血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书

1、血清碱性磷酸酶 ALP 磷酸对硝基苯酚法测定作 业 指 导 书1. 实验 原 理碱性磷酸 酶的活性由在 pH 值为 10.4 ，2- 氨基-2 甲 基 -1- 丙 醇 （ AMP） 存 在 的 情 况 下 测 量 p- 硝 基 - 磷 酸 苯 酯 （ pNPP） 的 转 换 速 率 决 定 。ALPpNPP + AMP pNP+AMP-PQ在 410/480nm 测 定 pNP 的 生 成 速 率 ， 它 与 标 本 中 ALP 的 活 性 成 正 比 。2. 标 本 采 集 与 处 理 ：2.1 病 人 准 备 ： 无 特 殊 要 求 。2.2 标 本 类 型 ： 标 本 最 好 是 无 溶

2、 血 的 血 清 或 肝 素 化 的 血浆。2.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来 。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。3. 标本存放：23天内的活性损失：1525 C保存： 10%;标本稳定性：48 C保存稳定7天；-20 C保存 至少可稳定 2 个月标本。如果分析延迟 8 小时以上， 最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清 值的显著降低。4. 标 本 运 输 ： 常 温 条 件 下 运 输5. 标 本 拒 收 标 准 ： 细 菌 污 染 的 不 能 做 测 定 。6. 实 验 材 料 ：6.1 上海奥林巴斯 ALP 测定试剂盒 试剂 1试 剂 26.1.1 试剂准备： 试剂为

3、即用式。6.1.2 试 剂 稳 定 性 与 贮 存 ： 原 试 剂 避 光 保 存 于 2 8C,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染， 不能继续使用。6.1.4 注意事项： 碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠， 避免 接触皮肤及粘膜。 反应过程中产生的 对硝基苯酚有毒 性， 切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。 若反应液与 皮肤或粘膜接触，请速用水冲洗。6.2 校 准 品 ： 使 用 奥 林 巴 斯 公 司 提 供 的 校 准 品 对 自 动 分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控 品 .SOP 文 件 。6.3 质 控 品 ： 参 见 生 化

4、 检 验 校 准 品 和 质 控 品 .SOP 文 件。7. 仪 器 ： 奥 林 巴 斯 AU2700 生 化 分 析 仪8. 操 作 步 骤8.1 项目基本参 数： 参见生化检验奥林巴斯 AU2700 生 化 分 析 仪 项 目 测 定 参 数 .SOP 文 件8.2 仪器操作步 骤： 参见生化检验奥林巴斯 AU2700 生 化 分 析 仪 操 作 规 程 .SOP 文 件9. 检 验 结 果 的 判 断 与 分 析10. 质量控制 ：在每一批标本中都应把非定值血清水 平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控 警 告 限 ， 3S 为 失 控 限 ， 绘 制 质 控 图 ， 判 断

5、是 否 在 控 。 质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法 ： 以 TruCal U 复合校准品 ALP 校准值 校准仪器后，在病人结果可报告范围 内 ，仪器直接报 告可靠的检测结果。不使 用 校准品进行 ALP 活 力检测，可以直接使 用 A/min 均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得 结 果 的 可靠性 不如使 用 校准品。 计 算 ALP 活 力的 计 算 因 子 见 下 ： A/min X 因子 =ALP 活力U/L底物起始的反应(37 C ) 样品起始的反应(37 C )05 nm3433275712. 参考值 范 围成年人4男性20 50 岁53128

6、U/L男性60 岁 以 上56119U/L女性20 50 岁4298U/L女性60 岁 以 上53141U/L儿 童 5男 性女 性130天75319U/L48406U/L1 个 月1岁82383U/L124 341U/L1 岁 3岁104 345U/L108 317U/L4 岁 6岁93309U/L96297U/L7 岁 9岁86315U/L69325U/L10 岁12岁42362U/L51 332U/L13 岁15岁74390U/L50162U/L16 岁18岁52171U/L47119U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所 差别。 根据好的实验室经验， 每个实验室应建立自己 的

7、参考值。13. 临 床 意 义 1,2： 碱 性 磷 酸 酶 （ ALP） 是 一 种 在 碱 性 条件下具有较强活性的水解酶， 并以多种形态存在于 血液中， 其大多来自骨骼的成骨细胞 和肝脏， 也来源 于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP生理 性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活 性增高。在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括 胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁 积。在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。在骨疾 病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲 状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力增14.14.114.2操作性能线性范围