艾滋病筛查试验室标准操作程序SOP0001

1、标准操作程序（SOP艾滋病筛查实验室宾县人民医院艾滋病实验室标准操作程序（SOP）BXY Y_AIDS_SOP001抽血标准操作程序BXY Y_AIDS_SOP002酒精棉球的制备BXY Y_AIDS_SOP003样品接收登记处理程序BXY Y_AIDS_SOP004检测结果报告程序BXY Y_AIDS_SOP005HIV抗体筛查检测程序BXY Y_AIDS_SOP006废弃物处置和实验室消毒程序BXY Y_AIDS_SOP007检测数据的记录与保存程序BXY Y_AIDS_SOP008ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）BXY Y_AIDS_SOP009仪器保养维护校准程序BXY

2、Y_AIDS_SOP010微量可调移液器标准操作程序BXY Y_AIDS_SOP011实验室的消毒和处理程序BXY Y_AIDS_SOP012实验室质量控制程序BXY Y_AIDS_SOP013保密程序BXY Y_AIDS_SOP014实验室意外和事故处理程序BXY Y_AIDS_SOP015实验室安全防护程序BXY Y_AIDS_SOP016ELISA法HIV抗体检测操作程序（上海科华）BXYY AIDS SOP017酶标仪标准操作程序（Anthos 2010 ）BXYY_AIDS_SOP018 自动洗板机标准操作程序(Anthos Fluido )BXYY_AIDS_SOP019 生物安全

3、柜标准操作程序(Biobase BSC-1500 II A2 ) BXYY_AIDS_SOP020人类免疫缺陷病毒抗体操作程序(胶体金法)说明：1、艾滋病实验室标准操作程序(SOP )由各岗位工作人员起草，实验 室主任审定，并定期修订。2、 修订应该在实验室主任领导下进行，每年至少修订1次。3、 日常工作中，工作人员有义务随时发现并报告SOP文件中的不足和错 误，实验室主任组织调查核实后负责修订。4、所有实验室各岗位工作人员要在 SOP文件上签名，表示已经阅读并掌 握了有关内容。工作人员签名:编号:BXYY_AIDS_SOP2编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰标题

4、：酒精棉球的制备修订人：韩峰适用范围：需做血液检测的对象试剂与材料：碘酒、酒精棉、棉签、采血垫、橡胶止血带、注射器、试管、止血棉等操作步骤：1、核对被检者姓名，做好记录，并标记试管。2、请被检者入座，伸出手臂放在采血垫上。3、用橡胶止血带扎紧被检者手臂并请其握紧拳头。4、 选择静脉，用碘酒棉签在采血部位由里向外擦拭（直径6厘米）消毒5、用酒精棉脱碘。6、确认一次性注射器（真空采血管）合格后，当着被检者打开，在采血部 位穿刺静脉，抽取血液5毫升。7、放松止血带，拔出针头，请被检者用止血棉压迫止血8、将血液沿试管内壁缓慢注入。修订人：韩峰1、备脱脂棉球若干2、分别准备一个清洁磨口瓶和100ml量筒

5、或量杯，刷净，烤干。3、准备50Oml蒸馏水。4、 将上述脱脂棉球、磨口瓶、瓶盖和蒸馏水包好，用压力蒸汽121 C102.9Kpa(1.05kg/cm) 灭菌 20-3min。4、超净工作台紫外灯灭菌30min。5、无菌操作状态下，将灭好的脱脂棉球放入磨口瓶中备用。6、于无菌量筒中加75ml 95%医用酒精，再加20ml无菌蒸馏水至95ml(此时为95ml 75%酒精)7、将配好的75%酒精倒入装有无菌脱脂棉球的磨口瓶中，浸透，盖盖待编号:BXYY_AIDS_SOP3编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：样品接收登记处理程序适用范围：1、全县HIV抗

6、体筛查送检的HIV抗体标本2、其他医疗单位及个人委托的 HIV抗体筛查标本操作步骤：1、于样品接收登记本做好登记、获取编号。2、送检标本必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴 防护农的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。3、核对样品与“ HIV抗体送检单”编号、姓名是否相符，送检单应一式 两份，填写规范、完整，并加盖公章。对不规范送检单嘱其补填完整 或限时补送。4、检查样品血清量应不少于 3ml，过少者应嘱其立即补送。5、检查样品管应无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移 出，对样品管和盛器消毒，同时报告科室领导，并做好记录。6、检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污

7、染、血脂过多以及黄 疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受， 则应将样品安全废弃。 并要将样品情况立即通知送样人，并嘱其立即补。7、打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可 能 溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼 镜，以 防皮肤或粘膜污染。8、样品与送检单验收合格后，收样人应在送检单备注栏签收，并将复写 件交送检人带回存档。9、合格样品放置于待检台，立即检测。10、 对实验室自己采集的样品、最好将血液先自然存放1 2小时后，再 用3 000 rpm 离心15分钟，吸出上清液备用。11、如在几天内检测可放在28 C冰箱中。如要贮存，则置干-20 C

