抗感冒颗粒的薄层色谱和含量测定研究

1、抗感冒颗粒的薄层色谱和含量测定研究 【摘要】 目的 建立抗感冒颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对处方中黄芩、甘草、桔梗进行鉴别；用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷的含量。采用aichrombond-aq-c18色谱柱(4.6 mm150 mm,5 m)；流动相：甲醇-水磷酸(43570.2)；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ；检测波长：280 nm；进样量：10 l。结果 薄层色谱专属性强；黄芩苷的线性范围为0.049 60.297 6 g,r0.999 7,平均加样回收率为101.80%,rsd1.86%(n6)。结论 该方法简便、准确,重现性好,可作为抗感冒颗粒的质量控制标准。

2、【关键词】 抗感冒颗粒；黄芩苷；黄芩；甘草；桔梗；高效液相色谱法 abstract：objective to establish the quality standard for kangganmao granule. methods radix scutellariae, radix et rhizome glycyrrhizae and radix platycodonis in the prescription were identified by tlc. the content of the baicalin was determined by hplc. the column of

3、 aichrombond-aq-c18 (4.6 mm150 mm, 5 m) was used. the mobile phase was ch3oh-h2o-h3po4 (43570.2), with the flow of 1.0 ml/min, the column temperature of 30 , and peaks were detected at 280 nm. results the characteristic of identification by tlc was distinct and highly specific. the linear range of b

4、aicalin was 0.049 60.297 6 g, r0.999 7, the average recovery was 101.80%, rsd1.86% (n6). conclusion the method was easy to operate with accurate result and good reproducibility. it can be used effectively for the quality control of the preparation. key words：kangganmao granule；baicalin；radix scutell

5、ariae；radix et rhizome glycyrrhizae；radix platycodonis；hplc 抗感冒颗粒处方由金银花、连翘、黄芩等9味药材组成。用于风热感冒,发热恶风,鼻塞头痛,咽喉肿痛。本试验对方中黄芩、甘草、桔梗进行了鉴别,同时用hplc法测定了制剂中黄芩苷的含量,建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。 1 仪器与试药 日本岛津lc-10advp高效液相色谱仪,岛津spd-10avp紫外检测器,hw色谱工作站。黄芩药材购自淮安市药材公司(由江苏某公司提供),经南京中医药大学王春根教授进行品种鉴定。黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用,批号107

6、15-200212)。10批产品由江苏某公司生产并提供(批号分别为050601、050602、050603、050604、050605、050701、50702、050703、050704、050705)。甲醇、乙醇等试剂由上海久亿化学试剂有限公司生产,均为分析纯或色谱纯。 2 定性鉴别 2.1 黄芩薄层色谱鉴别 取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。取本品10 g,加甲醇30 ml,超声处理30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水5 ml,加热使溶解,趁热滤过,滤液用盐酸调节ph值至12,摇匀,80 保温30 min,放冷,离心15 min,残渣加甲醇0.5 m

7、l使溶解,作为供试品溶液1。取除黄芩以外的其它8味药材按处方比例制得阴性样品10 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。 吸取上述3种溶液各10 l,分别点于同一硅胶g薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5311)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。 2.2 甘草薄层色谱鉴别 取甘草对照药材 5 g,加盐酸1 ml及石油醚(6090 )25 ml,加热回流1 h,滤过,滤液挥干,残渣加石油醚(6090 )1 ml使溶解,作为对照药材溶液2。取本品15 g,加盐酸2 ml及石油醚(6090

8、 )40 ml,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除甘草以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品15 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。 吸取上述3种溶液各10 l,分别点于同一硅胶g薄层板上,以石油醚(6090 )-甲苯-乙酸乙酯-冰乙酸(102070.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%的磷钼酸乙醇溶液,在105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。 2.3 桔梗薄层色谱鉴别3 取桔梗对照药材5 g,加7%的硫酸乙醇-水(13)混合液25 ml,加热回流1 h,放冷,用三氯甲烷提取2次,每次20 m

