实验七血红蛋白和血型的测定ppt课件

1、人体血红蛋白和血型的测定人体血红蛋白和血型的测定实验七实验七前言 血红蛋白是红细胞的主要成分，除作为血液缓冲物质而发扬作用外血红蛋白是红细胞的主要成分，除作为血液缓冲物质而发扬作用外，其功能是在肺部结合氧气，送到全身各组织并将组织中的二氧化碳送，其功能是在肺部结合氧气，送到全身各组织并将组织中的二氧化碳送到肺部而呼出体外。到肺部而呼出体外。 血红蛋白分子是一种血红蛋白分子是一种由亚铁血红素和珠蛋白结由亚铁血红素和珠蛋白结合而成的结合蛋白，由四合而成的结合蛋白，由四个亚基构成，分别为两个个亚基构成，分别为两个亚基和两个亚基和两个亚基。血亚基。血红蛋白的贮氧、运氧功能红蛋白的贮氧、运氧功能都是依托

2、血红素中的都是依托血红素中的Fe2+与与O2的配位结合，的配位结合，血红蛋白与氧结合是以协血红蛋白与氧结合是以协同效应方式进展的。同效应方式进展的。 n 除了运载氧与二氧化碳，血红蛋白还除了运载氧与二氧化碳，血红蛋白还可以一氧化碳、氰离子结合，结合的方可以一氧化碳、氰离子结合，结合的方式也与氧完全一样，所不同的只是结合式也与氧完全一样，所不同的只是结合的结实程度，一氧化碳、氰离子一旦和的结实程度，一氧化碳、氰离子一旦和血红蛋白结合就很难分开，这就是煤气血红蛋白结合就很难分开，这就是煤气中毒和氰化物中毒的原理。中毒和氰化物中毒的原理。 血红蛋白的含量与年龄、性别、营养情况和血红蛋白的含量与年龄、

3、性别、营养情况和生活环境等要素有关。生活环境等要素有关。 正常人与运发动正常人与运发动Hb含量没有明显差别。含量没有明显差别。 初生儿初生儿 170一一220g/L 婴儿婴儿 160一一200g/L 成年女性成年女性 110一一150g/L 成年男性成年男性 120一一160g/L Hb的含量对运发动的运动才干影响很大，的含量对运发动的运动才干影响很大，对耐力运发动的专项素质尤为重要，因此，定期对耐力运发动的专项素质尤为重要，因此，定期测定测定Hb的含量有助于了解运发动的营养、对负荷的含量有助于了解运发动的营养、对负荷的顺应及身体机能程度等情况。的顺应及身体机能程度等情况。 光是一种电磁波，白

4、光是由不同波长400760nm的电磁波按一定比例组成的混合光，经过棱镜可分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种颜色相延续的可见光谱。在白光的照射下，物体所以呈现特定的颜色，是由于物体对不同波长的光有选择性地吸收所致。不同物质由于其分子构造不同，对不同波长的光线的吸收才干也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸收光谱。 T=I/I0 其中：其中：T 透过率透过率 I0 入射光强度入射光强度 I 透射光强度透射光强度 A 吸光度吸光度 K 吸收系数吸收系数 L 溶液的光径长度溶液的光径长度 C 溶液的浓度溶液的浓度 分光光度分析技术的原理分光光度分析技术的原理n 绿 n 黄 青 n n n 橙 白

5、青蓝 n 红 蓝n 紫n 上图对应的两边互为互补光，如将互补的色光相混即产生白光。n 1. 分光光度法是利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质及其含量的方法。n 2.光投射到物体上可被物体吸收或反射，如该物体是透明的那么还有部分光可以透过。在白光照射下，物体所呈现特定的颜色，就是物体对不同波长的光有选择性的吸收所致。而溶液对某些波长的光的吸收极少而对其他波长的光吸收较多,那么溶液就呈现这种吸收较少且透过较多光的颜色(如：硫酸铜溶液对黄光吸收最强，对蓝光吸收最弱，故在白光的照射下该溶液呈现_) ，阐明任何有色溶液(或物体)都只对一种单色光有剧烈的吸收才干,而对其它波长的光吸收才干较弱。n 比色分析法的