8、的低 温冰箱内。编号：BXYY_AIDS_SOP005编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰标题：HIV抗体筛查检测程序修订人：韩峰编号:BXYY_AIDS_SOP9编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：检测结果报告程序HIV抗体阴性：1、对HIV抗体筛查试验呈阴性反应者，详细填写“ HIV抗体筛查报告 一式复写两份。2、于“结论”处填写“ HIV抗体阴性”。3、检测者、审核者手写体签名，并加盖公章。4、“ HIV抗体筛查报告”当面交给自愿检测者或送检单位，接收报告者 于“备注”处签收后，原件存档，复写件交接收报告者。5、与

9、送检单位协商后，若“ HIV抗体筛查报告”为邮寄，则邮寄者应于“备注”处签字注明。原件寄出，复写件存档。HIV抗体待复查：1、对HIV抗体筛查试验呈阳性反应者进行免疫印迹（ WB ）试验。2、详细填写“ HIV抗体确认检测报告单”一式复写两份。于“结论”处 填写“ HIV-1抗体阳性（+）”、“ HIV抗体阴性（-）”或“ HIV抗 体不确定（士）”3、对“ HIV抗体不确定（士）”报告单的备注处填写“ 3个月后复检”。4、检测者、审核者手写体签名，并加盖公章。5、“ HIV抗体确认检测报告单”当面交给自愿检测者或送检单位，接收 报告者于“备注”处签收后，复写件存档，原件交接收报告者。6、若与

10、送检单位协商后，“ HIV抗体确认检测报告单”为邮寄，则邮寄 者应于“备注”处签字注明。原件寄出，复写件存档。7、同时上报疫情组。编号:BXYY_AIDS_SOP6编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰标题：废弃物处置和实验室消毒程序修订人：韩峰废弃物的处置：1、实验过程中产生的污染性液体物质，废弃的液体标本、血液等应小心 放 在盛有消毒液的严格防渗漏的专用容器中，并及时加盖。2、实验过程中所用的需废弃的，一次性吸头、吸管、离心管、平皿、个人防护用品和其它实验材料等放入防漏耐高压的袋内，扎口封平。3、 以上废弃物必须有专人尽责，避免过满并就地高压消毒，确保121 C至

11、 少30分钟。4、高压消毒后经传递窗传出半污染品，由专人送至专门集中焚烧处理。5、采集检验标本或接触装有检验标本的容器，应带手套，一次性使用的 手套用后放收集袋内，集中烧毁；可反复使用者用后放消毒液内集中 消毒；无手套可用纸套使皮肤不直接与容器表面接触，用后将纸套放 入污物袋内烧毁。6、盛标本的容器，若为一次性使用纸质容器及其外面包被的废纸，应焚毁；对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，可煮沸15min，可用1000mg/L有效氯的漂白粉澄清液或二氯异氰尿酸钠溶液浸泡 2-6h , 消毒液每日更换，消毒后用水洗净或流水刷洗、沥干。7、废弃标本及其容器应有专门密闭不漏水的污物袋 （箱）存放，专人集

12、中， 烧毁或消毒，每天至少处理一次。实验室消毒：1、废弃物缸：50O0mg/L次氯酸钠。2、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。3、溢出物：50O0mg/L 次氯酸钠。4、污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠，也可以用过氧化氢或过氧 乙酸。5、器械可用2 %戊二醛消毒。编号:BXYY_AIDS_SOP9编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰标题：检测数据的记录与保存程序修订人：韩峰1、按试验顺序，按送检标本编号逐一填写酶标检测原始记录。2、将试验结果记录于酶标检测原始记录。3、于酶标检测原始记录上详细记录试验方法、试剂厂家、出厂日 期、 失效日期、操作人

13、和试验日期。4、试验结束，将样品采集单、酶标检测原始记录、酶标仪机打记录单和传染病管理检验鉴定书装订成一档。标题：ELISA法HIV抗体检测操作程序（珠海丽珠）修订人：韩峰原理及用途：本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和H型（HIV-1 /HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白）包被的微孔板和酶标记的 HIV-l /HIV-2抗原及其它 试剂组成，应用双抗原夹心法原理（Sa ndwich ELISA）检测人血清或血浆中 的 HIV-1 /HIV-2 抗体。操作步骤：1. 将试剂盒平衡至窒温，取出所需的条板，剩余的即时圭寸存。2. 用去离子水或蒸馏水20倍稀释浓缩洗涤液。3. 将所需数量的

14、条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔。在样品孔中加入50ul待测样品，空白孔不加 任何液体，阴性、阳性对照孔分别加入50ul阴性或阳性对照，轻拍混匀。4. 置37 C水浴温育60分钟。5. 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干。（注：洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有60秒的浸泡时间。）6. 每孔加入50ul酶标记物（空白孔除外），轻拍混匀。7. 置37 C水浴温育30分钟。8. 将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干。（注：洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。采用洗板机时应设定每遍有60秒的浸泡

