大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法.doc

1、大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法饲料公司 酚红法1 原理酚红指示剂在pH6.48.2 时由黄变红， 大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。2 仪器和试剂2.1 粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、 球磨机）；2.2 天平感量 0.01 g；2.3 试管直径 18 mm ， 150 mm；2.4 尿素；2.5 酚红试剂1g/L 乙醇溶液。3 测定步骤将试样研细，称取0.02 g 试样，称准至0.01 g ，转入试管中。加入 0.02 g 结晶尿素及2 滴酚红指示剂， 加 2030 mL蒸馏水， 摇动 10

2、 s。观察溶液颜色， 并记下呈粉红色的时间。4 尿素酶活性的测定结果表示1 min 内呈粉红色为： 活性很强； 15 min 内呈粉红色为：活性强； 515 min 内呈粉红色为：有点活性；1530 min 内呈粉红色为：没有活性。注：通常， 10 min 以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。时间（ min ）豆粕尿素酶活性0-10.9 以上1-20.9-0.72-30.7-0.53-3.50.5-0.43.5-40.4-0.34-4.50.3-0.254.5-50.25-0.25-60.2-0.156-70.15-0.17-90.1-0.0512无色0饲料公司pH-增值法

3、本法是美国、日本和前苏联等国常用方法。尿素水解释放的氨是碱性的， 可使溶液 pH 值升高。试样反应30 min 后，与空白溶液的pH 之差数，可间接用来表示氨量的多少。1. 仪器设备1.1恒温水浴须能保持温度于 30 0.5；1.2酸度计（ pH 计） 具有玻璃电极、 甘汞电极、 可测试 5 mL的溶液。此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为 0.02 pH 单位或更佳。 仪器操作及pH 值测定均应依照制造商的说明， 该 pH 计应在测定前以标准缓冲液加以校正。1.2 试管 20 mm 150 mm 并配有橡皮塞。2. 试剂2.1 取 0.05 mol/L磷酸盐缓冲液溶解3.403

4、g 磷酸二氢钾（KH2PO4 ）于约 100 mL 新蒸馏水中，溶解4.335 g 磷酸氢二钾（K2HPO4 ）于约 100 mL 的蒸馏水中， 然后将此两种溶液合并配成1000 mL 。其 pH 值应为 7.0，否则应在使用前用强酸碱调整为7.0。依上述方法制备的缓冲液，其有效期在90 d 内。2.2 已加缓冲液的尿素溶液溶解 15 g 尿素于 500 mL 磷酸缓冲液中，加5 mL 甲苯作为防腐剂以防止细菌生成，依前述方法调整尿素溶液的pH 值为 7.0。2.3 样品的制备尽可能研磨样品为细粉，至少有60%通过试验筛孔径为0.4 mm ，但勿使温度升高。3. 测定步骤3.1 正确称取0.2

5、 g（准确至0.002 g）样品于试管中，加入10 mL 已加缓冲液的尿素溶液，加塞混合，然后置于30水浴中。在混合操作时试管切勿倒置。3.2 空白试验需正确称取0.2 g（准确至 0.002 g）样品于试管中，并加入 10 mL 磷酸盐缓冲液， 加塞混合， 放置 30水浴中而制成。上项试验的制备与空白试验的制备须相隔5 min ，然后每隔 5 min 搅拌试管内容物1 次。3.3 静置 30 min 后，相隔5 min 将试验及空白试验的试管自水浴中取出，将上层的液体移入5 mL 烧杯中，在自水浴中取出刚达 5 min 时，分别测定此种上层液体的pH 值。4 计算试验试管的pH 值与空白试管的pH 值两者之差异， 即为尿素酶活性的指数。本项操作必须小心，以防止