6、根比色分析法的根本原理本原理 比色分析法就是利用被测有色溶液吸收最强的单色光进展比色测定的，这样才干得到最称心的结果。 当一束单色光经过某溶液时，溶液的吸光度A与吸光物质的浓度c及液层厚度L成正比，即溶液浓度越大，液层越厚，吸光越多 。朗伯比尔定律：O.D=KLCO.D=溶液的吸光度A 光密度L=光径光经过溶液的间隔，既比色杯的厚度C=样品浓度mol/LK=摩尔吸光系数。它表示物质的浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。其单位为L/molcm 朗伯比尔定律是比色分析方法的根本原理。n 试剂： (1)HiCN稀释液有毒 注：高铁氰化钾法测定血红蛋白比较准确、稳定，是目前国家成认的

7、规范，但试剂中有氰化物，剧毒，在实验进展过程中防止污染，实验终了后留意药品的处置，不能乱倒 (2)75%的酒精仪器： 722分光光度计、半自动生化分析仪、一次性采血安装、一次性采血管20微升、消毒棉球、5毫升试管、移液管 采血部位必需无炎症、水肿、充血及循环妨碍。成人以无名指为宜。采血部位必需无炎症、水肿、充血及循环妨碍。成人以无名指为宜。 被采血手指的手臂下垂被采血手指的手臂下垂1 1分钟左右，悄然按摩采血部位，使其自然充血，分钟左右，悄然按摩采血部位，使其自然充血，用用7575酒精棉球消毒部分皮肤，待干。酒精棉球消毒部分皮肤，待干。 紧控刺血部位，用采血针穿刺取血，动作应迅速，深度约紧控刺

8、血部位，用采血针穿刺取血，动作应迅速，深度约2-3mm2-3mm，细，细微挤压，以血液能流出为宜。微挤压，以血液能流出为宜。 干棉球擦去第一滴血，毛细吸管准确吸血干棉球擦去第一滴血，毛细吸管准确吸血20 l20 l (5) (5)采血终了，用干棉球压住伤口，血止为止。采血终了，用干棉球压住伤口，血止为止。 (6) (6)拭净毛细管外壁血迹，参与试管中，并将毛细吸血管反复吸洗，混匀拭净毛细管外壁血迹，参与试管中，并将毛细吸血管反复吸洗，混匀 1 2 3 4 5 6 7 8 1 光源光源 2 聚光透镜聚光透镜 3 色散棱镜色散棱镜 4狭缝狭缝 5比色杯比色杯 6 光门光门 7 光电管光电管 8 检

9、流计检流计5 5移入待测溶液，显示值即为样品的移入待测溶液，显示值即为样品的吸光度吸光度A A值。值。电源开关电源开关选择开关选择开关722型分光光度计型分光光度计波长手轮波长手轮0%T旋钮旋钮100%T旋旋钮钮比色杯皿比色杯皿样品室样品室 采血时，采血针应一人一针，严防交叉感染。采血时，采血针应一人一针，严防交叉感染。 第一滴血弃去不用为什么？第一滴血弃去不用为什么？ 3. 3. 毛细吸管吸血时，防止气泡吸入。否那么会使测定结毛细吸管吸血时，防止气泡吸入。否那么会使测定结果偏低。假设有气泡产生，请运用干棉签吸之果偏低。假设有气泡产生，请运用干棉签吸之 。 4. 4. 采血时，动作应迅速，否那

10、么易发生凝血景象。采血时，动作应迅速，否那么易发生凝血景象。 5. 5. 配制好的配制好的HiCNHiCN稀释液中因氰化钾含量低，毒性不是稀释液中因氰化钾含量低，毒性不是很大，但仍应妥善保管。测定后的废液不能与酸性溶液很大，但仍应妥善保管。测定后的废液不能与酸性溶液混合，由于氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。为防混合，由于氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。为防止氰化钾污染环境，比色测定后的废液集中于广口瓶中，止氰化钾污染环境，比色测定后的废液集中于广口瓶中，可用除毒液除毒。可用除毒液除毒。 本卷须知本卷须知血红蛋白血红蛋白mol/L= 测定管光密度测定管光密度/摩尔吸光系数液层摩尔吸光系数液层