15、时间。）9. 每孔加入50ul底物缓冲液和50ul底物液，轻拍混匀置37 C避光温育30 分钟。10 .每孔加入50ul终止液终止显色反应。11 .用酶标仪单波长450nm(需设空白对照，并以空白对照孔调零)或双波长450nm /630nm测定各孔A值。结果判定1. 临界值(Cutoff)=O , 15+阴性对照平均A值2样品的A值Cut off值者为HIV抗体反应阳性。3样品的A值Cut off值者为HIV抗体反应阴性。4.正常时，阴性对照 A值应0.12，阳性对照A值应O.80，阴性对照值 若小于O.08以O.08计算。5若阳性对照A值超出正常范围或其孔问之差大于 30 %，应重复试验。6

16、初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送 HIV确认实验室做确认试验，确认报告阴 性者，血可以发放使用：凡确认实验阳性和可疑者，血不能发放使用， 统一送确认实验室处理。注意事项1. 本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIv初筛实验室。2. 整个HIV榆测必须符合全困艾滋病枪测工作规范，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套、穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。3. H1V-1 /HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。4. 样品、酶结合物溶液等应用加液器加注，并经常校对其准确性。编号：BXYY_AIDS_SOP10编写日期：

17、20071201修改日期：20101230编写人：韩峰5. 洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。修订人：韩峰6. 所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。7. 微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用；未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。8. 用于检测的样品应保持新鲜。9. 剩余样品及废弃物应经121 C高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/l。次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。10. 不同批号的试剂组份不可混用。11. 于28 C避光保存，有效期：12个月标题：仪器保养维护校准程序酶标读数仪、洗板机：1、每天：核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是

18、否有漏液。2、每周：清洁仪器表面，保护光学零件不沽灰尘。3、每月：检查洗涤时各孔与相应冲洗头对位良好，负压符合规定要求4、每年：检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点则要更换。根据仪器 内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留编号:BXYY_AIDS_SOP010编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰记录。移液器：1年至少应该标定1次，发现异常情况应随时进 行校准。范例用蒸馏水称量法标定移液器：在室温22 C无风的工作室中，在万分之一级别天平上放置一个小三角烧 瓶，用待校准的移液器吸取存放过夜的蒸馏水加入烧瓶底部，称重并计算蒸馏 水重量，

19、连续称重10次。加蒸馏水的量根据待校准移液器的规格而不同，10次校准称量均在要求的重量范围内为合格，贴上合格标签，注明校准日期，不 合格移液器要请生产厂家进行校准。填写和保存校准记录。称重法校准移液器方案移液器规格蒸馏水量要求重量范围0.510讪2讪1.752.25 mg540山10山9.810.2 mg40 200 口170山69.4 2 70.6 mg200 1000 山300山298.0 2 302.0 mg1 5ml2000 ol1990.0 2010.0 mg2 10ml3500 03485.0 2 3515.0 mg冰箱和孵育箱:必须每天检查和记录低温、超低温冰箱及孵育箱的温度，并

20、做好记录标题：微量可调移液器标准操作程序移液:1、移液前调节好所需容量数轮。2、将吸头装在吸引管上，推到套紧位置以保证密封。如单手操作，必须 配上96孔吸头架。3、垂直地握住移液器，将按钮按到第一停止点，并把吸液头浸入液面下 2-4cm，再缓慢松开按钮，等待l-2s后将移液器移出液面。4、将吸液头移至加样容器壁上，把按钮按到第一停止点，再继续按下按钮，排尽全部液体后，吸液头应沿容器壁向上滑几次，然后移走移液器, 松开按钮，使之复位。注意事项：1、为获得较好的精度，在取液时应先用吸液的方法浸渍吸头，以消除误 差。2、浓度大的液体消除误差的补偿量由试验确定，取液量可通过增加或减 少轮之读数加以补偿

21、。编号：BXYY_AIDS_SOP011编写日期：20071201标题：实验室的消毒和处理程序修改日期：20101230编写人：韩峰 修订人：韩峰工作区：1、清洁区、半污染区和污染区应分别进行常规清洁、消毒处理。2、清洁区若无明显污染，应每天开窗通风换气数次，湿式清洁台面、地 面1次，在每天开始工作前及结束工作后，台面、地面应用含有效氯 250mg/L的含氯消毒液各擦拭一次，空气选用循环风动态消毒法消毒 处理，废弃标本应分类进行消毒处理后排放。3、半污染区环境消毒同污染区。工作衣、帽每周换洗二次，拖鞋每天用含有效氯25Omg/L的含氯消毒剂浸泡或擦拭一次。所有清洁器材（抹 布、拖把、容器）不得

