丙泊酚对小鼠小脑皮层分子层和颗粒细胞层感觉信息传递的影响.doc

1、丙泊酚对小鼠小脑皮层分子层和颗粒细胞层感觉信息传递的影响目的丙泊酚是一种中枢神经系统抑制剂，在体内条件下剂量依赖性的抑制 大脑新皮层的信息处理。然而，丙泊酚对活体动物小脑皮质分子层感觉信息处理 的影响还不清楚。因此，我们在乌拉坦麻醉麻醉下，应用电生理学和药理学方法研究丙泊酚对 感觉刺激诱发小鼠小脑分子层场电位反应的影响。方法6-8周龄的成年ICR小 鼠通过腹腔注射体重为1. 3g/kg乌拉坦麻醉后，进行气管插管以避免呼吸道堵塞, 然后将小鼠固定在定制的立体定位装置上。在小脑相应部位作一个防水外流灌流槽后,在小脑Crus II区的相对应部位 行开颅手术,钻一个直径为1-1. 5mm的小孔，暴露记

2、录部位的小脑表而，并用蠕动 泵在暴露脑表而持续灌流含氧的人匸脑脊液(art辻icial cerebrospinal fluid, ACSF) o 使用 Axopatch200B 膜片钳放大器(Molecular Devices, Foster City, CA) 记录感觉刺激诱发小脑皮层分子层场电位，并通过D/A转换器1440和Clampex 10. 3软件获取感觉刺激诱发场电位活动的数据。记录电极内填充的是人工脑脊 液,阻抗在3-5 MQ之间。丙泊酚和gabazine购置Sigma上海公司，所以药物溶J ACSF并用蠕动泵 来来灌流到手术暴露部位。使用ClampfitlO. 3软件进行电生理

3、学的数据分析， 所有数据采用均数土标准误表示，并应用SPSS 17. 0软件进行配对T检验或单因 素方差分析,P<O. 05被认为实验组之间有显著性差异。结果(1)小脑表面灌注浓度为10-1000的丙泊酚可显著抑制感觉刺激 诱发的分子层场电位反应的GABA能成分(Pl),呈现出振幅和波形下面积(AUC)明 显减少，但波形的上升时间与延迟时间显著增加。(2)丙泊酚显苦增强感觉刺激诱 发的分子层场电位反应的兴奋性成分(门)，这表现在振幅和AUG的增加，并伴随 着上升时间和衰减时间的增加。(3)在GABAA受体阻断剂,gabazine (20 P M)的存在下，丙泊酚显苦增加浦肯 野细胞兴奋性

4、突触后反应成分(N2)的幅度和AUC。结论本研究结果表明丙泊酚 通过调节GABAA受体活性，导致竞争性抑制感觉刺激诱发小鼠小脑皮质分子层场 电位反应的GABA能成分，并增强平行纤维兴奋传入。目的丙泊酚是一种中枢神经系统抑制剂，通过活化Y氨基丁酸A和甘氨酸 受体來降低神经元的活性。最近，我们研究发现丙泊酚抑制而部刺激诱发的小脑 皮层分子层场电位反应的GABA能成分，但增强分子层和浦肯野细胞上的平行纤 维兴奋性输入，提示丙泊酚调节活体动物小脑颗粒细胞对感觉信息的传递。因此，本研究拟利用乌拉坦麻醉小鼠，应用电生理学和药理学方法研究丙泊 酚对感觉刺激诱发小鼠小脑颗粒细胞层场电位反应的影响。方法实验动物

5、选用 成年ICR小鼠(6-8周龄)，通过腹腔注射体重为1. 3g/kg乌拉坦麻醉后，进行气管 插管以避免呼吸道堵塞，然后将小鼠固定在定制的立体定位装置上。在小脑相应部位作一个防水外流的灌流槽后,在小脑Crus II区的相对应部 位行开颅手术，钻一个直径为1-1. 5mm的小孔，暴露记录部位的小脑表面，并用蠕 动泵在暴歸脑表面持续灌流含氧的ACSFo使用Axopatch-200B膜片钳放大器记 录感觉刺激诱发小脑皮层颗粒细胞层场电位反应，并通过型号为1440的D/A转换 器和Clampex 10. 3软件获取感觉刺激诱发场电位活动的数据。记录电极内填充的是人工脑脊液,阻抗在3-5 MQ之间。丙泊

6、酚和NMD A, gabazine和D-APV购置于Sigma上海公司，所以药物溶f ACSF并用蠕动泵来来 灌流到手术暴露部位。使用Clampfit 10.3软件进行电生理学的数据分析,所有数据采用Mean S. E. M.表示,并应用SPSS 17.0软件进行配对T检验或单因素方差分析,P<0. 05被认为实验组之间有显著性差异。结果(1)脑表面灌流50-1000 UM的丙泊酚,可显苦增强吹风刺激小鼠同侧触须垫诱发的小脑皮层颗粒细胞层 的场电位反应，呈现在刺激开始反应(Ron)半宽度和曲线下面积(AUC)的增加，但 Ron的振幅和上升时间没有明显改变。(2)丙泊酚同时导致刺激反应结束(Roff)振幅增强,Roff与R。n比值增大。 丙泊酚诱发Ron反应波形下面积增大，具有剂量依存性，半数有效浓度为242.4毫摩尔。(3)给予GABAA受体拮抗剂gabazine (20 pM)可以显著增加Ron 的振幅，半宽值，上升时间常数和曲线下面积，丙泊酚(300 U M)可以进一步导致上 述指标增加。(4)给NMDA受体阻断剂D-APV(250 u M)不仅显著减弱Ron的半宽值、曲线 下面积和Roff的振幅，而且完全阻断丙泊酚对面部感觉刺激诱发颗粒层场电位 的増强作用。此外，阻断NMDA受体对Ron的振幅没有显著影响。结论丙泊酚通过活化NMDA受体显