11、光程光程)血红蛋白血红蛋白g/L= 测定管光密度测定管光密度 血红蛋白分子量血红蛋白分子量/摩尔吸光系数液层光程摩尔吸光系数液层光程) 稀释倍数稀释倍数 =测定管光密度测定管光密度64456/44000251 = 测定管光密度测定管光密度 367.7式中：式中： 164456是目前国际公认的血红蛋白分子量。是目前国际公认的血红蛋白分子量。 244000 是国际血液学规范化委员会公布的血红蛋白摩是国际血液学规范化委员会公布的血红蛋白摩尔吸光系数。尔吸光系数。 3251是血样稀释倍数。是血样稀释倍数。 Hb在运动实际中的运用：在运动实际中的运用： Hb目的主要用于评定某个训练周期或阶段，如根据目的

12、主要用于评定某个训练周期或阶段，如根据1-2周周时间内运发动对运动量和运动强度的反响来评定运发动的机能时间内运发动对运动量和运动强度的反响来评定运发动的机能形状等。形状等。 Hb在运动训练中的变化是多要素综协作用的结果，如仅从在运动训练中的变化是多要素综协作用的结果，如仅从运动负荷的影响看，大运动量训练期间系统测试血红蛋白，能运动负荷的影响看，大运动量训练期间系统测试血红蛋白，能够会出现以下三种类型：够会出现以下三种类型：1训练初训练初Hb下降，经一段训练后，下降，经一段训练后，Hb又逐渐上升。又逐渐上升。2训练初训练初Hb下降，经一段训练后，一直未出现上升。下降，经一段训练后，一直未出现上升

13、。3训练期间，训练期间， Hb无显著变化。无显著变化。 1表示运动量安排适宜；表示运动量安排适宜；2、3那么分别由于那么分别由于运动量过大，过小而未能出现血红蛋白的正常变化趋势。因此，运动量过大，过小而未能出现血红蛋白的正常变化趋势。因此，测试测试Hb的含量，对于评定运发动的机能形状和运动训练程度的含量，对于评定运发动的机能形状和运动训练程度等具有重要的意义。等具有重要的意义。 二二ABO血型的鉴定血型的鉴定血型的概念：是指血细胞上特异凝集原血型的概念：是指血细胞上特异凝集原的类型。的类型。 ABO血型的分类根据血型的分类根据血型血型 红细胞上的凝集原红细胞上的凝集原血清中的凝集素血清中的凝集

14、素 AA 抗抗B BB 抗抗A ABA、B 无无 O无无 抗抗A、抗、抗B 备注：红细胞外表上含凝集原，血清中含凝集素备注：红细胞外表上含凝集原，血清中含凝集素一实验目的原理：一实验目的原理： 经过用规范血型抗体对红细胞膜上经过用规范血型抗体对红细胞膜上ABO系统血型抗原的鉴定，掌握系统血型抗原的鉴定，掌握ABO系统定型的系统定型的根本操作方法，判读技艺。根本操作方法，判读技艺。 根据根据lgM类特异性血型抗体与红细胞上类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合可以出现凝集反响的原理。特异性抗原结合可以出现凝集反响的原理。即：凝集原与其相对应的凝集素相遇时将会即：凝集原与其相对应的凝集素相遇时将会发生凝集反响发生凝集反响 例如：例如： 凝集原凝集原A+抗抗A 凝集反凝集反响响ABO血型的测定血型的测定抗抗B血清血清A 型B 型AB 型O 型抗抗A血清血清n二实验器材：二实验器材：n 采血器具、玻片、玻棒、抗采血器具、玻片、玻棒、抗A抗抗B血型血型定型试剂定型试剂n三实验步骤：玻片法三实验步骤：玻片法n1.在白纸上分别注明在白纸上分别注明“抗抗A“抗抗B字字样，并放上玻片，分别滴样，并放上玻片，分别滴12滴血型定滴血型定型剂；型剂；2.采血，与前一实验同期进展，用玻棒两端各蘸取12滴血分别与抗A抗B血型定型剂搅匀，定置。3.察看能否有凝块并判别血型。n本卷须知：本卷须知：n