22、与污染区或半污染区共用。工作人员每次下班前 应用肥皂流水洗手1-2min。工作衣若有明显致病菌污染或从事烈性菌 标本检验后，应随时更换，及时进行消毒灭菌。检验单1、污染的检验单送出前，用便携式高强度紫外线消毒器距检验单面不高 于3.0cm缓慢移动，照射3-5s，必须两面照射。2、也可用经卫生部批准的专用甲醛消毒器熏蒸消毒。实验器材1、除已知无传染性器材外，凡直接接触或间接接触过污染性检验标本的 器材均视为具有传染性，应进行消毒处理。2、小的金属器材如接种环，用酒精灯烧灼灭菌。当接种环上有较多污染 物时，应先在火焰上方，把接种环烤干后再缓慢伸入火焰烧灼。3、 较大的金属器材或锐利的刀剪受污染后用

23、2%碱性或中性戊二醛溶液浸泡2h后，洁净水冲洗、沥干，再用干热或压力蒸汽灭菌。4、采集标本的器材如玻片、吸管和试管要做到一人一汾一用一消毒。污染的吸管、试管、滴管、离心管、玻片等，应立即浸入含1000ml/L含氯消毒剂中浸泡4h，再清洗干净、烘干；也可浸入洗涤剂或肥皂液 中煮沸l5-30min，反复洗刷，沥干，37-60 C烘干。5、一次性使用的塑料制品，如一次性注射器用后及时进行毁形、消毒， 薄膜手套用后放污物袋内集中进行无害化处理：耐热的塑料，如聚丙 聚碳酸酯、尼龙及聚四氟乙烯制的器材，可用肥皂或洗涤剂溶液煮沸 15-30min，洗净后，用压力蒸汽 121 C 102.9 Kpa 灭菌 2

24、0-30min。6、 不耐热的聚乙烯、聚苯乙烯，可用0.5 %过氧乙酸或l00Omg/L 有效 氯约溶液浸泡30-6Omin，再洗净，晾干；也可用环氧乙烷灭菌器灭 菌，800mg/L。于55-68 C和相对湿度6O % -80 %，作用6h ;若为 薄膜或板也可用高强度紫外消毒器照射l-3s。7、一般血清学反应使用过的塑料板可直接浸入 1 %盐酸溶液内2h以上或 过夜，冼净再用。8、 橡胶制品如手套、吸液管（球）受污染后可用肥皂或0.5 %洗涤剂溶液煮 沸15-30min，煮时吸液管（球）应全部浸入水内，清洗后晾干；必要时 用压力蒸汽，115 C灭菌40min。9、无纺布帽子、工作衣、口罩等用

25、后放污物袋内集中进行无害化处理； 棉质工作服、帽子、口罩、鞋套等放专用的污物袋内，送洗衣房清洗， 每周2次，有明显污染时，可随时用有效氯500mg/L的消毒液，作用 30-60min，或压力蒸汽 121 C 20min。10、 摇床、离心机、冼板机、酶标检测仪、冰箱、培养箱等局部轻度污 染, 可用2 %碱性或中性戊二醛溶液或 0.5 %醋酸氯已定-乙醇溶液擦拭； 污染严重时，可用环氧乙烷消毒。11、若离心时离心管未密闭，试管破裂、液体外溢，应消毒离心机内部。宜戴上手套用2%碱性或中性戊二醛溶液擦拭消毒，作用30-60min ,或整机用环氧乙烷消毒。手1、工作前、工作后或检验同类标本再检验另一类

26、标本前，均须用肥皂流 水洗手2-3min搓手使泡沫布满手背及指间至少10s，再用流水冲洗， 若手上有伤口，应戴手套接触标本。2、水龙头应用非手触式开关；肥皂应保持干燥或用瓶装液体肥皂，每次 使用时压出：冼手后采用红外线自动干手机将手吹干或用消毒纸巾、 纱布或毛巾擦干，不宜设置公用擦手巾。3、实验室工作人员应戴手套，当明显受致病菌污染，或从事有强传染性 病菌检验后，应立即用0.2 %过氧乙酸溶液或1000mg/L有效氯消毒 液浸泡3min然后用清水冲洗。编号：BXYY_AIDS_SOP14编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：试验室质量控制程序内部对照

27、：每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用外部对照：每一次实验必须使用外部对照质控血清。以便监控实验的重复性和稳定 性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。质控图的绘制：1、 在常规条件下，对同一批血清连续测定2O次（天）或以上，获得一组 S/CO值，求均数（x）和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。2、将均值（x）和标准差（s）分别标示在质控框架图中。以 S/CO值作纵座标 （Y轴），将每一次（天）试验结果作横座标（x轴），绘制质控图。3、从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中， 检验进入质控状态。质控规则及使用实验室在报告

