酵母菌的染色和观察

1、v1.0可编辑可修改4酵母菌的染色和观察【摘要】此次实验采用美蓝染液水浸片法和子囊抱子染色法观察酵母菌的各项形态特征。通过对染色后的酵母菌细胞进行观察， 可以观察到死、活细胞的对比,正在进行出芽生殖的酵母细胞，以及抱子囊中的子囊抱子。【关键词】酵母菌美蓝染液水浸片法子囊抱子染色法出芽生殖【前言】此次实验的目的，是通过用美蓝染色制成水浸片和水-碘水浸片的实验方法，来 观察酵母的生活形态和出芽生殖的生殖方式，并了解酵母菌对人类生产生活的重要意义。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，酵母细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还

2、原型，所以酵母的活细胞无色，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。酵母菌是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。目前已知有1000多种酵母，根据酵母菌产生抱子（子囊抱子和担抱子）的能力，可将酵母分成三类：形成抱子的株系属于子囊菌 和担子菌。不形成抱子但主要通过出芽生殖来繁殖的称为不完全真菌，或者叫“假酵母”（类酵母）。目前已知大部分酵母被分类到子囊菌门。酵母菌是人类文明史中被应用得最早的微生物。可在缺氧环境中生存。 酵母菌在自然界分布广泛，主要生长在偏酸性的潮湿的含糖环境中，而在

3、酿酒中，它也十分重要。1.材料菌种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）溶液和试剂美蓝染液，碘液，孔雀绿水溶液，番红水溶 液。仪器和其他用品载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，镊子，显微镜等。2.方法配置麦氏培养基和液体培养基2.1.1称量和溶化2.1.1.1 麦氏培养基的配置： 按照配方称取 葡萄糖，酵母浸膏，醋酸钠和 3g琼脂溶于 水中，加热溶化，冷2.3.1制片却后加水至200ml。 PH自然状态。 先在洁净的载玻片中央滴一小滴无菌水，2.1.1.2 液体培养基的配置：按照配方称取无菌操作从菌种斜面挑取少量菌体与水滴取酵母膏、ig蛋白胨、2g葡萄糖加入100ml 充分混

4、匀，涂成薄膜。水配制成液体培养基。平分为两份分装在两232干燥、热固定个锥形瓶中。 待涂片晾干后在酒精灯火焰上略微烤干。2.1.2咼温火菌2.3.3染色121 C条件下灭菌 30min。 加孔雀绿水溶液于涂片处染色5min。.美蓝染液水浸片法2.3.4水洗2.2.1制片用水轻轻地冲洗，直至流出的水无色。先在载玻片中央滴加一滴吕氏碱性美蓝2.3.5复染染液，再滴加少量水稀释。无菌操作取试管 用番红液染色1min。中培养的酵母菌少许， 放在吕氏碱性美蓝染2.3.6水洗、干燥液中，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖 用水轻轻地冲洗，直至流出的水无色为止，玻片一块，小心地盖在液滴上。 然后将涂片晾干。2

5、.2.2镜检 2.3.7镜检将制好的水浸片放置 3分钟后镜检。先用低 先用低倍镜，然后换高倍镜观察染色后的酵倍镜，再用高倍镜，观察酵母菌的形态和出 母菌。芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。.子囊孢子染色法3结果及分析实验结果如下图：图1美蓝染色后的酵母菌细胞(10 X 100)图2子囊孢子染色后的酵母菌细胞(10X 100)结果分析图1中美蓝染色结果可推断，无色细胞为活酵母菌细胞，蓝色细胞为已死的酵母菌细胞，浅蓝色细胞为衰老的酵母菌细胞。从图中还可以观察到正在进行出芽生殖的酵母菌细胞。图2中结果显示，用子囊孢子染色法染色后，菌体呈红色，子囊孢子呈绿色，图中可以看到每个孢子囊内2

6、个或3个孢子，实际上由所学知识可知每个孢子囊内有4个子囊孢子。思考题1. 根据你的观察结果，吕氏碱性美蓝染液的作用时间与酿酒酵母的死活细胞比例变化是否有关系答：有。随着作用时间的延长，死细胞在总细胞数中的比例增大。2. 酿酒酵母除了通过出芽方式进行无性繁殖外，还可以形成子囊孢子进行有性繁殖，你在实验中是否观察到酿酒酵母的子囊孢子答：通过子囊孢子染色法染色，观察到了酿酒酵母的子囊孢子。在显微镜下可以看到每个孢子囊内2个或3个孢子，实际上由所学知识可知每个孢子囊内有4个子囊孢子。4.小结此次实验操作较简单，实验成功的关键在于滴加染液要适中，以防用盖玻片覆盖时，过多染液会溢出，过少会产生大量气泡。盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。染色的时间长短也要适中，要使染后的颜色不能太深也不能太淡，否则将不利于观察。通过对染色后的 制片仔细观察，可以清晰的观察