处于微重力环境，会给宇航员的身体带来 很多不利的影响，表现在运动系统、心血管系统、免疫系统 等的生理异常，如骨丢失、免疫力下降、肌肉萎缩等等。 背景介绍 卧床实验和太空飞行资料表明， 平均每个月约有(12)%的 骨骼丢失；即使每天进行23h的体育锻炼，骨钙仍以每月 0.4%的速率丢失。空间飞行59天、84天，航天员跟骨骨矿密 度下降4和8，飞行140天甚至可以下降19。 Leblanc AD, e

2、t al . Bone mineral loss and recovery after 17 weeks of bedrest.J Bone Miner Res. Holick MF,Bone. 背景介绍 骨是不断地进行着重建的，成骨细胞的骨形成与破骨细胞的骨吸 收的平衡是维持正常骨量的关键。如果成骨细胞骨形成作用大于 破骨细胞骨吸收作用就表现为骨量增加，反之则表现为骨量减少。 背景介绍 Wnt信号通路是一条非常重要的信号 通路，已被证实参与成骨细胞骨形 成的调控。 Frizzled（Fzd）蛋白家族是Wnt信号 通路的组成分子，与LRP5/6组成了 Wnt的膜受体。 背景介绍 大量文献对Wn

3、t蛋白、LRP5/6等Wnt信号通路组成分子的作用进行 阐明，但作为Wnt的一个重要共受体，Fzd受体的作用还远未阐明。 在成骨诱导分化早期，所有Fzd成员中仅有Fzd9表达上升。Fzd9-/- 小鼠骨髓基质细胞成骨向诱导后矿化不良，Fzd9-/-小鼠由于骨形 成障碍而导致明显的低骨量。 Joachim Albers,et al. Control of bone formation by the serpentine receptor Frizzled-9. J. Cell Biol. 研究目标 研究模拟微重力效应下，大鼠成骨细胞中Fzd9基因水平和蛋 白水平上的变化情况，为研究相关的分子机制

4、奠定基础。 研究方案 实验结果及分析成骨细胞鉴定 AB A:成骨细胞 B：成骨细胞ALP染色 碱性磷酸酶染色（钙钴法）呈阳性，证明所染细胞为成骨细胞。 实验结果及分析ALP活力变化 ALP活力（n=3，P0.05） ALP（碱性磷酸酶）是成骨 细胞分化早期阶段的一种标 志，能够反映成骨细胞合成I 型胶原、形成骨基质的能力， 在一定程度反映了骨形成能 力的高低，证实成骨细胞骨 形成能力受到模拟微重力效 应的抑制。 实验结果及分析RT-PCR （a）凝胶电泳条带对比 （b）Fzd9基因相对表达量(n=5，P0.01) 随着加载模拟微重力效应时间的延长，Fzd9的基因相对表达量逐渐降低。 实验结果及

5、分析Real-Time PCR 结果与RT-PCR结果一 致，随着加载时间的 延长，Fzd9基因的相 对表达量呈现下降的 趋势。 Real-Time PCR结果（n=4，P0.05) 实验结果及分析Western blotting （a）Western blotting条带图对比 （b）Fzd9蛋白相对表达量（n=4，P0.01） 成骨细胞中Fzd9蛋白的表达量随着模拟微重力效应时间延长而降低，蛋白水 平的结果与基因水平的结果是一致的。 结论 1. 成骨细胞成骨分化早期的标志碱性磷酸酶的活力在 模拟微重力效应条件下受到了抑制，证实了其骨形成能力受 到了一定的抑制。 2. 在模拟微重力效应条件下，大鼠成骨细胞中Fzd9的表达 量，呈现出下调的趋势。 3. Fzd9可能参与模拟微重力效应条件下成骨细胞骨形