9、l,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为对照药材溶液。取本品15 g,加7%的硫酸乙醇-水(13)混合液40 ml,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除桔梗以外的其它8味药材按处方比例制得的阴性样品15 g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。 吸取上述3种溶液各10 l,分别点于同一硅胶g薄层板上,以三氯甲烷-乙醚(11)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。 3 含量测定 本方中黄芩用量较大,且其中含有的黄芩苷化学性质稳定,测定方法简

10、便,故在含量测定时选择黄芩苷为指标4。 3.1 色谱条件 aichrombond-aq-c18色谱柱(4.6 mm150 mm,5 m)；流动相：甲醇-水-磷酸(43570.2),流速：1.0 ml/min；柱温：30 ；检测波长：280 nm；进样量：10 l。 3.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的黄芩苷对照品,加甲醇制成每1 ml含0.496 mg的溶液,摇匀,作为母液。从中吸取5 ml,用甲醇稀释至50 ml,制成每毫升含0.049 6 mg黄芩苷溶液,备用。 3.3 供试品溶液的制备 取10个批号的抗感冒颗粒,每批取2份,研细,每份各取0.2 g,精密

11、称定,置具塞三角烧瓶中,精密加入甲醇10 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 3.4 系统适应性考察 分别精密吸取黄芩苷对照液和各供试品溶液各10 l,注入液相色谱仪。理论塔板数以黄芩苷峰计,不低于2 500,此时,黄芩苷峰与其它相邻峰基线分离,分离度r1.5,保留时间约为14 min。色谱图见图1。 3.5 线性关系的考察 分别精密吸取浓度为0.049 6 mg/ml黄芩苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 ml定容至10 ml量瓶中,摇匀,制成4.96、9.92、14.88、19.84、29.76 g/m

12、l的系列溶液。 精密吸取5个不同浓度的对照液各10 l,注入液相色谱仪,各进2针。以浓度c为横坐标,以黄芩苷平均峰面积y为纵坐标进行线性回归,得回归方程：c210-4a0.787 9,r0.999 7,线性范围为0.049 60.297 6 g。 3.6 精密度试验 精密吸取浓度为9.92 g/ml对照品溶液10 l,连续进样5次,测得黄芩苷峰面积值rsd2.48%。 3.7 稳定性试验 精密吸取批号为050705的第一个供试液10 l,每间隔2 h进一针,连续考察10 h,结果黄芩苷峰面积值的rsd2.76%,表明在10 h内基本稳定。 3.8 专属性试验 在与样品测定完全相同的条件下,精密

13、吸取黄芩阴性对照液10 l,注入液相色谱仪,连续进3针,阴性无干扰。说明在抗感冒颗粒中,黄芩苷的专属性较强。 3.9 重复性试验 取同一批号(050705)样品0.25 g,共6份,精密称定,按样品测定项下的方法测定,测得样品中指标成分黄芩苷的含量,rsd2.12%,结果表明重复性良好。 3.10 加样回收率试验 取批号为050705的抗感冒颗粒0.25 g,精密称定6份,各精密加入浓度为29.76 g/ml的黄芩苷对照液2.5 ml,分别用与“3.3”项下相同的方法制得供试液。并用与“3.11”项下相同的方法测得样品中指标成分黄芩苷的含量,结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略） 3.11 样品测定 精密吸取各供试液10 l,注入液相色谱仪,分别进2针。采用标准曲线法定量,根据取样量和稀释度,计算含量,结果见表2。表2 样品含量测定结果（略） 由实验结果可知,仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好,符合定量要求。根据以上测定结果,暂定每1 g抗感冒颗粒中含黄芩以黄芩苷(c21h18o11)计,不得少于0.49 mg。 4 讨论 上述实验中,黄芩、甘草、桔梗的鉴别专属性强,重现性好,操作简便,故正式纳入抗感冒颗粒质量标准中；而荆芥、板蓝根的鉴别,因阴性有干扰,专属性不强