纤维含量的测定.doc

1、纤维含量的测定高峻凤主编 .植物生理学实验指导 .高等教育出版社， 2006,12:144-148一：原理 :植物组织中的还原糖 ,蔗糖在 80%的乙醇溶液中溶解 ,而淀粉及大部分蛋白质沉淀 ,当用 4.6mol.L-1 高氯酸（ HClO 4）溶解淀粉后，也可使蛋白质，纤维素等沉淀，再以 0.1mol.L-1 NaOH 溶解蛋白质，热水和丙酮除去果胶和脂质后，剩余的沉淀可用于纤维素含量的测定。 糖与浓硫酸作用脱水生成糠醛， 可与蒽酮缩合生成蓝绿色物质。在 620nm 有最大吸收，而在 10-100g 颜色与糖含量成正比。用于己酮糖和己醛糖测定。二：仪器：离心机，分析天平，三用水浴，容量瓶，

2、10ml 离心管，铝试管架，分光光度计，沸水浴，移液管， 15-25ml 具塞刻度管 8 支， 18*180mm 试管 12 支试剂：-1-1-180%乙醇溶液， 9.2 mol.L及 4.6 mol.L高氯酸， 0.1 mol.LNaOH 溶液，葡萄糖标准液：称取分析纯葡萄糖（ 80烘干） 100mg，溶于蒸馏水中，定容至 100ml,即 1mg .L-1 标准溶液 ，用时稀释 10 倍，即为 100 g.L-1 标准液蒽酮 -硫酸试剂：称取 0.2g 蒽酮，和 0.1g 硫脲置烧杯中，缓缓加入 100ml 浓硫酸，搅拌溶解后应呈淡黄的透明溶液。3,5-二硝基水杨酸（ DNS）试剂：精确称量

3、 1g3,5-二硝基水杨酸（ DNS）, 溶于 20ml2 mol.L -1NaOH 溶液中，加入 50ml 蒸馏水，再加入 30g 酒石酸钠，溶解后用蒸馏水定容至 100ml纤维素标准液：准确称量 100mg，在冰浴下加入 60-70ml 预冷的 60%硫酸，在 0-2水解 12h，然后用 60%硫酸稀释至 100ml 刻度，摇匀。将此液在冰浴下稀释 10 倍，即为 100g.ml -1 之标准液。三：材料：新鲜组织四：方法步骤：1，提取分离（1） 称取植物干样 0.500g 于 10ml 离心管中，加入 5-6ml80%乙醇溶液，80水浴 30min，期间不时搅拌。用少量 80%乙醇冲洗玻

4、璃棒，并将溶液冷却至室温后 3500g 下离心 10min，上清液转入 25ml 容量瓶中，再向沉淀中加入 5-6ml80%乙醇，如上述重复浸提 2 次，将上清液合并于 25ml 容量瓶中，并定容至刻度。该提取液御用测定还原糖和可溶性糖。（2） 向沉淀中加入 2ml 蒸馏水，在沸水中浴中糊化 15min，冷却后加入 2ml9.2mol.L-1 。HclO4，搅拌 15min 后，加蒸馏水 4ml ，混匀，在 4000g 下离 心 10min ，上 清液 转入 50ml 容 量瓶 。 再 向沉 淀中 加入 2ml4.6mol.L-1HClO4 ，搅拌提取 15min，加入 5min 蒸馏水，混匀

5、后离心 10min，合并上清液，用蒸馏水洗沉淀 2 次，每次 5ml，合并上清液并用蒸馏水定容至刻度， 该提取液用于测定淀粉。 沉淀用于纤维素的测定。试剂（3） 依次用 0.1mol.L -1 NaOH溶液，热蒸馏水和丙酮各洗沉淀 2 次，以除去蛋白质，果胶和脂质杂质。每次洗 15min，溶剂用量 5ml,离心后弃去上清液，沉淀用于纤维素含量测定。（4） 向洗涤后的沉淀中加入 5ml60%的硫酸，搅拌后置 4冰箱中冷水解 12h 以上，取出后于 4000g 下离心 15min，上清液转入 25ml 容量瓶中，再向沉淀中加入 5ml60%的硫酸，重复提取 2 次，每次 15min，上清液转入 2

6、5ml 容量瓶中，并用 60%硫酸定容至刻度，用于粗纤维含量测定。2. 纤维含量的测定：（1）蒽酮 - 硫酸法：按下表加入各种试剂并制作标准曲线.试管号123456100g.ml-100.20.40.60.81.0纤维素标准液 /ml蒸馏水 /ml2.01.81.61.41.21.0蒽酮 -硫酸5.05.05.05.05.05.0试剂 /ml纤维素含020406080100量 /g以上标准管加完试剂后，先不摇动，再吸取 2ml 水解液，放入另一试管中，待全部加完蒽酮硫酸试剂后摇动混合。 将以上标准管和样品管同时放入 100水浴中加热 10min，取出后用自来水冷却至室温后测定 620nm波长下吸光度。以吸光度为纵坐标，糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。（2）样品含量测定：取上述纤维素提取液于 2ml25mm*180mm大试管中，与标