28、实验结果之前必须评价质控数据，常用的是12s和13s规则。1、告警（12s）:当外部对照的S/CO值超出x 2 s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。2、失控（13s）:当外部对照的S/CO值超出x 3s范围时，系统处于失控 状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部 对照滴度下降造成。3、位移：连续几次（3-5次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位 移，提示实验条件发生了较大的变化。4、趋势：连续几次（5-7次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称 为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。标题：保密程序修订人：韩峰1、HIV抗体初筛实验

29、室（含初筛中心实验室）检测的阳性结果不是最终结果，应及时作进一步确认，初筛实验室不能出具HIV抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。2、HIV抗体确证实验室要由专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档 案。3、不得擅自修改和销毁档案材料。4、严格遵守保密制度，未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或 单位提供任何情况。5、HIV抗体确认实验室确认的阳性结果，以机密级向送检单位出具阳性 报告。6、送检单位接到阳性报告后，应报告当地疾控和卫生行政部门。7、在对阳性者告知检测结果时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。8、所有经确认的阳性标本，严格按HIV抗体阳性血清保存程序保存 时间至少20年

30、。9、实验原始记录表、打印数据、免疫印迹试验的膜反应条带或其照片、 检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等 都应该妥善存档保存20年以上。最好同时使用计算机保存各种文件和 记录。标题：实验室意外和事故处理程序修订人：韩峰实验室事故和意外的概念1. 意外：是指发生了未导致个人伤害偶然发生的危险，但也可能已经发生了伤害；事故是指发生了人身伤害。意外和事故都可被分为小型的和重 大的2. 小型意外：如少量潜在传染性物质漏到椅子上等，有效处理措施是消毒 污染处。3重大意外：任何情况下，如果怀疑有严重性的意外，都将被视为重要的, 实验室必须被清空，锁上并且实验室管理者要请教安全专家

31、，听从他们 的意见。4. 小型事故：因为感染性因子的特性，任何一种小的损伤，包括皮肤的破 损或刺伤等可能与传染性物质接触，必须用肥皂和水冲洗，尽可能挤出 损伤处的血液，使用70 %乙醇或其他皮肤消毒剂，立即进行医疗处理。5重大事故：指的是严重损伤或暴露。实验室安全事故和意外一、病原体污染1. 皮肤污染：污染部位用清水或肥皂水冲洗，并选用适当消毒剂浸泡，如75 %酒精，浸泡时间视污染的病原体参照消毒剂说明进行。2. 粘膜暴露：应立即用生理盐水冲洗干净，口服抗生素。3. 损伤：包括皮肤破损、刺伤、切割伤，只要情况允许，应首先反复轻轻挤压伤口，尽可能挤出损伤处的血液，然后用大量清水清洗伤口，并用 消

32、毒液（对伤口无刺激或刺激小的，如 75 %酒精，0.5 %碘伏）浸泡或涂 抹消毒，并包扎伤口，视情况可采取停止工作医学观察或到正规医疗机 构。4. 眼睛溅入液体：立即到洗眼台，用生理盐水冲洗，避免揉擦眼睛，连续冲洗至少10分钟5. 衣物污染：（1）尽快脱掉隔离服以防止接触其他地方和皮肤，脱掉防护手 套，洗手并更换隔离服和手套。（2）将已污染的隔离服和手套放入指定消毒袋，封好立即消毒处理。（3）对污染处消毒。二、打碎或溅出传染性物质（包括培养物）1. 污染了感染性物质的破碎物品，包括小瓶或容器以及包括培养物在内的 感染性物质溅出，应该先用一块布或纸巾盖上，再把消毒剂倒到上面， 至少静置30分钟，

33、然后才可把布和纸巾及打碎的物品清理走。2玻璃碎片应用镊子夹取，污染区应用消毒剂拖干净。3. 如果使用了清理打碎器皿的收集工具，应该将其高压或放在消毒剂里浸泡24小时。4. 布，纸巾和清理用的拖布应放到盛装污染废弃物的容器里。5. 所有以上这些步骤均应戴手套进行。6. 如果实验室的表格或其它打印的或手写的材料被污染了，应把这些材料的内容抄到另外的表格上，并把原件丢到盛装污染废弃物的容器里。三、接触过被感染性物质污染的试验人员，如存在被感染可能，应进行适 当的医学或隔离观察。实验室意外事故一、仪器设备故障1. 如发生仪器故障，应及时报告科主任，并报有关部门维修。仪器运出前应彻底消毒。修理冰箱、培养

34、箱时，应取出所有物品，放入备用设备中, 用消毒剂彻底消毒内表面及外表面。若维修人员必须进入实验区，则应 按要求穿戴防护用品，维修工作结束，所用工具在带出实验室前应严格 消毒。实验室人员必须帮助和监控维修过程。2. 出现以上异常情况而影响到实验结果，应停止实验待恢复正常后重新测 试，原测试步骤作废。二、在离心机里含有潜在危险物的离心管破裂1. 当离心机正在运行时离心管发生了破裂或怀疑破裂时，应关闭动力并且保持离心机盖子关闭30分钟。如果在机器停止运行后发生了破裂，离 心机盖应立即关闭并保持30分钟。2. 报告所长或实验室主任。3. 清理过程中，除要戴一次性手套外，再戴一双结实的厚胶皮手套，夹取碎

