人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段课件

1、人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应扩增多聚酶链式反应扩增DNA片段片段人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应（多聚酶链式反应（PCR）l1、概念：、概念：l又称为基因的体外扩增法，是一种在体外又称为基因的体外扩增法，是一种在体外快速扩增特定基因或快速扩增特定基因或DNA片段的技术，片段的技术，它能以极少少量的它能以极少少量的DNADNA为模板，在几小时为模板，在几小时内复制出上百万份的内复制出上百万份的DNADNA拷贝，能有效地拷贝，能有效地解决因为样品中解决因为样品中DNADNA含量太低而难以对样含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。品进行分析研究的

2、问题。人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段2、PCR原理l（1）DNA复制的条件：复制的条件：l模板模板亲代链亲代链l原料原料核苷酸核苷酸l能量能量ATPl酶酶解旋酶等解旋酶等l适宜的温度：适宜的温度：PCR仪自动调控仪自动调控l适宜的适宜的PH：用一定的缓冲溶液调节：用一定的缓冲溶液调节人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段l（2）参与的组分：）参与的组分：参与的组分参与的组分在在DNA复制中的作用复制中的作用解旋酶解旋酶打开打开DNA双链双链DNA母链母链提供提供DNA复制的模板复制的模板4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸合成子链的原料合成子链的原料DNA聚合酶聚合酶催化合成催化合成DN

3、A子链子链引物引物使使DNA聚合酶能够从引物的聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段l（3）DNA复制方向：复制方向：DNA聚合酶不能从头开始聚合酶不能从头开始合成合成DNA，而只能从，而只能从3端延伸端延伸DNA链，故链，故DNA复制需要引物。当引物与复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补母链通过碱基互补配对结合后，配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的聚合酶就能从引物的3端开始端开始延伸延伸DNA链，链，DNA的合成方向总是从子链的的合成方向总是从子链的5端端向向3端延伸。端延伸。人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段

4、l（4）DNA的热变性原理：在的热变性原理：在80100的温度的温度范围内，范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性；当温度缓慢降低后，开，这个过程称为变性；当温度缓慢降低后，两条彼此分离的两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，链又会重新结合成双链，这个过程称为复性。这个过程称为复性。人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段l（5）PCR反应的条件：反应的条件：l一定的缓冲溶液；一定的缓冲溶液；lDNA模板；模板；l分别与两条模板链相结合的两种引物；分别与两条模板链相结合的两种引物；l四种脱氧核苷酸；四种脱氧核苷酸；l耐热的耐热的DNA聚合酶

5、；聚合酶；l控制温度；控制温度；人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段3、PCR过程人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段3、PCR过程lDNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。数扩增。人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段配方及微量移液器人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段实验步骤准备准备好好PCR反应体系的配方反应体系的配方用微量用微量移液移液器按配方在往微器按配方在往微量离心管中加入各组分量离心管中加入各组分盖严盖

6、子，用手指轻轻盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁弹击管壁混合混合反应液反应液离心离心10分钟分钟将离心管放入将离心管放入PCR仪上，设仪上，设置好循环程序进行置好循环程序进行反应反应人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段实验操作循环程序人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段DNA含量的测定稀释稀释对照调零对照调零测定测定计算计算DNA含量（含量（ug）=50（260nm的的读数）读数） 稀释倍数稀释倍数人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段练习巩固1、关于、关于PCR技术的应用，错误的一项是技术的应用，错误的一项是A 古生物学、刑侦破案、古生物学、刑侦破案、DNA序列测定序列测定B 诊断

7、遗传疾病、基因克隆、古生物学诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学C DNA序列测定、基因克隆、刑侦破案序列测定、基因克隆、刑侦破案D 诊断遗传疾病、合成核苷酸、诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序序列测定列测定人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？哪一端延伸？3、PCR技术最突出的优点是技术最突出的优点是A 原理简单原理简单 B 原料易找原料易找C TaqDNA聚合酶有耐热性聚合酶有耐热性D 快速、高效、灵活、易于操作快速、高效、灵活、易于操作人教版教学教案多聚酶链式反应扩增DNA片段4、做、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液使用的微量离心管、