高效液相色谱法测定人血浆中二甲双胍的含量

1、高效液相色谱法测定人血浆中二甲双胍的含量 【摘要】 目的 建立测定人血浆中二甲双胍浓度的hplc-uv方法。 方法 采用高氯酸直接沉淀，测定血浆中二甲双胍的浓度。 结果 血浆中杂质不干扰样品峰，1.25、0.125及0.025g/ml的回收率分别为93.9%、92.6%及91.4%；1.250、0.25和0.025g/ml的日内变异分别为：1.33%、4.08%及7.94%；日间变异分别为：4.56%、2.78%及2.19%；线性范围0.01252.50g/ml，最低检测限0.0125g/ml；血浆中二甲双胍冻融试验稳定。 结论 该方法稳定且精密度好，准确可靠，适用于二甲双胍血浆浓度测定。 【

2、关键词】 二甲双胍；高效液相色谱法 二甲双胍（metformin）是双胍类口服降糖药，它主要作用于胰岛外组织，抑制肠吸收葡萄糖，增加外周组织对葡萄糖的利用，减少肝糖原异生，达到降血糖的目的，适合2型糖尿病患者。文献报道常用的检测方法是高效液相色谱法13，常用内标为阿替洛尔1，3。流动相常加入的离子对试剂，如十二烷基硫酸钠1、庚烷磺酸钠2和辛烷磺酸钠4。本文建立一种在流动相中加入十二烷基硫酸钠，采用高氯酸直接沉淀，测定其浓度的一种简易方法。 1 实验材料 1.1 试验药品及试剂 二甲双胍标准品：中国药品生物制品检定所提供。乙腈（色谱纯）：fisher company,inc,usa;其余试剂均为

3、市售分析纯。 1.2 仪器 shimadzu高效液相色谱仪：cbm-10a系统控制器；lc-10atvp泵；dgu-12a除气机；cto-10avp柱温箱；spd-12av紫外检测器；milli-q gradient a10超纯水器（millipore inc,usa)。 2 血浆中二甲双胍的hplc法测定 2.1 色谱条件 流动相由水相（4mmol/l十二烷基硫酸钠，0.02mol/l nah2po4，0.5%三乙胺，用h3po4调ph为4.0）-乙腈（74：26，v/v）组成，流速1.0ml/min；色谱柱为discovery ods 5.0m 4.6250mm i.d.;柱温箱温度40。

4、 2.2 血浆样品的提取与分离 取血浆0.5ml，加入0.1ml 30%高氯酸，振荡1min，离心（18000r/m10min),取20l进样，用样品的峰面积进行定量分析。 2.3 方法的专属性 在本试验条件下，盐酸二甲双胍有较大的色谱峰和较好的分离度，血浆中杂质不干扰样品峰，基线噪音小（sn3），盐酸二甲双胍的保留时间约为8.08min（见图1）。 2.4 血浆中二甲双胍标准工作曲线制备及其最低检测浓度测定 取空白血浆0.5ml，加不同量的标准品，使其浓度分别为0.0125、0.025、0.05、0.125、0.25、0.625、1.25和2.50g/ml，按“血浆样品的提取与分离”项下操作

5、，记录样品峰面积，利用样品浓度c对样品峰面积作直线回归，得回归方程a=54.608+47164 c，r=0.9999，（p3）、样品处理简单、成本较低等特点。所得二甲双胍色谱峰形对称且无肩峰，采用峰面积对浓度回归，相关性较好。最低定量限为0.0125g/ml,适用于二甲双胍血浆浓度测定。 【参考文献】 1 秦峰，雄志立，孙苏亚，等.盐酸二甲双胍片缓解片人体药代动力学及生物利用度.药物分析杂志，2005，25（3）：258-262. 2 厉伟兰,刘晓东,谢林,等.二甲双胍缓释片人体药代动力学及其相对生物利用度.江苏药学与临床研究,2006,14(2):4-7. 3 魏敏吉,吕媛,康子胜,等.复方盐酸二甲双胍片在健康人体的药代动力学和相对生物利用度.中国临床药理学杂志,2005,21(93)