35、片时要用镊子或垫着棉花的镊子。4. 所有打破的管子、玻璃碎片、桶、套管及转轴都应该放到对该种微生物有效的无腐蚀性的消毒剂里，放置 24小时后并高压。未破碎的有盖的 管子可单独放到含有消毒剂的容器里， 60分钟后再开盖。离心杯应使 用适当浓度的同种消毒剂擦拭。三、误污染的事故处理1. 紧急处理措施发生意外事故时，应立即进行紧急处理，并报告实验室负责人，根据具 体情况采用相应的方法。（1 ）皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出 损伤处的血液，用70%乙醇或其他消毒剂消毒伤口。（2 ）皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，用适当的消毒剂浸泡，如 70%乙醇或其他皮肤消毒剂。（3）粘膜

36、污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。（4）衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。（5 ）污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处 理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和 安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。2. 事故登记（1 ）事故发生的时间、地点及详细经过。（2）暴露方式；受伤部位、伤口深浅、暴露程度；污染物种类（培养液、血液或其他体液）以及其中含有 HIV的情况。（3 ）处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。（4）是否采用暴露后药物预防，详细记录用药情况、包括首次用药时 间、服药方案和毒副作用。（5 ）随访检测的

37、日期、项目和结果。3. 报告和检测（1 ）发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报 告。同时抽血检测HIV抗体，暴露一年内要定期检测。（2 ）发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家，检测同前4. HIV职业暴露后的药物预防标题：实验室安全防护程序编号：BXYY_AIDS_SOP015编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰穿脱防护服1、进入艾滋病实验室先于清洁区内更换白服和专用的工作鞋，鞋面覆盖 足背，鞋底防滑。戴好一次性手套。2、当含有HIV的液体及有可能溅到工作人员时，应穿好防渗透性的 （如塑 料）围裙、戴

38、好一次性口罩，和安全防护眼镜。3、离开实验室时污染区时，应脱去防护服、摘掉一次性手套、口罩、眼 镜等。4、每次穿过的污染的防护服应及时放入污衣袋中，待消毒后方可冼涤或 废弃。5、离开实验室时，于清洁区更换白服、工作鞋。实验室的安全操作1、禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室的所有液体。2、操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。对大量溅出的浓度高的 传染物在清洁之前应先用1 %次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。3、 工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面应当用0.1 % 0. 2 %次氯 酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥 2 0tmi n以上。4、工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作

39、衣，用肥皂和流动水洗手。5、尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器。如果必须使用， 在处理或清洗时应米取措施，并应对用过的物品进行消毒处理。6、尽量使用安全针具米血。7、应将用过的锐器直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，针头直接放入坚固 的容器内，消毒后废弃。禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。 禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。8、污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒编号：BXYY_AIDS_SOP016编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：ELISA法HIV抗体检测操作程序（上海科华）原理及用途本品系用HIV-1/HIV

40、-2 特异性抗原包被微孔反应板，用HIV-1/HIV-2 抗原标 记辣根过氧化物酶，采用双抗原夹心法检测人血清、血浆样本中的HIV-1/HIV-2 抗体。操作步骤1. 配制工作浓度洗涤液（以纯化水做25倍稀释，例：量取480ml纯化水,加入20ml洗涤液，充分混匀后，成500ml工作浓度洗涤液，待用）。2. 根据试验要求，选择一定量的反应板条待用。3. 每次实验均须设立抗-HIV1阳性对照2孔（每孔100讪），抗-HIV2阳性对照1孔（100讪），抗-HIV阴性对照1孔（100讪）。预留空白对照1孔（不 加加样品和酶结合物，只加底物和终止液），剩余各孔加待测标本 100 gl4. 用封片纸覆盖

41、反应板后，置37 C孵育60分钟。5. 取出已孵育完毕的反应板，弃去封片纸，洗涤反应板5次。洗板机洗板：选择洗涤5次程序，用步骤1配制的工作浓度洗涤液注满各 孑L,每次工作浓度洗涤液在反应板微孔中的停留时间为30-60秒，并确保每次吸净无残留，洗完后在干净的吸水纸上拍干。6. 在已加入待测样本和阴性、阳性对照的孔中加入100讪酶结合物。混匀，用封片纸覆盖反应板，置37 C孵育30分钟.7. 洗涤同步骤5。8. 洗涤结束后立即在所有孔内加入显色剂 A、显色剂B各50 g,混匀。9. 在微孔振荡器上震荡10秒钟，或手工轻轻震荡10秒钟。10. 用封片纸覆盖反应板后，置37 C孵育30分钟.11.

42、在所有孔内加入50讪终止液，震荡反应板5秒钟，使之充分混匀。12. 在酶标读数仪中，取波长 450nm （建议使用双波长酶标仪比色，参考 波长630nm ），以空白对照孔校零，读取每孔 OD值（加终止液后， 务必在10分钟内读数）。结果判定1. 抗HIV阳性对照OD值0.8，抗HIV阴性对照OD值0.08。2. 样品的OD值Cut off值者为HIV抗体反应阳性。3. 样品的0D值Cut off值者为HIV抗体反应阴性。4. 正常时，阴性对照 A值应0.12，阳性对照A值应0.80，阴性对照值若小于0.08以0.08计算。5. 初次试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要

43、求，须将血样或重新采血送 HIV确认实验室做确认试验，确认报告 阴性者，血可以发放使用：凡确认实验阳性和可疑者，血不能发放使用， 统一送确认实验室处理。注意事项1. 本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIv初筛实验室。2. 整个HIV榆测必须符合全困艾滋病枪测工作规范，严格防止交叉感染。操作时必须戴手套、穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。3. H1V-1 /HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。4. 样品、酶结合物溶液等应用加液器加注，并经常校对其准确性。5. 洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。6. 所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。7.

44、 微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用；未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。8. 用于检测的样品应保持新鲜。9. 剩余样品及废弃物应经121 C高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.Og/l。次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。10. 不同批号的试剂组份不可混用。11. 于28C避光保存，有效期：12个月。编号：BXYY_AIDS_SOP017编写日期：20071201 修改日期：20101230 编写人：韩峰 修订人：韩峰标题：酶标仪标准操作程序(RT6000)目的用于ELISA试验吸光度的测定。适用范围波长400750nm的吸光度测定。原理1. 酶标仪测定的原理是在特定波长

45、下，检测被检测物的吸光值。光穿过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同 一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。2. 每一种物质都有其特定波长，此波长下，此物质能够吸收最多能量，如果选择其他波长段，就会造成检测结果不准确。因此，在测定检测物时, 我们选择特定波长进行检测，称为检测波长。但是，干涉滤光片的波长 公差在2nm之间，这会在一定程度上造成结果的不准确，因此我们再 选择一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的 吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除由于波长公差的 影响代带的不准确。3. 本酶标仪会自动对酶标孔进行中心定位，以确保检

46、测光从酶标孔的中心位置穿过并计算，消除了酶标孔中液面的凹陷所带来的影响。4. 检测单位用OD值表示，OD是Optical Density(光密度)的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。酶标仪的检测器接收透过被检测物的光能 量，转换成二进位数字信号，最大为 4095。仪器定义在没有光源下的 透光值为0%，没有检测特的透光值为100%。则实际检测中，检测物 的透光值均在0%100%之间。计算方法根据Bouger-lambert-beer 法则，0D值与光强度成下述关系：E=OD=loglO/l（E:被吸收的光密度；10:在检测物之前的光强度；I:从被检测物出来的光强度。）OD=log（1/T）（ T

47、:检测物的透光值）T=（Meas-Min）/（Max-Min）（ Meas :检测的二进位数值； Min :在 0%的情况下检测的二进位数值；Max :在100%的情况下检测的二进位数 值。）技术要求1 .波长范围：400750nm2 .测量结果范围：03.3OD3 .测量结果分辩率：0.001OD4 .波长不稳定性：w 士 2nm5 .准确度：测量结果 1OD 时 v 1%，在 550nm、492nm、620nm 和 450nm波长下v 0.005OD6 .线性误差：v 士 0.5%和0.005OD （在0.12.5OD测量值之间时）7 .重复性：v 士 0.5% （测量结果在1OD时）操作

48、环境和条件1 .操作时环境温度：1540 C2 .操作时环境湿度：1585%操作步骤1 .编号流程图：（见附图1）2 .测量操作流程图：（见附图2）3 .查询及打印流程图：（见附图3）说明酶标仪是精密度很高的仪器，要经常保养。1 .如果不小心将试剂或液体洒在酶标仪上，立即用干布或吸水纸将液体擦干，以防止液体侵蚀仪器表面。编号：BXYY_AIDS_SOP018编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰2 .仪器的表面清洁，可以使用温和的家用清洁剂进行清洁。酶标板传送系统的周 围，用医用酒精擦拭。3 .仪器表面可用75%乙醇消毒。注意事项1 .水平放置仪器。2 .

49、酶标条放在酶标板上，不要过高或过低，避免酶标条卡板。3 .酶标板要平衡放置在载板架中间。4 .使用标准的96孔酶标板和配套的酶标条。5 .酶标仪工作时，不要用手接触酶标板载呆，也不要操作计算机6 .不要带电插拔仪器后部和计算机串口上的酶标仪连线。7 .注意防尘，不使用时盖上防尘罩。标题：自动洗板机标准操作程序(RT-3000)目的用于ELISA试验酶标板附着试剂的洗涤适用范围12针先头洗涤96孔酶标板。原理样品被分离剔除后，对附着的试剂进行洗涤。使用可更换的洗液对酶标板 进行洗涤，然后将废液排到废液瓶中。要此期间，样品的浓度将被稀释，直到没有诊断相关的剩余物质存在技术要求1. 加液数度：在30

50、0讪下，12针，V 2% CV2 .残液量：V 300讪/孔操作环境和条件1 .操作时环境温度：1540 C2 .操作时环境湿度：1575%操作步骤1 .用试剂洗液清洗洗板机清洗通道(1) 按上、下键，调至 Prime/rinse(2 )按+、-键，选AUTO，按Enter确认(3 )按+、-键，选Wash1 (假设为珠海丽珠试剂的洗液)， 认(4) 显示 Volume 50ml ，按 Enter 确认(5) 显示 Start Pri/Rinse，按 Enter 确认(6 )按键返回主画面2. 用试剂洗液洗板(1) 按上、下键，调至 Run procedure(2 )按+、-键，选择要使用的洗

51、板程序名称(预告储存)，按 认(3 )按+、-键，选择要清洗到酶标板的最后一排酶标条数，按 认3 .用蒸馏水清洗洗板机清洗通道(1) 按上、下键，调至 Prime/rinse(2 )按+、-键，选AUTO，按Enter确认(3) 按+、-键，选Rinse,按Enter确认Enter 确Enter 确Enter 确(4) 显示 Volume 50ml ，按 Enter 确认,按Enter确认(5) 显示 Start Pri/Rinse(6 )按键返回主画面说明1. 电源指示灯有3种状态：(1) 亮：表示仪器进入操作状态(2) 闪：表示仪器在开机自检过程中，出现问题。不能正常工作。(3) 不亮：表

52、示仪器无法工作。2 .洗涤之前：(1) 将蒸馏水或去离子水注入到洗液瓶中。(2) 在每个 WASH瓶中注入相应的洗液。(3) 在废液瓶中注入少量消毒液。3 .洗涤之后：(1) 用蒸馏水或去离子水对洗板机进行洗涤。(2) 关机后，仪器内部的洗液装置或洗头内部仍含有少量的蒸馏水，以防 止物体结晶。(3) 根据实验室安全标准，用去离子水对废液瓶进行洗涤处理。注意事项1 .每两个月，用含有2%SDS和100%酒精溶液的洗液对仪器内部系统进行清洗处理。2 .在更换洗头或超过一天未使用的情况下，应对清洗系统及时消毒。(1) 使用75%酒精。(2) 运行第3次内部清洗程序后，关闭电源，使消毒液存留在清洗系统

53、和 洗头中。(3) 静置30分钟后，在冲洗瓶中注入蒸馏水，打开电源，至少用 200ml 的蒸馏水对清洗系统和洗头进行洗涤。3 .仪器表面消毒(1) 使用75%酒精。(2 )仪器表面、附件盒都要消毒。4 .随时检查废液瓶中的废液，如果超出三分之二，应将瓶内废液倒出。5 .随时检查洗液瓶中的洗液，如果洗液很少时，应立即补充编号：BXYY_AIDS_SOP019编写日期：20071201修改日期：20101230编写人：韩峰修订人：韩峰标题：生物安全柜标准操作程序(CLASS n TYPEA2)性能及用途CLASS n TYPEA 2生物安全柜采用进口超高效过滤网(HEPA及ULPA), 过滤效果超

54、过 99.999% (ULPA 0.1 0.2 pm DOP , HEPA 0.3 DOP )。 本品为n级(层流)生物安全柜，是一种保护人员、产品和环境的通风安全柜。向内气流的前开口对人员起到保护作用，垂直向下的HEPA过滤层状气流可保护产品，HEPA过滤器过滤空气可保护环境。70%气体循环， 30气体由管道排放至废气通道，使工作空间洁净度达到100级。本室用HIV抗体确证实验室(二级生物安全)。操作方法1. 本生物安全柜上电初期会进行自我检测，如过滤达不到要求标准，设备会通过声光报警。2. 自检后，设备处于待机状态，等待操作者通过按键或遥控输入执行。3. 控制面板按键：(1) POWER :电源键，是设备的总电源。只有按下电源键后，才能执行 下一步的操作。否则，设备一直处于待机状态。(2) LIGHT :照明键，是照明灯管的控制按键，每按一次，照明灯管的状 态改变一次，即由亮变灭，由灭变亮。(3) KG:杀菌键，控制此外灯管的开关，每按一次，状态改变一次。(4) WM :风机工作，控制着风机的工作，第按一次，状态改变一次。(5) SOCKET：插座，上电初期，插座没电，需其通电，必须